BLA”直至显示“100.0”%T或0.000”A为止。 H.当仪器显示器显示出“100.0%T或0.000A后，将被测样品推（拉）入光路，这时， 您便可从显示器上得到被测样品的透射比或吸光度值。 2)样品浓度的测量方法 A。己知标准样品浓度值的测量方法 A)用<MODE>键将测试方式设置至A(吸光度)状态 B)用波长设置样品的分析波长，根据分析规程，每当分析波长改变时，必须重新调 整0AW100%和0%T C)将参比样品溶液，标准样品溶液和被测样品分别倒入比色皿中，打开样品室盖， 将盛有溶液的比色皿插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第一个槽 位中。比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不应有气泡、悬浮物，否则 将影响样品测试的精度。 D)将参比样品推（拉）入光路中，按0AWI00%T键调0AW100%T,此时显示器显示 的BLA直至显示0.000A为止。 E)用<MODE>键将测试方式设置至C状态。 F)将标准样品推（或拉）入光中。 G)按NC或DEC键将己知的标准样品浓度值输入仪器，当显示器显示样品浓度 值时，按"ENT键。浓度值只能输入整数值，设定范围为0-1999 H)将被测样品依次推（或拉）入光路，这时，您便可从显分别得到被测样品的浓度 值。 B.己知标准样品浓度斜率(K值)的测量方法 A)用<MODE>键将测试方式设置至A(吸光度)状态。 B)用波长旋钮设置样品的分析波长，根据分析规程，每当分析波长改变时，必须重新 调整0AW100%和0%T。 C)将您的参比样品溶液和被测样品分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的 比色皿插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第一个槽位中。比色皿 透光部分表面不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不应有气泡、悬浮物，否则将影响样品测 试的精度。 D)将参比样品推（拉）入光路中，按0W100%T键调0W100%T,此时显示器显示的 “BLA”,直至显示0.000A为止
“BLA”直至显示“100.0”％T 或“0.000”A 为止。 H．当仪器显示器显示出“100.0”%T 或“0.000”A 后，将被测样品推（拉）入光路，这时， 您便可从显示器上得到被测样品的透射比或吸光度值。 2）样品浓度的测量方法 A．已知标准样品浓度值的测量方法 A）用＜MODE＞键将测试方式设置至 A（吸光度）状态 B）用波长设置样品的分析波长，根据分析规程，每当分析波长改变时，必须重新调 整 0A/100％和 0％T。 C）将参比样品溶液，标准样品溶液和被测样品分别倒入比色皿中，打开样品室盖， 将盛有溶液的比色皿插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第一个槽 位中。比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不应有气泡、悬浮物，否则 将影响样品测试的精度。 D）将参比样品推（拉）入光路中，按“0A/100%T”键调 0A/100%T，此时显示器显示 的“BLA”直至显示 “0.000”A 为止。 E）用<MODE>键将测试方式设置至 C 状态。 F）将标准样品推（或拉）入光路中。 G）按“INC”或“DEC”键将己知的标准样品浓度值输入仪器，当显示器显示样品浓度 值时，按“ENT”键。浓度值只能输入整数值，设定范围为 0-l999 H）将被测样品依次推（或拉）入光路，这时，您便可从显分别得到被测样品的浓度 值。 B．已知标准样品浓度斜率（K 值）的测量方法 A）用<MODE>键将测试方式设置至 A（吸光度）状态。 B）用波长旋钮设置样品的分析波长，根据分析规程，每当分析波长改变时，必须重新 调整 0A/100％和 0％T。 C）将您的参比样品溶液和被测样品分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的 比色皿插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第一个槽位中。比色皿 透光部分表面不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不应有气泡、悬浮物，否则将影响样品测 试的精度。 D）将参比样品推（拉）入光路中，按“0A/100%T”键调 0A/100%T，此时显示器显示的 “BLA”，直至显示 “0.000”A 为止
