第八章王要酶的制备和测定 d-淀粉酶 果胶酶 ●/B-淀粉酶 s脂肪酶 糖化酶 乳糖酶 ●蛋白酶 ●超氧化物歧化酶 ●纤维素酶
第八章 主要酶的制备和测定 α-淀粉酶 β-淀粉酶 糖化酶 蛋白酶 纤维素酶 果胶酶 脂肪酶 乳糖酶 超氧化物歧化酶
第一节α-淀粉酶 Q-淀粉酶的特征 ●α-淀粉酶系统命名为α-1,4葡聚糖-4-葡聚糖水解酶 EC.321.1),作用与淀粉与糖原时,从底物分子 内部不规则的切开α-1,4键,而生成麦芽糖、少量 葡萄糖与一系列分子量不等的低聚糖和糊精。α-淀 粉酶是一种金属酶,每个酶分子至少含一个钙离子 多的可以达到10个钙离子,钙维持酶分子的最大活 性与稳定性。 α-淀粉酶的品种及其性质 ●1枯草杄菌类α-淀粉酶 2霉菌类α-淀粉酶 3动植物类α-淀粉酶 ●4耐热性α淀粉酶 ●5酸性α-淀粉酧和碱性α-淀粉酶
第一节α-淀粉酶 一.α-淀粉酶的特征 α-淀粉酶系统命名为α-1，4葡聚糖-4-葡聚糖水解酶 （EC.3.2.1.1），作用与淀粉与糖原时，从底物分子 内部不规则的切开α-1，4 键，而生成麦芽糖、少量 葡萄糖与一系列分子量不等的低聚糖和糊精。α-淀 粉酶是一种金属酶，每个酶分子至少含一个钙离子， 多的可以达到10个钙离子，钙维持酶分子的最大活 性与稳定性。 二.α-淀粉酶的品种及其性质 1 枯草杆菌类α-淀粉酶 2 霉菌类α-淀粉酶 3 动植物类α-淀粉酶 4 耐热性α-淀粉酶 5 酸性α-淀粉酶和碱性α-淀粉酶
直链淀粉 o葡萄糖残基 ●还原末端葡萄糖残基 x-1.4-糖苷键 1.6-糖苷镁 β-界限糊精 a-淀粉藤 淀粉酶 葡萄糖淀粉酶 异淀粉酶 支链淀粉 图8-1淀粉的结构与各种淀粉酶作用型式
三.α-淀粉酶的工业生产 工业生产用的菌种有枯草杆菌BF-7658和米曲霉602, 前者用液体深层发酵,后者适用固体发酵。 ●1固体发酵 (1)流程斜面菌种三角瓶种子种曲厚层通风发酵 ●发酵烘千粗制品抽提过滤沉淀过滤烘干精制品 2)米曲霉602和2120生产药用α淀粉酶 ●2液体深层发酵(BF7658 3高温酶的生产 ●四.α淀粉酶活力的测定(液化型淀粉酶) 1原理是应用消色法测定酶活力。淀粉被液化型淀粉 酶水解(液化),切断淀粉链的α-1、4糖苷键。对碘呈 蓝紫色的反应逐渐消失。这种呈色消逝的速度可以表示 液化的程度,因而能测定酶的活力
三. α-淀粉酶的工业生产 工业生产用的菌种有枯草杆菌BF-7658和米曲霉602， 前者用液体深层发酵，后者适用固体发酵。 1.固体发酵 （1）流程 斜面菌种三角瓶种子种曲厚层通风发酵 发酵烘干粗制品抽提过滤沉淀过滤烘干精制品 （2）米曲霉602和2120生产药用α-淀粉酶 2．液体深层发酵(BF—7658) 3.高温酶的生产 四. α-淀粉酶活力的测定（液化型淀粉酶） 1.原理 是应用消色法测定酶活力。淀粉被液化型淀粉 酶水解(液化），切断淀粉链的α-1、4糖苷键。对碘呈 蓝紫色的反应逐渐消失。这种呈色消逝的速度可以表示 液化的程度，因而能测定酶的活力
●2.试剂 ●团碘液:称取碘11g,碘化钾2加水溶解,定容至 500mL。 标淮稀碘液:取碘原液15mL、加碘化钾8g用水定容 到200mL。 2%可溶性淀粉:称取干可溶性淀粉29,先以少许 蒸馏水混和,再徐徐倾入煮沸蒸馏水中,继续煮沸2 分钟,冷却.加水到100ml。 pH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 比色稀碘液:取碘原液2mL.加碘化钾20g,用水定 容到500mL。 标准糊精液:称0.39纯糊精,悬浮于少量水中,再 倾于400mL沸水中,冷却后加水稀释到500mL
2．试剂 团碘液：称取碘11g，碘化钾22g加水溶解，定容至 500mL。 标淮稀碘液：取碘原液15mL，加碘化钾8g用水定容 到200mL。 2％可溶性淀粉：称取干可溶性淀粉2g，先以少许 蒸馏水混和，再徐徐倾入煮沸蒸馏水中．继续煮沸2 分钟，冷却．加水到100mI。 pH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 比色稀碘液：取碘原液2mL．加碘化钾20g，用水定 容到500mL。 标准糊精液：称0.3g纯糊精，悬浮于少量水中，再 倾于400mL沸水中，冷却后加水稀释到500mL