乙醇脱氢酶>乙醛+NADH+H+乙醇+NAD+340nm肌酸激酶肌酸+ATP石磷酸肌酸+ADP+H+指示剂:百里酚蓝597nm
乙醇 + NAD+ 乙醛 + NADH + H+ 乙醇脱氢酶 340 nm 肌酸 + ATP 磷酸肌酸 + ADP + H+ 肌酸激酶 指示剂: 百里酚蓝 597 nm
4、酶的分离纯化因为绝大多数酶是蛋白质,因此酶的分离纯化就是蛋白质的分离纯化具体过程:选材-破碎-提取-分离纯化-酶活性测定
4、酶的分离纯化 因为绝大多数酶是蛋白质,因此酶的分离纯化就 是蛋白质的分离纯化 具体过程: 选材-破碎-提取-分离纯化-酶活性测定
破碎表4-1细胞破碎方法及原理分类细胞破碎方法+细胞破碎原理捣碎法研磨法机械破碎法通过机械运动产生的剪切力,使组织、细胞破碎,匀浆法?温度差破碎法+通过各种物理因索的作用,使组织、细胞的外层结物理破碎法压力差破碎法+构破坏,从而使细胞破碎超声波破碎法+添加有机溶剂+化学破碎法通过各种化学试剂对细胞膜的作用,使细胞破碎,添加表面活性剂+自溶法通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用,使酶促破碎法+外加酶制剂法+细胞外层结构破坏,而使细胞破碎(引自《酶工程》P96.郭勇.科学出版社.2005.8)
破碎
提取表4-2酶的主要提取方法+提取方法+用于提取的溶剂提取的酶的性质盐溶液提取0.02~0.5mo1/L的盐溶液+在低盐溶液中溶解度较大的酶酸溶液提取pH2~6的水溶液+在稀酸溶液中溶解度较大且稳定性较好的酶碱溶液提取pH8~12的水溶液在稀碱溶液中溶解度较大且稳定性较好的酶有机溶液提取可与水混溶的有机溶剂与脂类结合或含较多非极性基团的酶引自《酶工程》P99.郭勇.科学出版社.2005.8)
提取
分离-过滤法表4-4过滤的种类及特性类别截留的颗粒大小过滤介质截留的主要物质滤纸、滤布、纤维、多空酵母、霉菌、动物细胞、植物细胞粗滤>2μme陶瓷固形物等微滤细菌、灰尘等+微过滤、微孔陶瓷0.2~2μm超滤+20A至2μm超滤膜?病毒、生物大分子等<20A反渗透反渗透膜生物小分子、盐、离子等(引自《酶工程》P101.郭勇.科学出版社.2005.8)
分离-过滤法