三）细胞破碎 目的代谢产物并非都是分泌型的，许多是存在于细胞 内的，特别是基因工程菌在细胞内形成的包含体是不分泌 的，故需进行细胞破碎
三）细胞破碎 目的代谢产物并非都是分泌型的，许多是存在于细胞 内的，特别是基因工程菌在细胞内形成的包含体是不分泌 的，故需进行细胞破碎
大规模破碎细胞常用方法； 利用高压使细胞悬液通过针型阀，由于突然减压和高 速冲击撞击环，造成细胞破碎。 影响破碎的主要因素是压力、温度和循环次数 1、细胞破碎方法 1）高压匀浆法 高压匀浆器排出阀 2）高速球磨法 高速球磨机 1-物料进口 2-物料出口 3、4-冷却水进、出口 5、6-夹套冷却水进、出口 由于圆盘的高速旋转，细胞悬浮液与极细的玻璃 小珠、石英砂或氧化铝一起快速搅拌或研磨，使 细胞得以破碎。 3）超声波法 常用超声波频率15-25kHz； 细胞的破碎是由于超声波的空穴作用，由于这种空穴泡又 受到超声波的迅速冲击而闭合，从而产生极为强烈的冲击波 压力，由此引起的黏滞性旋涡在介质中的细胞上造成了剪切 应力，促使细胞内液体发生流动，造成细胞破碎； 超声波振荡易引起温度的剧烈上升，操作是需冷却； 通常杆菌比球菌易破，阴性菌比阳性菌易破 4）酶解法 专一性强，条件温和；但费用较高 酶解法的另一方式是利用微生物的自溶作用 即溶胞的酶是微生物自身产生的；大多数微生物都能产 生一种可以水解自身细胞壁上聚合结构的酶；当改变一定 的环境条件时，可诱发这种酶的过量产生或激发其他自溶 酶产生，而发生自溶现象。 5）渗透压冲击法 将细胞先放入高渗透压的介质中，如高浓度的甘油或蔗 糖液，在达到平衡后，介质突然被稀释，或将细胞转入水 或缓冲液中，水就会迅速进入细胞内，致使细胞膨胀，引 起细胞壁的破裂； 此法适用于细胞壁较脆弱的，或者细胞壁预先用酶处理 的，或细胞壁合成受到抑制的微生物； 6）反复冻结-融化法 将细胞反复在低温下突然冷冻后在室温下融化，引起 细胞破裂；低温冷冻一方面能使细胞膜的疏水键结构断 裂，从而增加细胞的亲水性能；另一方面胞内水结晶使 细胞内外溶液浓度发生变化，引起细胞突然膨胀而破裂。 该法适用于细胞壁较脆弱的细胞
大规模破碎细胞常用方法； 利用高压使细胞悬液通过针型阀，由于突然减压和高 速冲击撞击环，造成细胞破碎。 影响破碎的主要因素是压力、温度和循环次数 1、细胞破碎方法 1）高压匀浆法 高压匀浆器排出阀 2）高速球磨法 高速球磨机 1-物料进口 2-物料出口 3、4-冷却水进、出口 5、6-夹套冷却水进、出口 由于圆盘的高速旋转，细胞悬浮液与极细的玻璃 小珠、石英砂或氧化铝一起快速搅拌或研磨，使 细胞得以破碎。 3）超声波法 常用超声波频率15-25kHz； 细胞的破碎是由于超声波的空穴作用，由于这种空穴泡又 受到超声波的迅速冲击而闭合，从而产生极为强烈的冲击波 压力，由此引起的黏滞性旋涡在介质中的细胞上造成了剪切 应力，促使细胞内液体发生流动，造成细胞破碎； 超声波振荡易引起温度的剧烈上升，操作是需冷却； 通常杆菌比球菌易破，阴性菌比阳性菌易破 4）酶解法 专一性强，条件温和；但费用较高 酶解法的另一方式是利用微生物的自溶作用 即溶胞的酶是微生物自身产生的；大多数微生物都能产 生一种可以水解自身细胞壁上聚合结构的酶；当改变一定 的环境条件时，可诱发这种酶的过量产生或激发其他自溶 酶产生，而发生自溶现象。 5）渗透压冲击法 将细胞先放入高渗透压的介质中，如高浓度的甘油或蔗 糖液，在达到平衡后，介质突然被稀释，或将细胞转入水 或缓冲液中，水就会迅速进入细胞内，致使细胞膨胀，引 起细胞壁的破裂； 此法适用于细胞壁较脆弱的，或者细胞壁预先用酶处理 的，或细胞壁合成受到抑制的微生物； 6）反复冻结-融化法 将细胞反复在低温下突然冷冻后在室温下融化，引起 细胞破裂；低温冷冻一方面能使细胞膜的疏水键结构断 裂，从而增加细胞的亲水性能；另一方面胞内水结晶使 细胞内外溶液浓度发生变化，引起细胞突然膨胀而破裂。 该法适用于细胞壁较脆弱的细胞
2、细胞破碎率测定 当细胞内含物释放到水相时，会引起导电率的变化；随破 碎率的增加而增加，有线性关系； 因导电率的读数取决于微生物的种类、处理条件、细胞浓 度等，应先用其他方法标准化 1）直接测定法 观察计数（必要时配合染色技术） 2）测定释放的蛋白或酶活力 3）测定导电率
2、细胞破碎率测定 当细胞内含物释放到水相时，会引起导电率的变化；随破 碎率的增加而增加，有线性关系； 因导电率的读数取决于微生物的种类、处理条件、细胞浓 度等，应先用其他方法标准化 1）直接测定法 观察计数（必要时配合染色技术） 2）测定释放的蛋白或酶活力 3）测定导电率
三、沉淀法（Precipitation）
三、沉淀法（Precipitation）
沉淀是通过改变条件或加入某种试剂，使溶液中的溶质由液 相转变为固相析出的过程。 方法简单、成本低、使用广泛，一般作为初步分离的手段； 盐析法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 非离子型聚合物沉淀法 聚电解质沉淀法 生成盐复合物沉淀法 热变性及酸碱变性沉淀法
沉淀是通过改变条件或加入某种试剂，使溶液中的溶质由液 相转变为固相析出的过程。 方法简单、成本低、使用广泛，一般作为初步分离的手段； 盐析法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 非离子型聚合物沉淀法 聚电解质沉淀法 生成盐复合物沉淀法 热变性及酸碱变性沉淀法