效价测定一般原则1、国际通用方法；2、测定结果须用国际或国家标准品校正，以国际单位表示
效价测定一般原则 1、国际通用方法； 2、测定结果须用国际或国家标准品 校 正，以国际单位表示
生物学活性测定方法分类1）体外细胞培养测定法促进细胞生长作用（G-CSF:NFS-60）a.b.抑制细胞生长作用(TNF:L929)间接保护细胞作用(IFN:VISH:VSV-C2）离体动物器官测定法采用家兔主动脉条测定重组脑利钠肽生物活性3)体内测定法生化酶促反应测定法5免疫学活性测定法
生物学活性测定方法分类 1）体外细胞培养测定法 a、促进细胞生长作用（G-CSF:NFS-60） b、抑制细胞生长作用 (TNF:L929) c、间接保护细胞作用 (IFN:VISH;VSV) 2）离体动物器官测定法 采用家兔主动脉条测定重组脑利钠肽生物 活性。 3）体内测定法 4）生化酶促反应测定法 5）免疫学活性测定法
取兔离体动脉条剪成约1.5cm长、2~3mmX宽的螺旋环，悬挂于含10mL通氧的37℃台氏液(取NaC18.0g、KC10.2 g、CaCI20.2g、NaH2PO40.05g、MgSO4-7H200.1g、NaHCO3 1.0 g、Glucose 1.0g用蒸馏水配成1000mL的溶液，置于玻璃或塑料瓶中，用1mol·L-1NaOH溶液调pH至7.4的麦氏浴槽中，加负荷1g，稳定1h，期间每20min换1次台氏液：连接多导记录仪，调节灵敏度，记录血管的张力变化
❖ 取兔离体动脉条剪成约1.5cm 长、2～3 mm 宽的螺旋环，悬挂于含10mL通氧的37℃台 氏液(取NaC1 8.0 g、KC1 0.2 g、CaCl 20.2g、NaH2PO40.05g、MgSO4·7H2O 0.1g、NaHCO3 1.0 g、Glucose 1.0g用蒸 馏水配成1 000 mL的溶液， 置于玻璃或塑料 瓶中，用1 mol·L -1 NaOH 溶液调pH 至7.4) 的麦氏浴槽中，加负荷1g，稳定1h，期间每 20min换1次台氏液： 连接多导记录仪，调 节灵敏度，记录血管的张力变化
*待张力曲线基线稳定后，加入1.25mg·mL-1盐酸去氧肾上腺素溶液0.05mL于麦氏浴槽中使其终浓度为6.25×10-5mg?mL-1，曲线升高至最高并稳定后，开始按累计浓度给药法（曲线稳定后对倍增加样品浓度为：6.25×10-5~8.0×10-2RU·mL）加入重组人脑利钠肽对照品，记录血管的张力变化。完成上述给药后，洗脱并稳定1h期问每20min换1次台氏液。待基线稳定后按测定对照品的方法测定待测样品，记录测定结果。计算对照品和各实验样品的半效稀释倍数按下式计算样品效价：样品效价=对照品效价×样品半效稀释倍数/对照品半效稀释倍数
❖ 待张力曲线基线稳定后，加入1.25 mg·mL-1盐 酸去氧肾上腺素溶液0.05 mL于麦氏浴槽中使其 终浓度为6.25×10-5 mg·mL-1 ，曲线升高至最 高并稳定后，开始按累计浓度给药法(曲线稳定 后对倍增加样品浓度为：6.25×10-5～8.0×10-2 RU·mL )加入重组人脑利钠肽对照品，记录血管 的张力变化。完成上述给药后，洗脱并稳定1 h， 期问每20 min换1次台氏液。待基线稳定后， 按测定对照品的方法测定待测样品，记录测定结 果。计算对照品和各实验样品的半效稀释倍数， 按下式计算样品效价：样品效价=对照品效价× 样品半效稀释倍数／对照品半效稀释倍数
生物学活性测定方法选择体内测定和体外测定方法a、体内测定：即整体动物测定，能为较大范围的重组产品的效价提供有用信息，但费时昂贵、难操作及同时存在伦理问题，大多数情况下倾向于选择体外测定方法。b、体外测定：可使用分离的器官或组织原代细胞或传代细胞系，自前最常用方法是连续生长、因子依赖的、克隆化的细胞系的方法重现性好、经济、容易其测定结果比较准确使用和便于统计分析
生物学活性测定方法选择 体内测定和体外测定方法 a、体内测定：即整体动物测定，能为较大范 围的重组产品的效价提供有用信息，但费时、 昂贵、难操作及同时存在伦理问题，大多数情 况下倾向于选择体外测定方法。 b、体外测定：可使用分离的器官或组织、 原代细胞或传代细胞系，目前最常用方法是连 续生长、因子依赖的、克隆化的细胞系的方法， 其测定结果比较准确、重现性好、经济、容易 使用和便于统计分析