(-)纯化方法的选择 为了获得理想的分离效果应注意 第一,工作前应对所要纯化的酶的理化性 质(溶解度、分子大小和解离特性以及酶的 稳定性等有一个较全面的了解,这样就可知 道应选择哪些办法与条件,避免哪些处理, 以及了解在什么情况下酶比杂蛋白更稳定而 能加以利用
（一）纯化方法的选择 为了获得理想的分离效果应注意： 第一，工作前应对所要纯化的酶的理化性 质(溶解度、分子大小和解离特性)以及酶的 稳定性等有一个较全面的了解，这样就可知 道应选择哪些办法与条件，避免哪些处理， 以及了解在什么情况下酶比杂蛋白更稳定而 能加以利用
第二,判断选择的方法与条件是否适当 始终应以活力测定为准则。一个好的步骤应 该是比活力(纯度)提高多,总活力回收高(回 收率髙),而且重现性好。一般地说,纯化 过程不宜重复相同的步骤和方法,因为这样 只能使酶的总活力下降,而不能使酶的纯度 进一步上升 第三,要严格控制操作条件,特别是随着 酶逐渐纯净、杂蛋白逐渐移除、总的蛋白浓 度下降,蛋白质间的相互保护作用随之减小 酶的稳定性亦越小,就更应注意防止变性
第二，判断选择的方法与条件是否适当， 始终应以活力测定为准则。一个好的步骤应 该是比活力(纯度)提高多，总活力回收高（回 收率高），而且重现性好。一般地说，纯化 过程不宜重复相同的步骤和方法，因为这样 只能使酶的总活力下降，而不能使酶的纯度 进一步上升。 第三，要严格控制操作条件，特别是随着 酶逐渐纯净、杂蛋白逐渐移除、总的蛋白浓 度下降，蛋白质间的相互保护作用随之减小， 酶的稳定性亦越小，就更应注意防止变性
(二)酶的纯化方法 现行的方法(根据酶和杂蛋白在性质上的差异 而建立的) 1根据溶解度的不同 2/根据分子大小的差别 3根据解离电学性质的特点; 4利用稳定性的差异; 5基于酶和底物、辅助因子以及抑制剂间具有 专一的亲和作用的特点。 实际有许多方法中往往包含两种或两种以上的 因素在同时起作用
（二）酶的纯化方法 现行的方法（根据酶和杂蛋白在性质上的差异 而建立的）： 1 根据溶解度的不同； 2 根据分子大小的差别； 3 根据解离电学性质的特点； 4 利用稳定性的差异； 5 基于酶和底物、辅助因子以及抑制剂间具有 专一的亲和作用的特点。 实际有许多方法中往往包含两种或两种以上的 因素在同时起作用
(三)根据溶解度建立的纯化方法 1.盐析法; 2.有机溶剂沉淀法; 3共沉淀法 4选择性沉淀法; 5等电点沉淀法
（三） 根据溶解度建立的纯化方法 1.盐析法; 2.有机溶剂沉淀法; 3.共沉淀法; 4.选择性沉淀法; 5.等电点沉淀法
1盐析法 析法是古老的、也是目前仍广泛采用的方法。 盐析法的原理:球蛋白类在低的盐浓度溶液中 它的溶解度随盐的离子强度升高而增大,表现 盐溶”特性。但是当盐浓度继续升高,超过 某一上限值时,其溶解度又会先后以不同速度 下降,分别“盐析”沉淀析出。盐析纯化法就 是根据酶和杂蛋白在高的盐浓度溶液中溶解度 的差别而建立的一种纯化方法
1 盐析法 盐析法是古老的、也是目前仍广泛采用的方法。 盐析法的原理：球蛋白类在低的盐浓度溶液中， 它的溶解度随盐的离子强度升高而增大，表现 “盐溶”特性。但是当盐浓度继续升高，超过 某一上限值时，其溶解度又会先后以不同速度 下降，分别“盐析”沉淀析出。盐析纯化法就 是根据酶和杂蛋白在高的盐浓度溶液中溶解度 的差别而建立的一种纯化方法