2超过滤 在加压情况下将待浓缩溶液通过一层只容许水 分子和小分子选择性地透过的微孔超滤膜而酶等 大分子被滞留,从而达到浓缩目的的一种有效方法。 优点:没有热破坏,没有相变化,保持原来的离 子强度和pH。只要膜选择适当浓缩过程还可能同 时进行粗分,此外成本也不高,已渐渐为人们所采用 超过滤可用于小量样品,也可用于工业生产规模。 注意:超滤膜有干型和湿型两种,后者必须保持 于溶液中
2 超过滤 在加压情况下，将待浓缩溶液通过一层只容许水 分子和小分子选择性地透过的微孔超滤膜,而酶等 大分子被滞留,从而达到浓缩目的的一种有效方法。 优点：没有热破坏，没有相变化，保持原来的离 子强度和pH。只要膜选择适当,浓缩过程还可能同 时进行粗分,此外成本也不高,已渐渐为人们所采用。 超过滤可用于小量样品,也可用于工业生产规模。 注意：超滤膜有干型和湿型两种，后者必须保持 于溶液中
3胶过滤 这是利用葡聚糖凝胶 sephadex G-25或 G-50等能吸水膨润、而酶等大分子被排阻 于胶外的原理进行的浓缩。通常采用“静态” 方式,即将干胶直接加入样品溶液(干胶用 量可根据胶的吸水量计算),胶吸水膨润- 定时间后,再借助过滤或离心等办法分离浓 缩的酶液。胶过滤浓缩法的优点是,条件温 和,操作简便,也没有pH与离子强度等的改 变
3 胶过滤 这是利用葡聚糖凝胶sephdex G—25或 G—50等能吸水膨润、而酶等大分子被排阻 于胶外的原理进行的浓缩。通常采用“静态” 方式，即将干胶直接加入样品溶液（干胶用 量可根据胶的吸水量计算），胶吸水膨润一 定时间后，再借助过滤或离心等办法分离浓 缩的酶液。胶过滤浓缩法的优点是，条件温 和，操作简便，也没有pH与离子强度等的改 变
4冰冻浓缩 原理:溶液相对纯水融点升高,冰点降低。这有两 种方式 1先将溶液冻成冰块。然后使之缓缓融解,这 样几乎不含蛋白质和酶的冰块就浮于液面而酶等 则融解并集中于下层溶液(约为原体积的1/4); 2让酶溶液缓缓冻凝,尔后移去水形成的冰块. 问题浓缩过程可能会发生离子强度与pH的变化, 从而导致酶失效;其次是需要大功率的致冷设备
4 冰冻浓缩 原理:溶液相对纯水融点升高,冰点降低。这有两 种方式： 1.先将溶液冻成冰块。然后使之缓缓融解，这 样几乎不含蛋白质和酶的冰块就浮于液面,而酶等 则融解并集中于下层溶液(约为原体积的1／4); 2.让酶溶液缓缓冻凝，尔后移去水形成的冰块. 问题:浓缩过程可能会发生离子强度与pH的变化, 从而导致酶失效；其次是需要大功率的致冷设备
5其它 还有聚乙二醇等浓缩法,它们一 般只适用小量样品,而且往往成 本很高
5. 其它 还有聚乙二醇等浓缩法，它们一 般只适用小量样品，而且往往成 本很高
三酶的纯化 在抽提液中,除了待纯化的酶外通常不可避兔地杂有其 它小分子和大分子物质其中小分子杂质在以后的纯化步 骤中一般会自然地除去因此比较容易解决大分子物质包 括核酸粘多糖和其它蛋白质、核酸和粘多糖往往干扰以后 的纯化特别是细菌等的抽提液中常会有大量核酸,最好设 法预先除去.核酸可加硫酸链霉素聚乙烯亚胺色精蛋白或 MnC等使之沉淀移去,必要时也可使用核酸酶粘多糖则 常用醋酸铅,乙醇丹宁酸和离子型表面活性剂等处理解决, 有时也可用酶。这些杂质移除后,余下的是杂蛋白 纯化的主要工作,同时也是比较困难的工作就是要将酶从 杂蛋白中分离出来
三.酶的纯化 在抽提液中,除了待纯化的酶外,通常不可避免地杂有其 它小分子和大分子物质.其中小分子杂质在以后的纯化步 骤中一般会自然地除去,因此比较容易解决;大分子物质包 括核酸,粘多糖和其它蛋白质.核酸和粘多糖往往干扰以后 的纯化,特别是细菌等的抽提液中常会有大量核酸,最好设 法预先除去.核酸可加硫酸链霉素,聚乙烯亚胺,色精蛋白或 MnCl2等使之沉淀移去,必要时也可使用核酸酶.粘多糖则 常用醋酸铅,乙醇,丹宁酸和离子型表面活性剂等处理解决, 有时也可用酶。这些杂质移除后,余下的是杂蛋白. 纯化的主要工作,同时也是比较困难的工作,就是要将酶从 杂蛋白中分离出来