E)用<MODE>键将测试方式设置至F状态 F)按NC”或DEC键输入己知的标准样品斜率值，当显示器显示标准样品斜率时， 按ENT键。这时，测试方式指示灯自动指向C,斜率只能输入整数。 G)将被测样品依次推（或拉）入光路，这时，您便可从显示器上分别得到被测样品的 浓度值 3)使用注意事项 A.仪器应放置在室温在5-35℃，相对湿度不大于85%的环境中工作。 B.放置仪器的工作台应平坦，车周，不应有振动或其他影响仪器正常工作的现象。 C.强烈电磁场，静电及其他电磁干扰，都可能影响仪器正常工作，放置仪器时应尽可 能远离干扰源 D.仪器放置应避开有化学腐蚀气体的地方，如硫化氢、二氧化硫，氢气等。 E。仪器应避免阳光直射。 F.仪器使用在额定电压的肚10%范围内，频率变化在牡z范围内，并要有良好的接地。 G。仪器通电前检查 A)接通电源，让仪器预热至少二十分钟，使仪器进入热稳定工作状态。 B)仪器接通电源后，即进入自检状态，首先显示UNICO,数秒后显示为： 0.×x×A(或-0.×A),即自检完毕。 三、PCR仪 聚合酶鲢反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种选择性体外扩增DNA或RNA 片段的方法，己广泛应用于分子生物学研究与临床诊断中。 虽然PC基因扩增仪的生产厂家、型号很多，工作原理不尽相同，使用方法也不尽一 致，但都具有向自动化和智能化发展的趋势，这对于使用者来说比较方便，只要参考说明书 轻轻触动键钮，输入或改变扩增程序、反应时间、温度等，置入扩增样品，扩增仪就会自动 完成整个扩增过程。这里仅以PE公司的PC℉仪480为例，简单介绍该型机的使用。 1.打开主机电源，进入主菜单Main Menu: 2.按箭头键↑一选择文件Fl菜单，对原有程序进行编辑，或新建新程序： 3.新建扩增程序：开机后，屏幕显示版本信息后，出现step to edit file#3。 SOAK file#1的编辑： fle#I是在某一温度下持续无限长时间，即只可修改温度。按file一l一Entc键：显示 SOAK temperature(0-100)25C:可根据实验需要修改温度，如要30℃，按3、0，再按
E）用<MODE>键将测试方式设置至 F 状态。 F）按“INC”或“DEC”键输入己知的标准样品斜率值，当显示器显示标准样品斜率时， 按“ENT”键。这时，测试方式指示灯自动指向“C”，斜率只能输入整数。 G）将被测样品依次推（或拉）入光路，这时，您便可从显示器上分别得到被测样品的 浓度值 3）使用注意事项 A．仪器应放置在室温在 5-35℃，相对湿度不大于 85％的环境中工作。 B．放置仪器的工作台应平坦，牢固，不应有振动或其他影响仪器正常工作的现象。 C．强烈电磁场，静电及其他电磁干扰，都可能影响仪器正常工作，放置仪器时应尽可 能远离干扰源。 D．仪器放置应避开有化学腐蚀气体的地方，如硫化氢、二氧化硫，氨气等。 E．仪器应避免阳光直射。 F．仪器使用在额定电压的±10％范围内，频率变化在±1Hz 范围内，并要有良好的接地。 G．仪器通电前检查 A）接通电源，让仪器预热至少二十分钟，使仪器进入热稳定工作状态。 B）仪器接通电源后，即进入自检状态，首先显示“UNICO”，数秒后显示为： 0.×××A（或-0.×××A），即自检完毕。 三、PCR 仪 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种选择性体外扩增 DNA 或 RNA 片段的方法，已广泛应用于分子生物学研究与临床诊断中。 虽然 PCR 基因扩增仪的生产厂家、型号很多，工作原理不尽相同，使用方法也不尽一 致，但都具有向自动化和智能化发展的趋势，这对于使用者来说比较方便，只要参考说明书 轻轻触动键钮，输入或改变扩增程序、反应时间、温度等，置入扩增样品，扩增仪就会自动 完成整个扩增过程。这里仅以 PE 公司的 PCR 仪 480 为例，简单介绍该型机的使用。 1．打开主机电源，进入主菜单 Main Menu； 2．按箭头键←↑→↓选择文件 File 菜单，对原有程序进行编辑，或新建新程序； 3．新建扩增程序：开机后，屏幕显示版本信息后，出现 step to edit file# 3。 SOAK file# 1 的编辑： file# 1 是在某一温度下持续无限长时间，即只可修改温度。按 file →1→Enter 键；显示 SOAK temperature （0-100） 25℃；可根据实验需要修改温度，如要 30℃，按 3、0，再按
