凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中，特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞 表面的糖基。通过与细胞表面的糖分子相连，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞的凝集。一种凝集素 只对某一种特异的糖基具有特异结合的能力，如马铃薯凝集素专一结合的是N乙酰氨基葡萄糖二聚 体和N乙酰氨基半乳糖。加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集作用。 另外，凝集素还具有多价结合的能力，能与荧光素、酶生物素、铁蛋白、胶体金结合而不影响 其生物活性，可用于光镜或电镜水平的免疫细胞化学研究。 三、实验仪器、材料和试剂 1仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管：镊子、解剖针、刀 片、吸水纸、擦镜纸、吸管、烧杯、量筒、恒温水浴锅、冰箱。 2.材料：士豆块茎，鸡（采血） 3试剂： (1)PBS缓冲液 称取7.2gNaC1,148gNaH2PO4,0.46gKH2P04,用蒸馏水定容至1000ml,调pH为7.2。 (2)0.9%NaCI 称取0.9 g NaCl,.加水定容至100ml。 四、实验方法与步骤 1.凝集素的制备： 用天平称取2g去皮土豆块茎，加10 ml PBS缓冲液，在烧杯中浸泡2h,浸出的粗提液中即含有士 豆凝集素。 2.5%鸡血红细胞的制备： A无菌方法取鸡血于烧杯中，加入抗凝剂，轻轻搅拌，防止血凝： B.用1.5ml的离心管取血液1ml,2000rpm,离心5min,用移液器轻轻吸取上清去除，加入1ml 生理盐水水洗5次。 C.在小试剂瓶中加入9.5m生理盐水，用移液器吸取500血红细胞加入小试剂瓶中，混匀，即 是5%的红细胞悬液。贴上标签备用。 3凝集反应现象：
凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中，特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞 表面的糖基。通过与细胞表面的糖分子相连，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞的凝集。一种凝集素 只对某一种特异的糖基具有特异结合的能力，如马铃薯凝集素专一结合的是N-乙酰氨基葡萄糖二聚 体和N-乙酰氨基半乳糖。加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集作用。 另外，凝集素还具有多价结合的能力，能与荧光素、酶生物素、铁蛋白、胶体金结合而不影响 其生物活性，可用于光镜或电镜水平的免疫细胞化学研究。 三、实验仪器、材料和试剂 1.仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管；镊子、解剖针、刀 片、吸水纸、擦镜纸、吸管、烧杯、量筒、恒温水浴锅、冰箱。 2.材料：土豆块茎，鸡（采血） 3.试剂： （1）PBS缓冲液 称取7.2g NaCl，1.48 g NaH PO ， 0.46 g KH PO ，用蒸馏水定容至1000 ml，调pH为7.2。 （2）0.9% NaCl 称取0.9 g NaCl，加水定容至100 ml。 四、实验方法与步骤 1. 凝集素的制备： 用天平称取2 g去皮土豆块茎，加10 ml PBS缓冲液，在烧杯中浸泡2 h，浸出的粗提液中即含有土 豆凝集素。 2. 5%鸡血红细胞的制备： A. 无菌方法取鸡血于烧杯中，加入抗凝剂，轻轻搅拌，防止血凝； B. 用1.5 ml的离心管取血液1 ml，2000 rpm，离心5 min，用移液器轻轻吸取上清去除，加入1 ml 生理盐水水洗5次。 C. 在小试剂瓶中加入9.5 ml生理盐水，用移液器吸取500 μl血红细胞加入小试剂瓶中，混匀，即 是5%的红细胞悬液。贴上标签备用。 3.凝集反应现象： 2 4 2 4
用滴管吸取红细胞悬液，在两片载玻片上各滴一滴，其中一片加一滴土豆凝集素，一片加一滴 PBS缓冲液（对照），充分混匀。静止20mn。盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。 红细胞凝集现象 五、注意事项 1从离心机内拿出离心管时切勿振荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓吹打，防止红细胞破裂。 2红细胞悬液放置一段时间会发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀。 六、结果与分析 1绘制加土豆凝集素和PBS缓冲液后红细胞的变化图，并发生凝集的分析原因。 实验三动物细胞的融合实验 一、实验目的 1.了解PEG诱导动物细胞融合的原理
