测定管吸光度×2.5血清钙(mmo/L)=标准管吸光度【参考范围】成人：2.04~2.58mmol/L(8.2~10.3mg/dl)；儿童：2.21~2.78mmol/L(8.8~11.1mg/dl)。【注意事项】1．钙、镁等无机离子的测定受试管清洁度影响较大，因此必须保证试管清洁，或使用一次性试管，严防外源性Ca2+的污染2.严重脂血标本可产生正干扰，消除的办法是做标本空白管(0.05ml血清加5ml蒸馏水后于650nm得吸光度A值，然后与被测定管吸光度A值相减)。3．在碱性条件下，镁对钙测定有干扰，加入8-羟基喹啉-5-磺酸可消除镁的干扰，【评价】钙浓度在5mmol/L内，浓度与吸光度呈线性关系，且显色稳定。用定值质控血清做精密度实验，批内CV为1.66%，批间CV为2.08%。回收率范围96%~104%，平均回收率为100%。血红蛋白17g/L，胆红素103umol/L，对本法测定结果无明显干扰。该法与邻甲酚酞络合酮测定法所得结果呈高度相关，相关系数0.992。实验 58甲基百里香酚蓝法测定血清总钙【原理】在碱性条件下，血清钙与甲基百里香酚蓝(methyl thymol blue,MTB)结合生成蓝色络合物，显色后的吸光度值与钙浓度符合比尔定律。加入适当的8-羟基喹啉，可消除镁、铜及镉离子对测定的干扰，与同样处理的标准液进行比较，以求得血清总钙的含量。【试剂】1.MTB溶液称取MTB络合剂152mg，8-羟基喹啉650mg，聚乙烯吡略烷酮(PVP)2.0g，溶于二甲亚砜100ml中，加去离子水至1000ml，调pH至3.8～4.0。2.碱性溶液2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇21g，乙醇胺200ml，溶于去离子水并加至1000ml，pH约为12.5。3.消色剂乙二醇双(2-氨基乙醚)-四乙酸[ethyleneglycol-bis(2-aminoethylethen)N，NNN'tetraceticacidGTAJ500mg，2-氨基-2-甲基13-丙二醇2.1g溶于去离子水至100m4.钙标准液(2.5mmol/L）配制方法同实验57。【操作步骤】按表10-3操作
(mmol/L) 2.5 标准管吸光度 测定管吸光度 血清钙 ＝ 【参考范围】 成人：2.04～2.58mmol/L(8.2～10.3mg/dl)；儿童：2.21～2.78mmol/L(8.8～ 11.1mg/dl)。 【注意事项】 1．钙、镁等无机离子的测定受试管清洁度影响较大，因此必须保证试管清洁，或使用 一次性试管，严防外源性 Ca2+的污染。 2．严重脂血标本可产生正干扰，消除的办法是做标本空白管(0.05ml 血清加 5ml 蒸馏水 后于 650nm 得吸光度 A 值，然后与被测定管吸光度 A 值相减)。 3．在碱性条件下，镁对钙测定有干扰，加入 8-羟基喹啉-5-磺酸可消除镁的干扰。 【评价】 钙浓度在 5mmol/L 内，浓度与吸光度呈线性关系，且显色稳定。用定值质控 血清做精密度实验，批内 CV 为 1.66%，批间 CV 为 2.08%。回收率范围 96%～104%，平均 回收率为 100%。血红蛋白 17g/L，胆红素 103μmol/L，对本法测定结果无明显干扰。该法 与邻甲酚酞络合酮测定法所得结果呈高度相关，相关系数 0.992。 实验 58 甲基百里香酚蓝法测定血清总钙 【原理】 在碱性条件下，血清钙与甲基百里香酚蓝(methyl thymol blue , MTB)结合生 成蓝色络合物，显色后的吸光度值与钙浓度符合比尔定律。加入适当的 8-羟基喹啉，可消除 镁、铜及镉离子对测定的干扰，与同样处理的标准液进行比较，以求得血清总钙的含量。 【试剂】 1．MTB溶液 称取MTB络合剂152mg，8-羟基喹啉650mg，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)2.0g， 溶于二甲亚砜 100ml 中，加去离子水至 1 000ml，调 pH 至 3.8～4.0。 2．碱性溶液 2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇 21g，乙醇胺 200ml，溶于去离子水并加至 1 000ml，pH 约为 12.5。 3．消色剂 乙二醇双(2-氨基乙醚)-四乙酸[ethylene glycol-bis(2-aminoethylethen)N，N， N'，N'-tetraacetic acid，EGTA]500mg，2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇 2.1g 溶于去离子水至 100ml。 4．钙标准液(2.5mmol/L) 配制方法同实验 57。 【操作步骤】 按表 10-3 操作
