二）克隆载体 以扩增外源DNA为目的载体-克隆载体（cloning vector） 作为克隆载体的基本条件： 1）载体在细胞中必须能够进行独立自主地复制 2）载体应具有若干限制酶的单一切割位点，便于外源DNA的插入 3）载体必须具有可供选择的遗传标记 4）载体DNA须易于生长和操作
二）克隆载体 以扩增外源DNA为目的载体-克隆载体（cloning vector） 作为克隆载体的基本条件： 1）载体在细胞中必须能够进行独立自主地复制 2）载体应具有若干限制酶的单一切割位点，便于外源DNA的插入 3）载体必须具有可供选择的遗传标记 4）载体DNA须易于生长和操作
基因工程的常用载体： 质粒载体 λ噬菌体载体 柯斯质粒载体 M13噬菌体载体 噬菌粒载体 真核细胞的克隆载体 人工染色体
基因工程的常用载体： 质粒载体 λ噬菌体载体 柯斯质粒载体 M13噬菌体载体 噬菌粒载体 真核细胞的克隆载体 人工染色体
1、质粒克隆载体 a）低分子量有利于DNA的分离和操作； b）具有较高拷贝数； c）易于导入细胞； d）具有安全性； 特点： 质粒载体克隆外源DNA片段的大小一般不超过15Kb
1、质粒克隆载体 a）低分子量有利于DNA的分离和操作； b）具有较高拷贝数； c）易于导入细胞； d）具有安全性； 特点： 质粒载体克隆外源DNA片段的大小一般不超过15Kb
Ec0O1092674 396 Aatll 2617 NdeI183 Narl235 EcoRI SspI2501 SacI KpnI Smal Xmal Xmn12294 BamHI lacZ' Xbal Scal2177 -HinclI Piac Pstl Sphl Ap pUC19 lacI HindⅢ 2686bp 447 AHⅢ806 GsuI1784、 Cfr10I17791 Ppa11766 400 420 440 460 AGTGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGCGTAATCATGGTCAT EcoRI SacI KpnI -BamHI XbaI HinclI PstI SphI HindlIl Smal AccI 1 Xmal SafI lac ZThrlleMelThr(Met)
B-galactosidase gene (lacZ) cillin-resistance amo Restriction Plasmid site Polylinker Foreign DNA Restriction sites Recombinant plasmid S Bacterium reated bacteria are spread on a nutrient agar plate containing ampicillin and B-galactosidase substrate,and incubated. White colonies that appear must contain Figure 9.9 One method of selecting foreign DNA.Blue colonies must not recombinant bacteria. contain foreign DNA. Why are some colonies blue and other white?