BamHI site 6, pBR322 BamHl sites BamHI digestion ↓ EcoRI ind I Foreign DNA BamHI digestion Pst I DNA ligase Tc replication Figure 10.1 The structure of plasmid pBR322,a typical Ap cloning vector,showing the essential features.The arrow indicates the direction of DNA replication from the origin. Hybrid containing Recyclized foreign DNA pBR322 Transformation of E.coli ↓ Transformants Transformants resistant to both resistant to ampicillin ampicillin and tetracycline but sensitive to tetracycline
Hind I Amp' BamHI Hind I BamH I Hind I Tet' 外源DNA 质粒载体 BamHI++Hind I 4 BamHI+Hind I Amp' H H B H B BH 凝胶电泳 Amp' H B DNA连接降 Amp B Amp 低效转化 高效转化 图516定向克隆法
2、λ噬菌体克隆载体 将野生型λ噬菌体DNA进行改造后建成，主要是去掉噬菌体 DNA上过多的常用限制酶的酶切位点，及对非必要基因区域 进行改造。 特点： 1）它的分子遗传学背景十分清楚 2）λ噬菌体载体的容量较大。一般质粒载体只能容纳10多个kb。 而λ噬菌体载体却能容纳大约23kb的外源DNA片段。 3）具有较高的感染效率。其感染宿主细胞的效率几乎可达100％， 而质粒DNA的转化率却只有0.1％。 4）和质粒相比，λ噬菌体具更为狭窄的寄主范围，更加安全
2、λ噬菌体克隆载体 将野生型λ噬菌体DNA进行改造后建成，主要是去掉噬菌体 DNA上过多的常用限制酶的酶切位点，及对非必要基因区域 进行改造。 特点： 1）它的分子遗传学背景十分清楚 2）λ噬菌体载体的容量较大。一般质粒载体只能容纳10多个kb。 而λ噬菌体载体却能容纳大约23kb的外源DNA片段。 3）具有较高的感染效率。其感染宿主细胞的效率几乎可达100％， 而质粒DNA的转化率却只有0.1％。 4）和质粒相比，λ噬菌体具更为狭窄的寄主范围，更加安全
粘性末端 CCCGCCGCTGGA 5.P 5.P 3 GGGCGGCGACCT 环化作用 (a) cos 开环结构 (b)
与溶原性相关的基因可以被外源DNA取代而不影响λ噬菌 体的感染、复制和裂解宿主细胞的能力
与溶原性相关的基因可以被外源DNA取代而不影响λ噬菌 体的感染、复制和裂解宿主细胞的能力