表 10-33血清钙的MTB法操作程序加入物(ml)空白管标准管测定管0.05自清-一-标准液0.05一-去离子水0.05-MTB溶液1.501.501.50碱性溶液1.501.501.50充分混匀，放置5min后比色，波长612mm，以空白管调零，读取各管吸光度值。【计算】测定管吸光度×2.5血清钙(mmo/L)=标准管吸光度【参考范围】11成人：2.08~2.60mmol/L(8.3~10.4mg/dl);儿童：2.23~2.80mmo/L(8.911.2mg/)。【注意事项】1.MTB是一种优良的金属络合剂，也是酸碱指示剂。其水溶液在pH6.5～8.5为浅蓝色，在10.5～11.6为灰色，在12.7以上为深蓝色。为保证测定的精密准确，必须在强碱性环境进行显色反应(通常是用12±0.3)。2.MTB溶液在pH<4.0的酸性溶液中稳定，而在碱性条件下不稳定，容易在空气中逐渐氧化褪色，故显色剂宜新鲜配制。3．所用的玻璃器材必须严格清洗，以防止微量钙和其它金属离子的污染。4.EGTA能整合钙，消除钙质与MTB的显色反应，用作消除干扰实验。在操作中测定管和空白管加显色剂后测量吸光度值，然后各加消色剂0.02ml，以空白管调零，在612nm重新测吸光度值。若此吸光度值在0.01以下，表示无干扰物存在。若此吸光度值较高，表示有干扰，应从原来测定的吸光度值减去此值，得到消除干扰后的校正吸光度值。5.标本不能溶血。6.高脂血症时，亦可在测定管中加消色剂0.02ml。【评价】本方法显色稳定，显色后120min吸光度无波动。混合血清重复测定20次，变异系数为1.02%，回收率为99%~100%。线性范围在3.75mmol/L(15mg/dl)以下符合Bee定律。血清胆红素含量在68.4uμmol/L以下对结果无影响，但大于68.4umol/L时结果偏低
表 10-3 血清钙的 MTB 法操作程序 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 血 清 － － 0.05 标准液 － 0.05 － 去离子水 0.05 － － MTB 溶液 1.50 1.50 1.50 碱性溶液 1.50 1.50 1.50 充分混匀，放置 5min 后比色，波长 612nm，以空白管调零，读取各管吸光度值。 【计算】 (mmol/L) 2.5 标准管吸光度 测定管吸光度 血清钙 ＝ 【参考范围】 成人：2.08～2.60mmol/L(8.3～10.4mg/dl)；儿童：2.23～2.80mmol/L(8.9～ 11.2mg/)。 【注意事项】 1．MTB 是一种优良的金属络合剂，也是酸碱指示剂。其水溶液在 pH6.5～8.5 为浅蓝色， 在 10.5～11.6 为灰色，在 12.7 以上为深蓝色。为保证测定的精密准确，必须在强碱性环境进 行显色反应(通常是用 12±0.3)。 2．MTB 溶液在 pH＜4.0 的酸性溶液中稳定，而在碱性条件下不稳定，容易在空气中逐 渐氧化褪色，故显色剂宜新鲜配制。 3．所用的玻璃器材必须严格清洗，以防止微量钙和其它金属离子的污染。 4．EGTA 能螯合钙，消除钙质与 MTB 的显色反应，用作消除干扰实验。在操作中测定 管和空白管加显色剂后测量吸光度值，然后各加消色剂 0.02ml，以空白管调零，在 612nm 重新测吸光度值。若此吸光度值在 0.01 以下，表示无干扰物存在。若此吸光度值较高，表示 有干扰，应从原来测定的吸光度值减去此值，得到消除干扰后的校正吸光度值。 5．标本不能溶血。 6．高脂血症时，亦可在测定管中加消色剂 0.02ml。 【评价】 本方法显色稳定，显色后 120min 吸光度无波动。混合血清重复测定 20 次， 变异系数为 1.02%，回收率为 99%～100%。线性范围在 3.75mmol/L(15mg/dl)以下符合 Beer 定律。血清胆红素含量在 68.4μmol/L 以下对结果无影响，但大于 68.4μmol/L 时结果偏低