Enter键，显示End of file,RUN-STORE-PRINT,按NO,使光标至store的下方，按Enter 或yes键显示：File store Enter user#选择自己的数码代号，按数字键盘后，按Entg健，显 示：file store Enter file#选择空白程序号，按数字键盘，按Enter键，显示Yes to store User# x×fle#x×按yes健，此号即为用户存储程序。 Time delay File#2的编辑： Time delay file#是在某一温度下保温有限时间，按file→2一Enter键，显示：Time delay File1 S tep todfie#2按sep键，显示delay time(0-999)7min0sxe按要求修改后按 enter键，调好min,sec后，显示beep while delay?NO-YES,按NO一Enter,显示linktoa stored file,.若无需连接，按0→Enter,.按NO,让光标停留在sore下方，按Enta,按自己 的数码代号，按Enter,按程序代号，按yes(yes to store). File#3的编辑： File#3是温度循环，温度上升和下降比File#4慢，编此程序大致同File#4。 File#4的编辑： File#4是程序循环，温度上升和下降快。按File→4一Enter,显示step-cycle file Step to dit File#4,按sep,显示：segl target temperature94C,如需修改则按数字键后，按enter, 否则直接按enter,显示：segl segment time(0-999)1min0sec修改好min,sc后，按 enter,.显示：sxg2 target temperature37℃温度时间修改方法同上，完成后按enter,显示：scg3 target temp72C,温度时间修改同上，seg4全部按0，按enter,显示：auto seg extension NO YES,按NO,显示：auto seg extension,NO-YES,按enter(step/yes)回答yes,显示： extension per cycle(0-s9)1如果每个循环是延长1sec,按enter,否则修改后按enter键， 显示：eycle count(1-99)25,修改后，按enter键，显示link to store file(0-99,0=shu of)0,若不与其它程序连接则按0，enter,.若与其它程序连接则按程序号，按enter,.endof file RUN-STORE-PRNT按NO,光标至STORE下方，按ENTER,显示：file store enter fle#按程序代码，按enter,显示yes tostore User#xxx file#xxx按YES。 清除程序：按fe→所要清除的程序号→enter,.按fle→clear,显示file#×deleted enter new file#,这样你所需要清除的程序被清楚，这一空白程序则可编入新程序。 4.设置一个PCR体系：一般包括7步： (1)预变性：可用94~95℃，2~10min,一般用5min。 (2)变性：一般用94℃，30s-2min,一般45s-1min。 (3)退火：温度自定，30s-2min
Enter 键，显示 End of file，RUN-STORE-PRINT，按 NO，使光标至 store 的下方，按 Enter 或 yes 键显示：File store Enter user# 选择自己的数码代号，按数字键盘后，按 Enter 键，显 示：file store Enter file#选择空白程序号，按数字键盘，按 Enter 键，显示 Yes to store User # ××× file # ××× 按 yes 键，此号即为用户存储程序。 Time delay File # 2 的编辑： Time delay file #是在某一温度下保温有限时间，按 file →2→Enter 键，显示：Time delay File Step to edit file # 2 按 step 键，显示 delay time （0-999） 7 min 0 sec 按要求修改后按 enter 键，调好 min，sec 后，显示 beep while delay? NO- YES，按 NO→Enter，显示 link to a stored file，若无需连接，按 0→Enter，按 NO，让光标停留在 store 下方，按 Enter，按自己 的数码代号，按 Enter，按程序代号，按 yes （yes to store）。 File # 3 的编辑： File # 3 是温度循环，温度上升和下降比 File # 4 慢，编此程序大致同 File # 4。 File # 4 的编辑： File # 4 是程序循环，温度上升和下降快。