2、核酸的理化性质一紫外吸收：紫外吸收8x103核酸中的嘌呤环与嘧啶环在260nm16处有最大紫外吸收。腺嘌鸭光质胞密啶OD260的应用8鸟嘌岭1.DNA或RNA的定量OD260=1.0相当于尿磨院4胸腺嘧啶50μg/ml双链DNA2202402602803004Oμg/ml单链DNA（或RNA）波长20μg/ml寡核苷酸2.判断核酸样品的纯度DNA纯品：OD260/OD280 = 1. 8OD260/OD280 = 2. 0RNA纯品：含杂蛋白或苯酚，降低
核酸中的嘌呤环与嘧啶环在260nm 处有最大紫外吸收。 2、核酸的理化性质-紫外吸收： 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 含杂蛋白或苯酚，降低 OD260的应用
3、核酸的理化性质-DNA变性与复性1、核酸的变性（1）概念：指核酸双螺旋区的的氢键断裂，空间结构破坏、变成单链无规则线团的过程。(2)变性因素：温度升高、过酸过碱、纯水、甲醛和尿素等的存在(3）变性实质：双链间氢键断开，成为两条单链，并不涉及磷酸二酯键的断裂，其一级结构（碱基顺序）保持不变
1、核酸的变性 （1）概念：指核酸双螺旋区的的氢键断裂，空间结构破坏、 变成单链无规则线团的过程。 （2）变性因素：温度升高、过酸过碱、纯水、甲醛和尿素 等的存在 （3）变性实质：双链间氢键断开，成为两条单链 ，并不涉及磷酸二酯键的断裂，其一级结构(碱基顺序)保 持不变。 3、核酸的理化性质-DNA变性与复性：
DNA变性的本质是双链间氢键的断裂加热A缓慢冷却天然DNA变性DNA3天然DNA0.42变性DNA30.3核苷酸总吸收值光吸收增色效应：核酸变性后，双链0.2DNA解链成单链DNA，26Onm紫0.1外吸收值显著增加减色效应：核酸复性后，220240260280260nm紫外吸收值又回复到原波长（nm）有水平
DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 增色效应: 核酸变性后，双链 DNA解链成单链DNA，260nm紫 外吸收值显著增加 减色效应: 核酸复性后， 260nm紫外吸收值又回复到原 有水平。 天然DNA 变性DNA 核苷酸总吸收值 1 2 3
，熔解温度(melting temperature)：DNA的变性发生在一个很窄的温度范围内，通常把热变性过程中260nm紫外吸收的增加量达最大增量一半时的温度值。溶解温度，用Tm表示影响Tm的因素：4（1）DNA的均一性：均一性愈高的样品，溶1.3解过程愈是发生在一个很小的温度范围内1.2(2）G-C对含量：GC含量越高，Tm越大（3）溶液的离子强度：DNA在离子强度较低1.1的介质中，Tm较低，Tm的范围也较宽；而在758565较高的离子强度的介质中，情况则相反。Temperature (°C)（4）pH：高pH下碱基广泛去质子而丧失形成[G+CI=35%氢键的能力。[G+C] = 50%(5）变性剂：如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏3[G+C] = 66%氢键，妨碍碱基堆积，使Tm下降
熔解温度（melting temperature）： DNA的变性发生在一个很窄的温度范围内，通常把热变性过程 中260nm紫外吸收的增加量达最大增量一半时的温度值。 溶解温度，用Tm表示 影响Tm的因素： (1) DNA的均一性：均一性愈高的样品，溶 解过程愈是发生在一个很小的温度范围内 (2) G-C对含量：GC含量越高，Tm越大 (3) 溶液的离子强度：DNA在离子强度较低 的介质中，Tm较低，Tm的范围也较宽；而在 较高的离子强度的介质中，情况则相反。 (4) pH：高pH下碱基广泛去质子而丧失形成 氢键的能力。 (5) 变性剂：如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏 氢键，妨碍碱基堆积，使Tm下降。 [G+C] = 66% [G+C] = 50% 1 [G+C] = 35% 2 3
2、DNA复性除去变性因素后，互补的单链DNA又可以重新结合为二级双链DNA并恢复生物活性的现象称复性（renaturation)。热变性核酸复性时需缓慢冷却，这一过程称为退火。复性后，核酸的紫外吸收降低，这种现象被称作减色效应
2、DNA复性 除去变性因素后，互补的单链DNA又可以重新结合为二级 双链DNA并恢复生物活性的现象称复性（renaturation）。 热变性核酸复性时需缓慢冷却，这一过程称为退火。 复性后，核酸的紫外吸收降低，这种现象被称作减色效 应