Sanger双脱氧链终止法 (一)原理单链) DNA链中的核苷酸是以3,5磷酸二酯键相连接，合成 DNA所用的底物是2-脱氧核苷三磷酸(dNTP),在Sanger 双脱氧链终止法中被掺入了2'，3-双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP),当ddNTP位于链延伸末端时，由于它没有3-OH
一、 Sanger 双脱氧链终止法 （一）原理(单链) DNA链中的核苷酸是以3`，5`-磷酸二酯键相连接，合成 DNA所用的底物是2`-脱氧核苷三磷酸（dNTP），在Sanger 双脱氧链终止法中被掺入了 2`，3`-双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP),当ddNTP位于链延伸末端时,由于它没有3`-OH
不能再与其它的脱氧核苷酸形成3'，5'-磷酸二酯键，DNA 合成便在此处终止，如果此处掺入的是一个ddATP,则 新生链的末端就是A,依次类推可以通过掺入ddTTP、 ddCTP、ddGTP,则新生链的末端为T、C或G,根据 这个原理，Sanger.与1977年建立了双脱氧链终止测序法。 他本人也因此而获得了诺贝尔奖
不能再与其它的脱氧核苷酸形成3′ ,5′-磷酸二酯键，DNA 合成便在此处终止，如果此处掺入的是一个ddATP，则 新生链的末端就是A，依次类推可以通过掺入ddTTP、 ddCTP、 ddGTP ，则新生链的末端为T、C或G，根据 这个原理，Sanger与1977年建立了双脱氧链终止测序法。 他本人也因此而获得了诺贝尔奖
Sanger
Sanger
0 O-P- O-P- 0-CH2 碱基 双脱氧核苷三磷酸 H H H ddNTP ® dATP dGTP 5 OH 互补链合成过程 DDDDOH OH 引物链 T G G 3 A G G T 模板链
双脱氧核苷三磷酸 互补链合成过程
以单链或双链DNA为模板，采用DNA引物引导新生 DNA的合成，因此又称为引物合成法，或酶促引物合成法。 主要是基于DNA聚合酶的催化特性：①以DNA为模板，根 据碱基配对的原则逐个将dTP加到与模板结合的寡核苷 酸引物的3'-OH末端，形成正确的模板DNA互补链；②能 以dNTP作为底物，也能利用ddNTP作底物，将其掺入寡 核苷酸链的3'末端而终止新生互补链的延伸
以单链或双链DNA为模板，采用DNA引物引导新生 DNA的合成，因此又称为引物合成法，或酶促引物合成法。 主要是基于DNA聚合酶的催化特性：①以DNA为模板，根 据碱基配对的原则逐个将dNTP加到与模板结合的寡核苷 酸引物的3′-OH末端，形成正确的模板DNA互补链；②能 以dNTP作为底物，也能利用ddNTP作底物，将其掺入寡 核苷酸链的3 ′末端而终止新生互补链的延伸