42.若细胞色素C,β-乳球蛋白,一种未知蛋白质和血红蛋白用凝胶过滤分离时,其洗 脱液体积分别为118、5 与24m1,试问未知蛋白质的相对分子质量。(假定所有蛋白质 都是球形的,相对分子质量都在凝胶过滤的分级分离范围内。) 43用增加盐离子强度的方法,从指定的离子交换柱上洗脱下列蛋白质,指出它们被洗 脱下来的先后顺序,并说明其理由<br>(1)细胞色素C,溶菌酶,卵清蛋白,肌红蛋白(阴离 子交换柱)<br>(2)细胞色素C,胃蛋白酶,脲酶,血红蛋白(阳离子交换柱 44扼要解释为什么大多数球状蛋白质在溶液中具有下列性质。<bx>(1)在低pH时沉淀 br(2)当离子强度从零逐渐增加时,其溶解度开始增加,然后下降,最后出现沉淀。<b>(3) 在一定的离子强度下,达到等电点pH值时,表现出最小的溶解度。<br>(4)加热时沉淀。<brx(5) 加入一种可和水混溶的非极性溶剂减小其介质的介电常数,而导致溶解度的减小。<br>(6) 如果加入一种非极性强的溶剂,使介电常数大大地下降会导致变性 45凝胶过滤和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法均建筑在分子大小 的基础上,而且两种方法均采用交链的多聚物作为支持介质,为什么在凝胶过滤时,相对分 子质量小的蛋白质有较长的保留时间,而在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳时,它又“跑”得最
36 42.若细胞色素 C，β-乳球蛋白，一种未知蛋白质和血红蛋白用凝胶过滤分离时，其洗 脱液体积分别为 118、58、37 与 24m1，试问未知蛋白质的相对分子质量。(假定所有蛋白质 都是球形的，相对分子质量都在凝胶过滤的分级分离范围内。) 43.用增加盐离子强度的方法，从指定的离子交换柱上洗脱下列蛋白质，指出它们被洗 脱下来的先后顺序，并说明其理由<br>(1)细胞色素 C，溶菌酶，卵清蛋白，肌红蛋白(阴离 子交换柱)<br>(2)细胞色素 C，胃蛋白酶，脲酶，血红蛋白(阳离子交换柱) 44.扼要解释为什么大多数球状蛋白质在溶液中具有下列性质。<br>(1)在低 pH 时沉淀。 <br>(2)当离子强度从零逐渐增加时，其溶解度开始增加，然后下降，最后出现沉淀。<br>(3) 在一定的离子强度下，达到等电点 pH 值时，表现出最小的溶解度。<br>(4)加热时沉淀。<br>(5) 加入一种可和水混溶的非极性溶剂减小其介质的介电常数，而导致溶解度的减小。<br>(6) 如果加入一种非极性强的溶剂，使介电常数大大地下降会导致变性。 45.凝胶过滤和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法均建筑在分子大小 的基础上，而且两种方法均采用交链的多聚物作为支持介质，为什么在凝胶过滤时，相对分 子质量小的蛋白质有较长的保留时间，而在 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它又“跑”得最 快?
46在一抽提液中含有三种蛋白质其性质如下 <br>试设计一个方案来分离 蛋白质相对分子质量等电点 20000 8.5 2100 5000 纯化这三种蛋白质 47有一蛋白质,在某组织内含量较低,很难分离纯化,现已知其相对分子质量,并已 有该蛋白质的抗体,问哪些实验方法可以初步证实组织内的确含有该蛋白质? 六:计算题 计算下列溶液的pH值:(1). ImoI/LGly与0.05 mol/NAoh的等体积混合液 <br>(2)0.1 moI/LGly与0.05mol/HCl的等体积混合液。 2(1)欲配制100mlpH24,0.3mol/甘氨酸HC1缓冲液,需多少质量的甘氨酸(相对分 子质量75.07pka=2.4,plka2=9.6)和多少体积的1moHC?<br(2)欲配制1ml pH9.3,0.3molL甘氨酸-NaOH缓冲液,需多少质量的甘氨酸和多少体积的1 mol/L Naoh?
37 46.在一抽提液中含有三种蛋白质,其性质如下： <br> <br>试设计一个方案来分离 纯化这三种蛋白质。 47.有一蛋白质，在某组织内含量较低，很难分离纯化，现已知其相对分子质量，并已 有该蛋白质的抗体，问哪些实验方法可以初步证实组织内的确含有该蛋白质？ 六：计算题 1.计算下列溶液的 pH 值:(1)0.1mo1/L Gly 与 0.05mo1/L Na0H 的等体积混合液。 <br>(2)0.1mo1/L G1y 与 0.05mo1/L HC1 的等体积混合液。 2.(1)欲配制 100m1pH2.4，0.3mo1/L 甘氨酸-HC1 缓冲液，需多少质量的甘氨酸(相对分 子质量 75.07。 )和多少体积的 1mol/L HCl?<br>(2)欲配制 100ml pH9.3，0.3mo1/L 甘氨酸-Na0H 缓冲液，需多少质量的甘氨酸和多少体积的 1mol/L NaOH?
