生物学活性测定方法选择2、定量、半定量、定性方法a、通过研究首先选择能够定量评价的方法，最好的选择是背景较低的反应，并且对相关产品有陡哨的、可重复的剂量-反应曲线：其次考虑半定量方法（如NGF），最后考虑定性（如BMP）方法。b、对生产工艺稳定，生物学活性测定方法复杂，可采用其他替代方法（如重组人生长激素用HPLC定量方法代替复杂生物活性测定方法）
生物学活性测定方法选择 2、定量、半定量、定性方法 a、通过研究首先选择能够定量评价的方 法，最好的选择是背景较低的反应，并且对 相关产品有陡峭的、可重复的剂量-反应曲 线；其次考虑半定量方法（如NGF），最 后考虑定性（如BMP）方法。 b、对生产工艺稳定，生物学活性测定方 法复杂，可采用其他替代方法（如重组人生 长激素用HPLC定量方法代替复杂生物活性 测定方法）
细胞培养法中细胞染色标记方法增殖3H-thymidine、BrdU是反映DNA合成、细胞数的比例的。BrdU：首先用BrdU做标记，固定细胞，用核苷酸酶处理后使过氧化物酶结合抗BrdU抗体发生反应MTT（四氮唑盐）：其在活细胞的线粒体中可以定量地被琥珀酸脱氢酶还原为难溶性的蓝紫色结晶物MTTformazan,二甲基亚（DMSO）和酸化的异丙醇或酸化的SDS均能溶解紫色结晶物，通过比色法测定MTTformazan的量可以反映线粒体电子传递系统
细胞培养法中细胞染色标记方法 3H-thymidine、BrdU 是反映DNA合成、增殖 细胞 数的比例的。BrdU：首先用BrdU做标记，固定细 胞，用核苷酸酶处理后使过氧化物酶结合抗BrdU抗 体发生反应。 MTT（四氮唑盐）：其在活细胞的线粒体中可以 定量地被琥珀酸脱氢酶还原为难溶性的蓝紫色结晶 物MTT formazan,二甲基亚砜（DMSO）和酸化的 异丙 醇或酸化的SDS均能溶解紫色结晶物，通过比色法 测 定MTT formazan的量可以反映线粒体电子传递系 统
AlamarBlue：氧化型AlamarBlue（600nm）可被活细胞中的线粒体酶还原，还原后染料（570nm）发生颜色和荧光改变，颜色和荧光的深浅与活细胞数成正比，可用分光光度计或荧光检测仪检测，Crystalviolet：染活细胞后，在比色计中测定光吸收值（A），A值与着染色细胞数成正比
Alamar Blue：氧化型Alamar Blue （600nm）可被活细胞中的线粒体酶还原，还 原后染料（570nm）发生颜色和荧光改变，颜 色和荧光的深浅与活细胞数成正比，可用分光光 度计或荧光检测仪检测。 Crystal violet：染活细胞后，在比色计中测 定光吸收值（A），A值与着染色细胞数成正比
几种细胞培养测定方法比较3H-thymidineBrdUMTTAlamarBlue靶向物←一DNA合成系统→一线粒体电子传递系统增殖→检出细胞的状态← 增殖、生存→色素检出法放射活性色素、荧光色素、荧光抽出的必要性+++++++其他试剂的必要性1602成本（以MTT为1时）80-100（试剂盒）缺点不适合使用同位素检出未增检出大量未增殖浮游细胞细胞，处理时费力殖活细胞
几种细胞培养测定方法比较 3H-thymidine BrdU MTT Alamar Blue 靶向物 DNA合成系统 线粒体电子传递系统 检出细胞的状态 增殖 增殖、生存 检出法 放射活性 色素、荧光 色素 色素、荧光 抽出的必要性 + + + - 其他试剂的必要性 + ++ + - 成本（以MTT为1时） 60 80-100（试剂盒） 1 2 缺点 使用同位素 不适合 检出大量未增殖 检出未增 浮游细胞 细胞，处理时费力 殖活细胞
生物学活性测定分析方法1、用能诱导50%最大反应的待测样品最高稀释度作为参考效价（或滴度），或以此稀释度中所含样品的量为1单位，即以此稀释度的倒数为待测样品所含的单位数。2、比较已知浓度或活性单位样品标准品和待测样品的实验结果待测样品活性标准A品值稀释度ab生物学测定基本模式图
生物学活性测定分析方法 1、用能诱导50%最大反应的待测样品最高稀释 度作为参考效价（或滴度），或以此稀释度中所含 样品的量为1单位，即以此稀释度的倒数为待测样 品所含的单位数。 2、比较已知浓度或活性单位样品标准品和待测 样品的实验结果。 活性标准 品 待测样品 a b 稀释度 A 值 生物学测定基本模式图