上游充通大兽 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY b)Dialysis:透析 常用于蛋白脱盐 通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液)的原 理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。 Semipermeable bag containing protein solution Dialysis bag Dialysate Concentrated solution Stir bar Buffer Magnetic stirrer At start of dialysis At equilibrium for mixing Figure 3.2 Dialysis.Protein molecules(red)are retained within the dialysis bag.whereas small molecules(blue)diffuse into the surrounding medium
1. The Purification of Proteins Figure 3.2 Dialysis. Protein molecules (red) are retained within the dialysis bag. whereas small molecules (blue) diffuse into the surrounding medium. b) Dialysis: 透析 通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原 理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。 常用于蛋白脱盐
上游充通大兽 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY c)Gel-filtration:凝胶过滤层析（分子筛) 惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖（如葡聚糖或琼脂糖） 按分子量由大到小依次分离 Carbohydrate polymer bead Small molecules enter the aqueous spaces within beads Protein sample Large molecules Molecular cannot enter exclusion beads gel i00000i000iii000 Flow direction
1. The Purification of Proteins c）Gel-filtration：凝胶过滤层析（分子筛） 惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖（如葡聚糖或琼脂糖） 按分子量由大到小依次分离
上游充通大兽 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 2)根据分子电荷不同的分离方法： lon-exchange chromatography(离子交换层析)： 依据蛋白质净电荷差异达到分离目的 酸性蛋白质：天冬氨酸和谷氨酸占优势，pH7.0时带负电荷 碱性蛋白质：赖氨酸和精氨酸占优势，pH7.0时带正电荷 酸 碱 酸 带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 带负电荷的蛋白质 蛋白质净电荷取决于环境pH
1. The Purification of Proteins lon-exchange chromatography （离子交换层析）： 依据蛋白质净电荷差异达到分离目的 2）根据分子电荷不同的分离方法： 酸性蛋白质：天冬氨酸和谷氨酸占优势，pH 7.0时带负电荷 碱性蛋白质：赖氨酸和精氨酸占优势，pH 7.0时带正电荷 蛋白质净电荷取决于环境pH
上游究更大学 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY lon-exchange chromatography 纤维素、葡聚糖或琼脂糖凝胶骨架： CH3 H2C +H CH3 Cellulose Cellulose or or H2 H2 agarose agarose Carboxymethyl Diethylaminoethyl (CM)group (DEAE)group (ionized form) (protonated form) 羧甲纤维素- 二乙氨乙基纤维素- 阳离子交换树脂 阴离子交换树脂 结合正电蛋白质 结合负电蛋白质 蛋白质净电荷越多，结合能力越强
1. The Purification of Proteins lon-exchange chromatography 二乙氨乙基纤维素- 阴离子交换树脂 结合负电蛋白质 羧甲纤维素- 阳离子交换树脂 结合正电蛋白质 纤维素、葡聚糖或琼脂糖凝胶骨架： 蛋白质净电荷越多，结合能力越强
上游究更大学 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY lon-exchange chromatography 可以根据蛋白质净电荷差异预测蛋白的分离顺序 阴离子 交换树脂 d 离子交换层析分离蛋白质
1. The Purification of Proteins lon-exchange chromatography 可以根据蛋白质净电荷差异预测蛋白的分离顺序