2.手工操作法(1）手工操作参数：波长630nm，光径1cm；温度：室温；模式：终点法；反应时间：30秒；样品量：0.02ml；试剂量：4ml。(2）操作：取试管3支，按表7-3操作。表7-3BCG法测定白蛋白操作步骤加入物(ml)空白管标准管测定管血清0.02一一0.02白蛋白标准液0.02蒸馏水4.04.04.0BCG试剂在波长630nm处用空白管调零，用定量加液器加BCG试剂，与测定管血清混合后，立即在30±3s内，读取吸光度。如标本因严重高脂血症而混浊，需加做标本空白管(取血清0.02ml，加入琥珀酸缓冲贮存液4.0ml)，用琥珀酸缓冲贮存液调零，测定标本空白管吸光度。用测定管吸光度减去标本空白管吸光度后，再计算结果。【计算】测定管吸光度、血清白蛋白(g/ L)×白蛋白标准液浓度(g/L)标准管吸光度同时用双缩脲法测定血清标本中总蛋白浓度，减去血清白蛋白浓度即为球蛋白浓度，并可求得血清白蛋白、球蛋白比值(A/G比值)。【参考范围】正常成人35~55g/L。【临床意义】1.血清白蛋白浓度增高常见于严重脱水所致的血浆浓缩。2.血清白蛋白浓度降低在临床上比较重要和常见，通常与总蛋白降低的原
6 2．手工操作法 (1) 手工操作参数：波长 630nm，光径 1cm；温度：室温；模式：终点法；反 应时间：30 秒；样品量：0.02ml；试剂量：4ml 。 (2) 操作：取试管 3 支，按表 7-3 操作。 表 7-3 BCG 法测定白蛋白操作步骤 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 血清 － － 0.02 白蛋白标准液 － 0.02 － 蒸馏水 0.02 － － BCG 试剂 4.0 4.0 4.0 在波长 630nm 处用空白管调零，用定量加液器加 BCG 试剂，与测定管血清 混合后，立即在 30±3s 内，读取吸光度。 如标本因严重高脂血症而混浊，需加做标本空白管(取血清 0.02ml，加入琥珀 酸缓冲贮存液 4.0ml)，用琥珀酸缓冲贮存液调零，测定标本空白管吸光度。用测 定管吸光度减去标本空白管吸光度后，再计算结果。 【计算】 (g / L) 白蛋白标准液浓度(g / L) 标准管吸光度 测定管吸光度 血清白蛋白 同时用双缩脲法测定血清标本中总蛋白浓度，减去血清白蛋白浓度即为球蛋 白浓度，并可求得血清白蛋白、球蛋白比值(A/G 比值)。 【参考范围】 正常成人 35～55g/L。 【临床意义】 1．血清白蛋白浓度增高 常见于严重脱水所致的血浆浓缩。 2．血清白蛋白浓度降低 在临床上比较重要和常见，通常与总蛋白降低的原
因大致相同。急性降低主要见于大出血和严重烧伤：慢性降低见于肾病蛋白尿肝功能受损、肠道肿瘤及结核病伴慢性出血、营养不良和恶性肿瘤等。血清白蛋白低于20g/L，临床上出现水肿。3.A/G比值某些病人可同时出现白蛋白减少和球蛋白升高的现象，严重者A/G比值<1.0，这种情况称为A/G比值倒置。4.文献报导还有极少见的因白蛋白合成障碍，血清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏症。【注意事项】1.BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8(显黄色)~5.4(显蓝绿色)，因此控制反应液的 pH 是本法测定的关键。2.配制BCG试剂也可用其他缓冲液如枸橡酸盐或乳酸盐缓冲液。但以琥珀酸盐缓冲液的校正曲线通过原点，线性好，灵敏度高，成为首选推荐配方。3.试剂中的Brij-35也可用其他表面活性剂代替，如吐温-20或吐温-80，终浓度为2ml/L，灵敏度和线性范围不变。4.当60g/L的白蛋白标准液与BCG结合后，溶液光径1.0ml，在630nm处测定的吸光度应为0.811土0.035，如达不到此值，表示灵敏度较差。5.蛋白质标准是一个复杂问题。实验证明，BCG不但与白蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以α1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较白蛋白稍慢。由于在30s内呈色对白蛋白特异，故BCG与血清混合后，在30s读取吸光度，可明显减少非特异性呈色反应。为了减少本法基质效应的影响，最好用参考血清作标准。【评价】1.本法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血无干扰，，既可手工操作，也能自动化分析，是目前国内测定血清白蛋白的最常用方法。2．本法线性范围为10~60g/L，RCV<4%。但该法与溴甲酚紫法比较，对血清白蛋白特异性稍差。7
7 因大致相同。急性降低主要见于大出血和严重烧伤；慢性降低见于肾病蛋白尿、 肝功能受损、肠道肿瘤及结核病伴慢性出血、营养不良和恶性肿瘤等。血清白蛋 白低于 20g/L，临床上出现水肿。 3．A/G 比值 某些病人可同时出现白蛋白减少和球蛋白升高的现象，严重者 A/G 比值＜1.0，这种情况称为 A/G 比值倒置。 4．文献报导还有极少见的因白蛋白合成障碍，血清中几乎没有白蛋白的先天 性白蛋白缺乏症。 【注意事项】 1．BCG 是一种 pH 指示剂，变色域为 pH3.8(显黄色)～5.4(显蓝绿色)，因此 控制反应液的 pH 是本法测定的关键。 2．配制 BCG 试剂也可用其他缓冲液如枸橼酸盐或乳酸盐缓冲液。但以琥珀 酸盐缓冲液的校正曲线通过原点，线性好，灵敏度高，成为首选推荐配方。 3．试剂中的 Brij-35 也可用其他表面活性剂代替，如吐温-20 或吐温-80，终 浓度为 2ml/L，灵敏度和线性范围不变。 4．当 60g/L 的白蛋白标准液与 BCG 结合后，溶液光径 1.0ml，在 630nm 处 测定的吸光度应为 0.811±0.035，如达不到此值，表示灵敏度较差。 5．蛋白质标准是一个复杂问题。实验证明，BCG 不但与白蛋白呈色，而且 与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以α1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显 著，其反应速度较白蛋白稍慢。由于在 30s 内呈色对白蛋白特异，故 BCG 与血清 混合后，在 30s 读取吸光度，可明显减少非特异性呈色反应。为了减少本法基质 效应的影响，最好用参考血清作标准。 【评价】 1．本法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血无干扰，既可手工操作， 也能自动化分析，是目前国内测定血清白蛋白的最常用方法。 2．本法线性范围为 10～60g/L，RCV＜4%。但该法与溴甲酚紫法比较，对血 清白蛋白特异性稍差