紫外差光谱 在极性溶剂中,如果蛋白质中某种氨基酸残 基的λmax和大于自由存在的同一种氨基酸的 λmax和,说明这种氨基酸残基一定位于蛋白质 分子的内部,并被非极性氨基酸残基所包围。如 果蛋白质的紫外吸收光谱对溶剂的极性变化很敏 感,则产生max和变化的氨基酸残基一定位于 蛋白质分子表面
紫外差光谱 在极性溶剂中，如果蛋白质中某种氨基酸残 基的λmax和ε大于自由存在的同一种氨基酸的 λmax和ε，说明这种氨基酸残基一定位于蛋白质 分子的内部，并被非极性氨基酸残基所包围。如 果蛋白质的紫外吸收光谱对溶剂的极性变化很敏 感，则产生λmax和ε变化的氨基酸残基一定位于 蛋白质分子表面
Tyr在pH6和pH13的吸收光谱 在pH6的λ最大=274nm 在pHl3的λ最大=295mm 4000 2000 H13 250 290 310 λ(nm) 是否处于解离状态可以通过紫外吸收光谱测出
Tyr在pH6和pH13的吸收光谱 Tyr是否处于解离状态可以通过紫外吸收光谱测出
荧光测定 有些物质可以吸收某种波长的辐射,吸收的能 量少部分转变成热量,大部分在109~10-8秒内以 较长的波长发出辐射,这种发出的辐射称为荧光。 在蛋白质中,Trp和Tyr残基是主要的荧光基团, Phe残基也能发出荧光。它们的荧光λmax分别为 348nm、303nm和282nm。这些残基的微环境的不 同会导致λmax和的不同,根据其荧光变化可以得 知其所处的微环境
荧光测定 有些物质可以吸收某种波长的辐射，吸收的能 量少部分转变成热量，大部分在10－9～10－8秒内以 较长的波长发出辐射，这种发出的辐射称为荧光。 在蛋白质中，Trp和Tyr残基是主要的荧光基团， Phe残基也能发出荧光。它们的荧光λmax分别为 348nm、303nm和282nm。这些残基的微环境的不 同会导致λmax和ε的不同，根据其荧光变化可以得 知其所处的微环境
荧光分光光度计工作原理图 激发光 透射光 激发 单色器 荧光 光源 荧光 比色杯 单色器 探测器
荧光分光光度计工作原理图
酪氨酸的吸收光谱 与荧光光谱 荧光 喂做米 吸收 230250270290310330350370 波长/nm
酪氨酸的吸收光谱 与荧光光谱