3制备1立升pH3.20.mol/甘氨酸缓冲溶液,需0.1mol甘氨酸盐酸盐 (CrH-CH2-C00H)和0.1mol甘氨酸CH2-C00)各多少? 4应该加多少克NaOH到500mL已经完全质子化的001mol/L组氨酸溶液中,才能配成 pH70的缓冲液?咪唑基pK=6.0,NaOH相对分子质量为40) 5(1)赖氨酸ε氨基的pKa为10.5,在pH95的赖氨酸稀溶液中,ε-氨基中有多少被质 子化?(以百分数表示)br>(2)谷氨酸y-羧基的pka为43,在pH50的谷氨酸稀溶液中,y 羧基中有多少去质子化?(以百分数表示) 6根据氨基酸的pK值,计算Ala,Glu和Lys的ple 7从袋鼠尾巴的胶原蛋白中分离得到一些脯氨酸的γ位的氢被某些基团取代的化合 物,它们的结构式和各解离基团的pka值如下,计算每种氨基酸的pl <br>(1)
38 3.制备 1 立升 pH3.2 0.1mo1/L 甘氨酸缓冲溶液，需 0.1mo1/L 甘氨酸盐酸盐 ( )和 0.1 mo1/L 甘氨酸( )各多少? 4.应该加多少克 Na0H 到 500mL 已经完全质子化的 0.01mol/L 组氨酸溶液中，才能配成 pH7.0 的缓冲液?(咪唑基 pK＝6.0，NaOH 相对分子质量为 40) 5.(1)赖氨酸ε-氨基的 pKa 为 10.5，在 pH9.5 的赖氨酸稀溶液中，ε-氨基中有多少被质 子化?(以百分数表示)<br>(2)谷氨酸γ-羧基的 pka 为 4.3，在 pH5.0 的谷氨酸稀溶液中，γ- 羧基中有多少去质子化？(以百分数表示) 6.根据氨基酸的 pK 值，计算 A1a，Glu 和 Lys 的 pI。 7.从袋鼠尾巴的胶原蛋白中分离得到一些脯氨酸的γ-位的氢被某些基团取代的化合 物，它们的结构式和各解离基团的 pka 值如下，计算每种氨基酸的 pI。 <br>(1)
羧基脯氨酸 基团 pha OOC-CH -CH 2 H CH-COO Q-CO0H 2.0 10.5 ￥-C0 3.8 r>(2) 氨基脯氨酸 H2N一CH 3 CH H2c CH -CO0 C-COOH 9.8 3) 巯基脯氨酸 Hs一C—CH H2C、OH-coo N H a-COOH g-NH2
39 <b r>(2) < br>(3)
80.1mol/的谷氨酸溶液处于它的等电点<br>(1)计算主要等电形式的的谷氨酸的近似 浓度<br>(2)计算完全质于化形式的谷氨酸的近似浓度<br>(3)在溶液中甚至浓度小到几乎没 有的,共有多少种形式? 9将丙氨酸溶液40ml调到pH8.O,然后向该溶液中加入过量的甲醛。当所得溶液用碱 反滴定至pH80时,消耗0.2 mol/NAoH溶液250ml。问起始溶液中丙氨酸的含量为多少 克 10.一种仅含L异亮氨酸和L苯丙氨酸的溶液,在25cm长的旋光管中,25℃测得旋光 度为-1.97°。当取此溶液100ml,调pH至80,并且用过量的甲醛处理后,需要用0.5moL NaOH668m1方能滴回到pH80。问原溶液中异亮氨酸和苯丙氨酸的摩尔浓度各为多少 1计算下列肽的等电点<br(1)天冬氨酰甘氨酸(末端 COOH pK=210,末端NH2pK 9.07,B- COOH pK=453)<br(2)谷胱甘肽(Glu末端 COOH pK=2.12, Gly a-C00lpK 3.53,末端NH2+pK=866,sHpK=962)brx(3)丙氨酰丙氨酰赖氨酰丙氨酸(末端 COOH pK 3.58,末端NHpK=801,ε-NH2+pK=1058)
40 8.0.1mo1/L 的谷氨酸溶液处于它的等电点<br>(1)计算主要等电形式的的谷氨酸的近似 浓度<br>(2)计算完全质于化形式的谷氨酸的近似浓度<br>(3)在溶液中甚至浓度小到几乎没 有的，共有多少种形式? 9.将丙氨酸溶液 400m1 调到 pH8.0，然后向该溶液中加入过量的甲醛。当所得溶液用碱 反滴定至 pH8.0 时，消耗 0.2mol/LNaOH 溶液 250m1。问起始溶液中丙氨酸的含量为多少 克？ 10.一种仅含 L-异亮氨酸和 L-苯丙氨酸的溶液，在 25cm 长的旋光管中，25℃测得旋光 度为-1.97°。当取此溶液 100ml，调 pH 至 8.0，并且用过量的甲醛处理后，需要用 0.5mol/L Na0H 66.8m1 方能滴回到 pH8.0。问原溶液中异亮氨酸和苯丙氨酸的摩尔浓度各为多少? 11.计算下列肽的等电点<br>(1)天冬氨酰甘氨酸(末端 C00H pK＝2.10，末端 pK＝ 9.07，β-COOH pK＝4.53)<br>(2)谷胱甘肽(G1u 末端 C00H pK＝2.12，G1y α-C00H pK＝ 3.53，末端 pK＝8.66，SH pK＝9.62)<br>(3)丙氨酰丙氨酰赖氨酰丙氨酸(末端 C00H pK ＝3.58，末端 pK＝8.01，ε- pK＝10.58)