按 File → 4→Enter,显示 step- cycle file Step to edit File # 4，按 step，显示：seg1 target temperature 94℃，如需修改则按数字键后，按 enter， 否则直接按 enter，显示：seg1 segment time （0-999）1 min 0 sec 修改好 min，sec 后，按 enter,显示：seg2 target temperature 37℃ 温度时间修改方法同上，完成后按 enter，显示：seg3 target temp 72℃，温度时间修改同上，seg 4 全部按 0，按 enter,显示：auto seg extension NOYES，按 NO，显示：auto seg extension，NO- YES，按 enter（step/yes） 回答 yes，显示： extension per cycle （0-59）1 如果每个循环是延长 1 sec，按 enter，否则修改后按 enter 键， 显示：cycle count （1-99）25，修改后， 按 enter 键，显示 link to store file （0-99，0= shut off） 0，若不与其它程序连接则按 0，enter. 若与其它程序连接则按程序号，按 enter，end of file RUN –STORE-PRINT 按 NO，光标至 STORE 下方，按 ENTER，显示： file store enter file # 按程序代码，按 enter，显示 yes to store User # ××× file # ×××按 YES。 清除程序：按 file →所要清除的程序号→enter，按 file →clear，显示 file # ×× deleted， enter new file #，这样你所需要清除的程序被清楚，这一空白程序则可编入新程序。 4．设置一个 PCR 体系：一般包括 7 步： （1）预变性：可用 94～95℃，2～10min,一般用 5min。 （2）变性：一般用 94℃，30s~2min,一般 45s~1min。 （3）退火：温度自定，30s~2min
(4)延伸：70~75℃，一般72℃，对于(2kb,<1min:>2kb,每增加1kb加1mim (5)循环数：一般2535个循环。 (6)最终延伸：72℃，5-15min (7)保存：10C,时间设为0： 5.按Start,运行程序： 6.运行程序结束后，取出扩增管，冷却热盖装置，关闭电源： 7.清理台面，认真做好仪器使用记录 第四节、如何撰写实验报告 实验报告是做完每个实验后的总结。通过汇报本人的实验过程与结果，分析总结实验的 经验和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，同时也是学习撰写研究论文的过程。实 验报告基本格式如下： 实验（编号） 实验名称 年级专业姓名日期页数 (一)目的和要求 (二)原理 (三)试剂和仪器 (四)操作方法 (五)实验结果 (六)讨论 书写实验报告应注意以下几点： (1)书写实验报告最好用练习本。也可以用单篇报告纸，为避免遗失，实验课全部结 束后可装订成册以便保存。 (2)简明扼要地概括出实验的原理，涉及化学反应，最好用化学反应式表示。 (3)应列出所用的试剂和主要仪器。特殊的仪器要画出简图并有合适的图解，说明化 学试剂时要避免使用未被普遍的商品名或俗名。 (4)实验方法步骤的描述要简洁，不要照抄实验指导书或实验讲义，但要写得明白， 以便他人能够重复。 (5)为了能重复以前的某些实验结果，或此次的结果能在今后再现，因此应记录实际 观察到的实验现象而不是照抄实验指导书所列应观察到的实验结果。并记录实验现象的所有
（4）延伸：70～75℃，一般 72℃，对于〈2kb,<1min；>2kb，每增加 1kb 加 1min。 （5）循环数：一般 25～35 个循环。 （6）最终延伸：72℃，5～15min。 （7）保存：10℃，时间设为 0。 5．按 Start ，运行程序； 6．运行程序结束后，取出扩增管，冷却热盖装置，关闭电源； 7．清理台面，认真做好仪器使用记录 第四节、如何撰写实验报告 实验报告是做完每个实验后的总结。通过汇报本人的实验过程与结果，分析总结实验的 经验和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，同时也是学习撰写研究论文的过程。实 验报告基本格式如下： 实验（编号） 实验名称 年级专业 姓名 日期 页数 （一）目的和要求 （二）原理 （三）试剂和仪器 （四）操作方法 （五）实验结果 （六）讨论 书写实验报告应注意以下几点： （1）书写实验报告最好用练习本。也可以用单篇报告纸，为避免遗失，实验课全部结 束后可装订成册以便保存。 （2）简明扼要地概括出实验的原理，涉及化学反应，最好用化学反应式表示。 （3）应列出所用的试剂和主要仪器。特殊的仪器要画出简图并有合适的图解，说明化 学试剂时要避免使用未被普遍的商品名或俗名。 （4）实验方法步骤的描述要简洁，不要照抄实验指导书或实验讲义，但要写得明白， 以便他人能够重复。 （5）为了能重复以前的某些实验结果，或此次的结果能在今后再现，因此应记录实际 观察到的实验现象而不是照抄实验指导书所列应观察到的实验结果。并记录实验现象的所有