用滴管吸取红细胞悬液，在两片载玻片上各滴一滴，其中一片加一滴土豆凝集素，一片加一滴 PBS缓冲液（对照），充分混匀。静止20 min。盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。 红细胞凝集现象 五、注意事项 1.从离心机内拿出离心管时切勿振荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓吹打，防止红细胞破裂。 2.红细胞悬液放置一段时间会发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀。 六、结果与分析 1.绘制加土豆凝集素和PBS缓冲液后红细胞的变化图，并发生凝集的分析原因。 实验三 动物细胞的融合实验 一、实验目的 1.了解PEG诱导动物细胞融合的原理；
2.掌握PEG诱导动物细胞融合的方法。 二、实验原理 细胞膜的流动性是细胞融合的基础。人工诱导动物细胞融合的方法有生物法、化学法和物理法。聚 乙二醇(PEG)分子首先引起细胞的集聚与黏连，能改变各类细胞的生物膜结构，使两细胞接触点 处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张 力作用，使细胞发生融合，胞质流通，最后形成融合细胞。 PEG的水溶性强，在液相介质中，其分子表面的醚键带有微弱的负电荷，在Ca+离子的参与 下，可将带正电的表面蛋白或带负电荷的糖蛋白通过C:2+桥相连，从而使细胞发生聚集、融合。在 50%PEG中，自由水消失，可导致细胞脱水而引起质膜结构变化和细胞融合 PEG用于细胞融合中的优点为：通用性强，可用于动、植物和微生物各种细胞：比仙台病毒等易 制备和控制：活性稳定，使用方便。 三、实验仪器、材料和试剂 1仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管：吸水纸、擦镜纸、吸 管、烧杯、量筒、恒温水浴锅、冰箱。 2材料：鸡血（采血）》 3试剂：PEG(MW4000),葡萄糖，柠檬酸钠，氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，酚红 (1)PBS缓冲液
2.掌握PEG诱导动物细胞融合的方法。 二、实验原理 细胞膜的流动性是细胞融合的基础。人工诱导动物细胞融合的方法有生物法、化学法和物理法。聚 乙二醇（ PEG ）分子首先引起细胞的集聚与黏连，能改变各类细胞的生物膜结构，使两细胞接触点 处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张 力作用，使细胞发生融合，胞质流通，最后形成融合细胞。 PEG的水溶性强，在液相介质中，其分子表面的醚键带有微弱的负电荷，在Ca 离子的参与 下，可将带正电的表面蛋白或带负电荷的糖蛋白通过Ca 桥相连，从而使细胞发生聚集、融合。在 50%PEG中，自由水消失，可导致细胞脱水而引起质膜结构变化和细胞融合。 PEG用于细胞融合中的优点为：通用性强，可用于动、植物和微生物各种细胞；比仙台病毒等易 制备和控制；活性稳定，使用方便。 三、实验仪器、材料和试剂 1.仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管；吸水纸、擦镜纸、吸 管、烧杯、量筒、恒温水浴锅、冰箱。 2.材料：鸡血（采血） 3.试剂：PEG（MW 4000），葡萄糖，柠檬酸钠，氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，酚红 （1）PBS缓冲液 2+ 2+
称取7.2gNaC1,1.48gNaH2P04,0.46gKH2P04,用蒸馏水定容至1000ml,调pH为7.2 (2)ALseveri液：葡萄糖2.05g,柠檬酸钠0.8g,氯化钠0.42g,加无菌双蒸水至100ml (3)GKN液氯化钠18g,氯化钾0.4g,7水磷酸氢二钠1.77g,2水磷酸二氢钠0.69g,葡萄糖2 g,酚红0.01g (4)50%聚乙二醇：称取PEG10g放入试管，在100℃中水浴完全溶解，温度降至50℃，加入 等体积50℃预热的GKN液，震荡混匀。 四、实验方法与步骤 (1)鸡血混悬液制备 抽取鸡血2ml,缓慢加入8 ml Alseveri液中混匀备用。 (2)实验时吸取1ml鸡血混悬液，加入4ml0.85%生理盐水，1200pm离心5min血细胞沉淀， 弃上清，再次用相同的方法制作细胞悬液，10O0pm离心8min,用血球计数板计数，调整细胞数量 为1×10个ml,(红细胞计数：5个小方格细胞数量x5×稀释倍数×104m),吸取调整的细胞1ml, 在37℃中水浴滴加1ml50%PEG,边滴边摇匀，加入结束后静置1mim,取1ml融合的细胞显微镜下 观察其形态。 五、注意事项 滴加PEG时要边滴边轻轻摇匀。 六、结果与分析
