微生物材料 不同的微生物材料处理的方法与难易程度也各 有差异。 霉菌材料比较容易,可通过机械剪切、研磨或 加细胞壁溶解酶解决。 细菌,少量材料常用超声波破碎器和溶菌酶等 处理;大量材料通常采用丙酮千粉法,或采用 自溶法。 酵母细胞壁厚较难对付,过去多用自溶法,现 在可采用的办法有:(1)细胞壁溶解酶处理法; 2)盐振荡法; (3)冷热破壁法
微生物材料： 不同的微生物材料处理的方法与难易程度也各 有差异。 霉菌材料比较容易，可通过机械剪切、研磨或 加细胞壁溶解酶解决。 细菌，少量材料常用超声波破碎器和溶菌酶等 处理；大量材料通常采用丙酮干粉法，或采用 自溶法。 酵母细胞壁厚较难对付，过去多用自溶法，现 在可采用的办法有：(1)细胞壁溶解酶处理法； (2)盐振荡法； (3)冷热破壁法
3.抽提 细胞破碎后,可采用两种方式进行抽提 是“普遍”抽提 是先后用不同溶剂进行选择性抽提
3. 抽提 细胞破碎后，可采用两种方式进行抽提： 一是“普遍”抽提； 二是先后用不同溶剂进行选择性抽提
3.1抽提条件的选择 由于大多数酶属于球蛋白类,因此一般部可 以用稀盐、稀酸或稀碱的水溶液进行抽提。 但抽提液的具体组成和抽提条件的选择取决 于酶的溶解性、稳定性以及有利于切断醃和 其它物质的联系。需要考虑的因素有 1pH;2盐;3.温度;4其它
3.1 抽提条件的选择： 由于大多数酶属于球蛋白类，因此一般部可 以用稀盐、稀酸或稀碱的水溶液进行抽提。 但抽提液的具体组成和抽提条件的选择取决 于酶的溶解性、稳定性以及有利于切断酶和 其它物质的联系。需要考虑的因素有： 1.pH；2.盐；3.温度；4.其它
a pH 首先应考虑酶的酸碱稳定性,选择的pH不应超 出酶的稳定范围; 其次从最佳的抽提效果着眼,最好远离待抽提酶 的等电点。也就是说,酸性蛋白质宜用碱性溶 液抽提,碱性蛋白质宜用酸性溶液。例如,肌 肉甘油醛—3-磷酸脱氢酶以稀碱抽提时产量较 高,胰蛋白酶选用0.25N硫酸。 第三,在某些情况下抽提还要兼顾到有利于切断 酶和细胞内其它成分间可能的联系,从这点考 虑以选用pH46为佳
a. pH 首先应考虑酶的酸碱稳定性，选择的pH不应超 出酶的稳定范围； 其次从最佳的抽提效果着眼，最好远离待抽提酶 的等电点。也就是说，酸性蛋白质宜用碱性溶 液抽提，碱性蛋白质宜用酸性溶液。例如，肌 肉甘油醛—3—磷酸脱氢酶以稀碱抽提时产量较 高，胰蛋白酶选用0.25N硫酸。 第三，在某些情况下抽提还要兼顾到有利于切断 酶和细胞内其它成分间可能的联系，从这点考 虑以选用pH4—6为佳
大多数蛋白质在低浓度的盐溶液中有较大的溶 解度,所以抽提液一被采用等渗盐溶液。最普 通的加0020_0.050M的磷酸缓冲液、 0.,L5 MAce等。焦磷酸钠和柠檬酸钠的缓冲 有助于切断酶和其它物质的连系,并有络合某 些金属的作用,因此用得也很多。 少数情况用水抽提效果亦佳,如霉菌脂肪酶的 抽提,这可能与低渗可破坏细胞结构有关
b. 盐 大多数蛋白质在低浓度的盐溶液中有较大的溶 解度，所以抽提液一被采用等渗盐溶液。最普 通的加0.020—0.050M的磷酸缓冲液、 0.15MNaCl等。焦磷酸钠和柠檬酸钠的缓冲 有助于切断酶和其它物质的连系，并有络合某 些金属的作用，因此用得也很多。 少数情况用水抽提效果亦佳，如霉菌脂肪酶的 抽提，这可能与低渗可破坏细胞结构有关