3、综合影响 综合以上两种影响分配系数的主要因素，可用Gerson提出的公式表 示。 a表面积 4y两相表面自由能之差 -lgK=aay+64p+阝 6电荷数 4p电位差 B为标准化学位和活度系 数组成的常数 大分子的表面积都很大，4y的微小变化都会引起蛋白质大分子 的分配系数产生很大变化； 加入系统的盐，以及体系的pH会影响相间电位差△和蛋白质所带 的电荷数6，因而也对分配系数产生大的影响。 21
综合以上两种影响分配系数的主要因素，可用Gerson提出的公式表 示。 -lgK = α△γ + δ△φ + β 大分子的表面积α都很大， △γ 的微小变化都会引起蛋白质大分子 的分配系数产生很大变化； 加入系统的盐，以及体系的pH会影响相间电位差△φ和蛋白质所带 的电荷数δ，因而也对分配系数产生大的影响。 3、综合影响 21 α 表面积 △γ 两相表面自由能之差 δ 电荷数 △φ 电位差 β 为标准化学位和活度系 数组成的常数
双水相萃取学习提纲 1.双水相由哪些成分组成？ 一、概念和原理 2.双水相体系是如何形成的？ 3.双水相萃取有哪些优点？ 4.双水相体系相图 二、双水相的分配理论 1.表面自由能的影响 2.表面电荷的影响 三、影响双水相萃取的因素 1.聚合物 2.无机盐 3.pH值 四、应用 4.温度 5.微生物 22
22 双水相萃取学习提纲 一、概念和原理 二、双水相的分配理论 四、应用 1. 双水相由哪些成分组成？ 2. 双水相体系是如何形成的？ 3. 双水相萃取有哪些优点？ 4. 双水相体系相图 三、影响双水相萃取的因素 1. 表面自由能的影响 2. 表面电荷的影响 1. 聚合物 2. 无机盐 3. pH值 4. 温度 5. 微生物
影响双水相萃取的参数 (1)聚合物的影响 >典型的PEG/DeX双水相系统中，PEG分 子量的减少，会使蛋白质在两相中的分 配系数明显增大 >成相聚合物的疏水性对酶等亲水性物质 4000.10000 20000 40000 的分配产生较大的影响：聚合物分子量越 PEC平均分子量 小，疏水性越小，蛋白质等溶质更容易分配到 图75PEG平均分子量对分配率的影响8)] O普鲁兰酶 富含该聚合物的一相。 (12%PEG,1%DexT 500,100mmol/L NasPOa,pH7.5) ☐1,4-Q葡聚糖磷酸酶 >通过选择聚合物相对分子量大小来调控 (9.3%PEG,7%DexT500,50mmol/L KaPO,pH7.8) ●亮氨酰基-RNA合成酶 溶质分配方向。 (9.2g/100ml PEG,6.3g/100ml DexT200,73mmol/L K3PO,pH7.8) 23
（1）聚合物的影响 Ø 典型的PEG/Dex双水相系统中，PEG分 子量的减少，会使蛋白质在两相中的分 配系数明显增大 Ø 成相聚合物的疏水性对酶等亲水性物质 的分配产生较大的影响：聚合物分子量越 小，疏水性越小，蛋白质等溶质更容易分配到 富含该聚合物的一相。 Ø 通过选择聚合物相对分子量大小来调控 溶质分配方向。 影响双水相萃取的参数 23
2 I)ex平均分子敏(×10) 图7-6Dex的平均分子量对分配率的影响[8] 口α葡萄糖苷酶 (10%PEG4000,5%Dex,100mmol/L K3PO4,pH6.3) ○异亮氨酰基合成酶 (9.2g/100ml PEG6000,6.2g/100ml Dex,73mmol/L K3PO4,pH7.0) 24
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(2)体系中无机盐离子的影响 影响相间电位 表7-2 一些无机离子的分配系数 正离子 分配系数K+ 负离子 分配系数K K+ 0.824 I 1.42 Na+ 0.889 Br 1.21 NH* 0.92 ci- 1.12 Li计 0.996 F 0.912 注：双水相系统为8%PEG4000,8%DexT500,25℃，界面电位为0。 >无机盐离子在两相中也有不同的分配，因此在两相间形成电位差。 >由于各相要保持电中性，使得带电生物大分子，如蛋白质和核酸等分别向 两相移动分配。 25
(2)体系中无机盐离子的影响 影响相间电位 25 Ø 无机盐离子在两相中也有不同的分配，因此在两相间形成电位差。 Ø 由于各相要保持电中性，使得带电生物大分子，如蛋白质和核酸等分别向 两相移动分配