称取7.2g NaCl，1.48 g NaH PO ， 0.46 g KH PO ，用蒸馏水定容至1000 ml，调pH为7.2。 （2）ALsever液：葡萄糖 2.05 g，柠檬酸钠0.8 g，氯化钠 0.42 g，加无菌双蒸水至100 ml （3）GKN液氯化钠 18 g，氯化钾 0.4 g，7水磷酸氢二钠1.77 g，2水磷酸二氢钠 0.69 g，葡萄糖 2 g，酚红 0.01 g （4）50%聚乙二醇：称取PEG 10 g放入试管，在100 ℃中水浴完全溶解，温度降至50 ℃，加入 等体积50 ℃预热的GKN液，震荡混匀。 四、实验方法与步骤 （1）鸡血混悬液制备 抽取鸡血2 ml，缓慢加入8 ml Alsever液中混匀备用。 （2）实验时吸取1 ml鸡血混悬液，加入4 ml 0.85%生理盐水，1200 rpm 离心5 min 血细胞沉淀， 弃上清，再次用相同的方法制作细胞悬液，1000 rpm离心8 min，用血球计数板计数，调整细胞数量 为1×10 个/ml，（红细胞计数：5个小方格细胞数量×5×稀释倍数×10 /ml），吸取调整的细胞1 ml， 在37 ℃中水浴滴加1 ml 50% PEG，边滴边摇匀，加入结束后静置1 min，取 1 ml融合的细胞显微镜下 观察其形态。 五、注意事项 滴加PEG时要边滴边轻轻摇匀。 六、结果与分析 2 4 2 4 7 4
观察细胞膜融合的结果，分析其中原因。 实验四植物细胞骨架观察 一、实验目的 1.了解细胞骨架的结构特征： 2.掌握细胞骨架样品制备技术 二、实验原理 细胞骨架染色：细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分 为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输， 能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。用适当浓度的Triton X-100处理细胞，可将细胞质 膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用 戊二醛固定，考马斯亮蓝250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构， 这就是细胞骨架。 三、实验用品 1,材料：洋葱鳞茎 2.试剂： (1)6 mmol/L(pH6.8)磷酸缓冲液（用NaHCO3调PH)。 (2)M缓冲液：50mmol/L咪唑、50mmol/LKC1、0.5mmol/LMgC12、1mmol/L EGTA[乙二醇双(a-氨基乙基醚)四乙酸]、0.1 mmol/L EDTA、1mmo/L巯基乙醇或DTT (二硫苏糖醇)。 (3)1%Triton X-100,用M缓冲液配制。 (4)0.2%考马斯亮蓝R250,其溶剂为：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml
观察细胞膜融合的结果，分析其中原因。 实验四 植物细胞骨架观察 一、实验目的 1. 了解细胞骨架的结构特征； 2. 掌握细胞骨架样品制备技术。 二、实验原理 细胞骨架染色：细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分 为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输， 能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。用适当浓度的Triton X-100处理细胞，可将细胞质 膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用 戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构， 这就是细胞骨架。 三、实验用品 1. 材料：洋葱鳞茎 2. 试剂： (1) 6 mmol/L（pH6.8）磷酸缓冲液（用NaHCO 调PH）。 (2) M缓冲液：50 mmol/L 咪唑、50 mmol/L KCl、0.5 mmol/L MgCl 、1 mmol/L EGTA[乙二醇双（α-氨基乙基醚）四乙酸]、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L 巯基乙醇或DTT （二硫苏糖醇）。 (3) 1%Triton X-100，用M缓冲液配制。 (4) 0.2%考马斯亮蓝R250，其溶剂为：甲醇46.5 ml、冰醋酸7 ml、蒸馏水46.5 ml。 3 2