细节。如只报告一个特殊实验中生成一种黄色沉淀是不够的。沉淀的真实颜色是什么，亮黄、 橘黄或其他？沉淀是多，是少，是胶状还是颗粒状？什么时候形成沉淀，立即生成、缓慢生 成、热时生成还是冷却时生成？所有这些都是显而易见的，但常常被忽视。报告在实验中的 真实发现对学生将是非常重要的科学研究训练。在科学研究中，仔细观察，特别注意未预期 的实验现象是十分重要的，这些观察常常引起意外的发现，而且为了重复工作也需要准确的 实验报告。在实验报告中只写“处死大鼠并取肝”是十分不合适的，必须给出鼠的品种、性 别、年龄和体重。鼠是饥饿的还是饱食的，.它是否用某种方式处理过？是如何处死它的？ 在评价实验结果时，上述各种因素都可能十分重要，因此必须记录， 如对定性实验，在分析 和有关实验的一些问题，如实验异常结果的分析，对于实验设计的认识、体会和建议，对实 验课的改进意见等。 第五节核酸分离纯化技术 实验一、基因组DNA的提取制备与检测 【实验目的】 1.了解基因组DNA的概念及其结构特点 2.掌握基因组DNA提取的基本原理和实验方法 3. 掌握DNA琼脂糖凝胶电泳检测的方法 4.掌握DNA浓度检测的方法 【实验原理】 基因组(genome)泛指一个有生命体、病毒或细胞器的全部遗传物质，也即来自一个 遗传体系的一整套遗传信总。基因组DNA(genomic DNA)即代表一个细胞或生物体整套 遗传信息（染色体及线粒体）的所有DNA。对所有原核生物（如细南）和噬菌体而言，它 们的基因组就是单个的环状染色体所含的DNA。对真核生物而言，基因组就是指一个生物 体的染色体所包含的全部DNA,通常又称为染色体基因组。染色体基因组是真核生物主要 的物质遗传基础，除此之外，真核细胞还有线粒体或叶绿体，分别含有线粒体或叶绿体DNA, 属于核外遗传物质，相应分别称为线粒体或叶绿体基因组。 在分子生物学研究中，获得相当纯度和完整性的基因组DNA,是在基因组DNA水平 上进行研究和分析的基本前提，基因组DNA样品质量的好坏将直接关系到后续实验的成败。 基因组DNA通常用于构建基因组文库、Southern杂交、多态性分析以及用PCR方法扩增克
细节。如只报告一个特殊实验中生成一种黄色沉淀是不够的。沉淀的真实颜色是什么，亮黄、 橘黄或其他？沉淀是多，是少，是胶状还是颗粒状？什么时候形成沉淀，立即生成、缓慢生 成、热时生成还是冷却时生成？所有这些都是显而易见的，但常常被忽视。报告在实验中的 真实发现对学生将是非常重要的科学研究训练。在科学研究中，仔细观察，特别注意未预期 的实验现象是十分重要的，这些观察常常引起意外的发现，而且为了重复工作也需要准确的 实验报告。在实验报告中只写“处死大鼠并取肝”是十分不合适的，必须给出鼠的品种、性 别、年龄和体重。鼠是饥饿的还是饱食的，.它是否用某种方式处理过？是如何处死它的？ 在评价实验结果时，上述各种因素都可能十分重要，因此必须记录。 （6）讨论不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。如对定性实验，在分析 实验结果基础上应有一简短而中肯的结论。讨论部分还可以包括关于实验方法（或操作技术） 和有关实验的一些问题，如实验异常结果的分析，对于实验设计的认识、体会和建议，对实 验课的改进意见等。 第五节 核酸分离纯化技术 实验一、基因组 DNA 的提取制备与检测 【实验目的】 1． 了解基因组 DNA 的概念及其结构特点 2． 掌握基因组 DNA 提取的基本原理和实验方法 3． 掌握 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测的方法 4． 掌握 DNA 浓度检测的方法 【实验原理】 基因组（genome）泛指一个有生命体、病毒或细胞器的全部遗传物质，也即来自一个 遗传体系的一整套遗传信息。基因组 DNA（genomic DNA）即代表一个细胞或生物体整套 遗传信息（染色体及线粒体）的所有 DNA。对所有原核生物（如细菌）和噬菌体而言，它 们的基因组就是单个的环状染色体所含的 DNA。对真核生物而言，基因组就是指一个生物 体的染色体所包含的全部 DNA，通常又称为染色体基因组。染色体基因组是真核生物主要 的物质遗传基础，除此之外，真核细胞还有线粒体或叶绿体，分别含有线粒体或叶绿体 DNA， 属于核外遗传物质，相应分别称为线粒体或叶绿体基因组。 在分子生物学研究中，获得相当纯度和完整性的基因组 DNA，是在基因组 DNA 水平 上进行研究和分析的基本前提，基因组 DNA 样品质量的好坏将直接关系到后续实验的成败。 基因组 DNA 通常用于构建基因组文库、Southern 杂交、多态性分析以及用 PCR 方法扩增克