(1)限制性内切酶的特征 ①具有严格的碱基专一性,有专一的识别 顺序、切点。 AAT EcoRI AATIIISTTAA
(1)限制性内切酶的特征 ① 具有严格的碱基专一性,有专一的识别 顺序、切点
② 粘性未端,平整末端。 Eco RI GAATTC G AATTC CTTAAG CTTAA G “Sticky” ends Sma I CCCGGG ccc GGG GGGCCC GGG ccc “Blunt ends” (2)限制性内切酶的命名 EcoRI E.coli (3)限制性内切酶举例
(3)限制性内切酶举例 (2)限制性内切酶的命名 EcoRI E.coli ② 粘性未端,平整末端
Endonuclease DNA sequence Cleavage products GATCC Bam HI GGATCC G “Sticky" CCTAGG CCTAG G ends Eco RI GAATTC G AATTC “Sticky" CTTAAG CTTAA G ends AAGCTT A AGCTT Hind III "Sticky" TTCGAA TTCGA A ends GG Hae III GGcC cc Blunt CCGG cc GG ends CTGCAG CTGCA G PstI "Sticky" GACGTC G ACGTC ends SmaI CCCGGG ccc GGG Blunt GGGCCC GGG ccc ends Some Endonucleases
5.非专一性核酸酶类(nonspecific nuclease) 介绍二种外切酶 (1)蛇毒磷酸二酯酶((venom phosphodiesterase) - 5'-核苷酸
5.非专一性核酸酶类(nonspecific nuclease) 介绍二种外切酶 (1)蛇毒磷酸二酯酶(venom phosphodiesterase) P P P P OH 5-核苷酸 P P P OH P OH +
蛇毒磷酸二酯酶对末端磷酸基有严格的要求 寡核苷酸 水解速度 回人小人 最快 圆人人 较慢,水解速度降低10倍 an卜a卜n▣ 最慢,几乎不作用,水解 速度再降低100倍
蛇毒磷酸二酯酶对末端磷酸基有严格的要求 寡核苷酸 水解速度 最快 较慢,水解速度降低10倍 最慢,几乎不作用,水解 速度再降低100倍 P P P P OH HO P P P OH HO P P P P