COO(三)化学性质H,N-C—HR1. α-氨基参加的反应2.α-羧基参加的反应3.α-氨基与α-羧基共同参加的反应4.侧链参加的反应
1. α-氨基参加的反应 2. α-羧基参加的反应 3. α-氨基与α-羧基共同参加的反应 4. 侧链参加的反应 (三)化学性质
COO1.α-氨氢基参加的反应H,NC—H(1)与亚硝酸反应R(2) 与甲醛的反应(3)与2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)反应(Sanger反应)(PITC)反应(Edman反应)(4) 与异硫氰酸苯酯(5)与荧光胺反应(6)形成Schiff碱(7)脱氨基反应
(1) 与亚硝酸反应 (2) 与甲醛的反应 (3) 与2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)反应(Sanger反应) (4) 与异硫氰酸苯酯(PITC)反应(Edman反应) (5) 与荧光胺反应 (6) 形成Schiff碱 (7) 脱氨基反应 1.α-氨基参加的反应:
(1)与亚硝酸反应:+ H,0R—CH-COOH + HNO2→ R—CH-COOH + N21OHNH2>伯胺与亚硝酸反应放出氮气>通过测定氮气的体积可计算氨基酸的含量,>此法称为范斯莱克法
(1) 与亚硝酸反应: Ø 伯胺与亚硝酸反应放出氮气; Ø 通过测定氮气的体积可计算氨基酸的含量; Ø 此法称为范斯莱克法
(2)与甲醛的反应:14BCOoCOO-12pK2= 9.60pKa210CH2CH,+H*I+8pHNH,NH2无甲醛6pK2~7HCHOA加有甲醛4CCOOCOO2pKa2= 2.34HCHO0CH2CH00.10.050.050.1NHCH,OHN(CH,OH)加入的Hmol数加入的OH-mol数7氨基酸与甲醛反应使氨基的pK,下降2-3个pH单位可用酚酰作指示剂,NaOH滴定测定游离氨基的含量;>此法主要是无合适的指示剂;>此法用来判断蛋白质水解和合成的程度
(2) 与甲醛的反应: Ø 氨基酸与甲醛反应使氨基的pKa下降2-3个pH单位, Ø 可用酚酞作指示剂,NaOH滴定测定游离氨基的含量; Ø 此法主要是无合适的指示剂; Ø 此法用来判断蛋白质水解和合成的程度
(3) 的反应与2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)(Sanger反应)弱碱性+ HFNO2NO2RCHNHFRCHNH,+COOHCOOHONNO2DNP-氨基酸(黄色)DNFB>氨基酸的氨基与DNFB反应生成DNP-氨基酸>DNP-氨基酸极性变小,呈黄色,可通过与标准品比对鉴定>DNFB与多肽链N端氨基酸的氨基反应生成DNP-蛋白质>此法被Sanger鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸种类和数目
(3) 与2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)的反应 (Sanger反应): Ø氨基酸的氨基与DNFB反应生成DNP-氨基酸; ØDNP-氨基酸极性变小,呈黄色,可通过与标准品比对鉴定; ØDNFB与多肽链N端氨基酸的氨基反应生成DNP-蛋白质; Ø此法被Sanger鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸种类和数目。 (黄色)