酶的抽提 ●抽提的要求是将尽可能多的酶、尽量少的杂质 从原料引入溶液。 1.预处理 过去多用动物或植物的器官组织作为酶的来 源,近年来则主要采用微生物作材料。但是不 管什么原料,通常都需要先进行适当的预处理。 例如,动物材料要剔除结缔组织、脂肪组织 油质种子最好先用乙醚等脱脂;种孑硏磨前应 去壳,以免丹宁等物质着色污染;微生物材料 则应将菌体和发酵介质分离。经过这些处理后 材料须尽可能以非常新鲜的状态直接应用,否 则就应将完整材料立即冰冻起来
一.酶的抽提 抽提的要求是将尽可能多的酶、尽量少的杂质 从原料引入溶液。 1. 预处理 过去多用动物或植物的器官组织作为酶的来 源，近年来则主要采用微生物作材料。但是不 管什么原料，通常都需要先进行适当的预处理。 例如，动物材料要剔除结缔组织、脂肪组织； 油质种子最好先用乙醚等脱脂；种子研磨前应 去壳，以免丹宁等物质着色污染；微生物材料 则应将菌体和发酵介质分离。经过这些处理后， 材料须尽可能以非常新鲜的状态直接应用，否 则就应将完整材料立即冰冻起来
2.破细胞 酶根据它的分布可分为细胞内酶和细胞外 酶/根据它的存在状态,即是否与细胞内的 颗粒体或膜结合,细胞内酶又可分为结酶与 溶酶。细胞外酶没有破细胞问题;但是细胞 内酶却只有在细胞破裂后才能释放出来,而 且抽提效果也往往与细胞破碎程度有关。至 于结酶,还有—个切断它与颗粒体或膜的连 结问题
2. 破细胞 酶根据它的分布可分为细胞内酶和细胞外 酶，根据它的存在状态，即是否与细胞内的 颗粒体或膜结合，细胞内酶又可分为结酶与 溶酶。细胞外酶没有破细胞问题；但是细胞 内酶却只有在细胞破裂后才能释放出来，而 且抽提效果也往往与细胞破碎程度有关。至 于结酶，还有一个切断它与颗粒体或膜的连 结问题
2.1丙酮干粉法:一般是先将材料粉碎或分散 然后在0℃以下的低温条件下加入5-10倍的 15~20°的丙酮,迅速搅拌均匀,随即过滤, 最后低温干燥研磨过筛。 优点:丙酮处理一方面能有效地破坏细胞壁 (膜)另一方面由于丙酮是脂溶剂,这种处理有 利于除去大量脂类物质,以免它在以后的步骤 生干扰,有时这种处理还能使某些结酶易于 溶解;此外,丙酮干粉含水量低,易于保存. 缺点:丙酮可能引起某些酶变性失效,有些酶 则根本不能采用此法
2.1丙酮干粉法：一般是先将材料粉碎或分散， 然后在0℃以下的低温条件下,加入5—10倍的 15～20℃的丙酮，迅速搅拌均匀，随即过滤， 最后低温干燥,研磨过筛。 优点：丙酮处理一方面能有效地破坏细胞壁 (膜);另一方面由于丙酮是脂溶剂，这种处理有 利于除去大量脂类物质，以免它在以后的步骤 产生干扰，有时这种处理还能使某些结酶易于 溶解；此外，丙酮干粉含水量低，易于保存. 缺点：丙酮可能引起某些酶变性失效，有些酶 则根本不能采用此法
22自溶法就是在适当的温度、pH条件下, 将浓的菌体悬破直接保温,或加甲苯乙酸 乙酯或其它溶剂一起保温一定时间,使菌体 自溶液化。 缺点:第一,自溶液中成份十分复杂。 第二,有破坏待分离酶的危险
2.2自溶法:就是在适当的温度、pH条件下， 将浓的菌体悬破直接保温，或加甲苯、乙酸 乙酯或其它溶剂一起保温一定时间，使菌体 自溶液化。 缺点：第一，自溶液中成份十分复杂。 第二，有破坏待分离酶的危险
23破细胞的手段 动、植物材料 通常用绞肉机作成组织糜,如果需要破碎得更彻 底些可用高速组织捣碎器捣碎,或者加砂研磨。 高速捣碎器操作简便、破碎效果好,但易引起局 部温度过高,导致酶失效,故必须考虑酶的特点 谨慎使用。加砂硏磨,特别是用玻璃粉或氧化铝 代替砂时,要注意有时可能发生吸附变性。在上 述机械处理后,为了有利于下一步抽提,还可进 步作成丙酮千粉,或者进行反复冰冻融解处理 量少时,某些组织还可采用匀浆器将细胞研磨破 碎
2.3 破细胞的手段： 动、植物材料： 通常用绞肉机作成组织糜，如果需要破碎得更彻 底些，可用高速组织捣碎器捣碎，或者加砂研磨。 高速捣碎器操作简便、破碎效果好，但易引起局 部温度过高，导致酶失效，故必须考虑酶的特点 谨慎使用。加砂研磨，特别是用玻璃粉或氧化铝 代替砂时，要注意有时可能发生吸附变性。在上 述机械处理后，为了有利于下一步抽提，还可进 一步作成丙酮干粉，或者进行反复冰冻融解处理， 量少时，某些组织还可采用匀浆器将细胞研磨破 碎