分离-沉淀法表4-3沉淀分离方法+沉淀分离方法+分离原理利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性,通过在酶液中添加盐析沉淀法+一定浓度的中性盐,使酶或杂质从溶液中沉淀析出,从而使酶与杂质分离利用两性电解质在等电点时溶解度最低,根据不同的两性电解质,其等电点不等电点沉淀法+同的特性,调节溶液的pH值,使酶或杂质沉淀析出,从而使酶与杂质分离利用酶与其他杂质在有机溶剂中的溶解度不同,通过添加一定量的某种有机溶有机溶剂沉淀法+剂,使酶或杂质沉淀析出,从而使酶与杂质分离在酶液中加入某种物质,使它与酶形成复合物而沉淀下来,从而使与杂质分复合沉淀沉淀法+离选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀,而不影响所需的酶,从而选择性变性沉淀法使酶与杂质分离+(引自《酶工程》P100.郭勇.科学出版社2005.8)
分离-沉淀法
分离-层析法表4-5层析分离方法+层析方法分离依据吸附层析利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物中各组分分离分配层析利用各组分在两相中的分配系数不同而使各组分分离离子交换层析利用离子交换剂上的可解离基团对各种离子的亲和力不同而达到分离的目的凝胶层析以各种多孔凝胶为固相,利用流动相中各组分的相对分子质量不同而使各组分分离亲和层析利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力,使生物分子分离纯化层析聚焦层析将酶等两性物质的等电点特性与离子交换层析的特性结合在一起,实现组分离(引自《酶工程》P101.郭勇.科学出版社2005.8)+
分离-层析法
5、酶活力的保护1、保持低温2、使用温和的操作条件3、使用保护试剂,例如金属螯合剂、疏基试剂拮抗酶、蛋白酶抑制剂等4、缩短时间
5、酶活力的保护 1、保持低温 2、使用温和的操作条件 3、使用保护试剂,例如金属螯合剂、巯基试 剂拮抗酶、蛋白酶抑制剂等 4、缩短时间
6、纯化步骤的评估评估指标:1、计算总活力,并用回收率评估纯化过程中酶的损失总活力=(活力单位数/mL酶样品)×总体积(mL)回收率(产率)=纯化后总活力/粗提物总活力×100%2、计算比活力,并用纯化倍数评估纯化方法的效率纯化倍数=纯化后比活力/粗提物比活力
6、纯化步骤的评估 评估指标: 1、计算总活力,并用回收率评估纯化过程中酶的损失 总活力 = (活力单位数/mL酶样品) × 总体积 (mL) 回收率 (产率) = 纯化后总活力/粗提物总活力 ×100% 2、计算比活力,并用纯化倍数评估纯化方法的效率 纯化倍数 = 纯化后比活力/粗提物比活力
二、酒酶应用?酶在实际生产生活中什么作用?
酶在实际生产生活中什么作用? 二、酶应用