上游充通大学 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 蛋白质的分离纯化： 复杂样品→目标蛋白 血红蛋白 红细胞 血液样本
1. The Purification of Proteins 血红蛋白 红细胞 血液样本 蛋白质的分离纯化: 复杂样品 目标蛋白
上游充通大兽 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 蛋白分离纯化的目的与意义 获取高纯度蛋白：蛋白质修饰与蛋白结晶的前提 提高蛋白生化性能：排除杂蛋白的干扰 ©蛋白及多肽类药品质量要求：去除杂蛋白（抗原性） 兔 公 analysis
蛋白分离纯化的目的与意义 获取高纯度蛋白：蛋白质修饰与蛋白结晶的前提 提高蛋白生化性能：排除杂蛋白的干扰 蛋白及多肽类药品质量要求：去除杂蛋白（抗原性） 1. The Purification of Proteins
上游充通大学 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 常用蛋白分离纯化方法 >根据分子大小、密度不同分离： 离心 透析 凝胶过滤层析 >根据分子电荷不同的分离方法：离子交换层析 >利用蛋白质亲和性差异进行分离：亲和层析 >蛋白质分离纯化系统：HPLC
1. The Purification of Proteins 常用蛋白分离纯化方法 根据分子大小、密度不同分离： • 离心 • 透析 • 凝胶过滤层析 根据分子电荷不同的分离方法：离子交换层析 利用蛋白质亲和性差异进行分离：亲和层析 蛋白质分离纯化系统：HPLC
上游充通大兽 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 1)根据分子大小、密度不同的分离方法： a)Centrifugation:离心 血浆蛋白 7% 白蛋白54% 球蛋白38% 血浆 55% 纤维蛋白原7% 其它1% 水 91,5% 电解质 营养物质 气体 激素 血浆 推生素 55% 废物 其它物质 1,5% 血浆（重） 溶质 白国胞 血小板 中性粒细胞 口血小板 血细胞 459% 150,000-400.000 60-70% e991s 33 白细胞 5.000-10.000 红细鲍 45% 红细胞 淋巴细胞 4,8-5,4百万 20-25% 单核细胞 3-8% 血液样本 喷碱性粒细胞 全血 0.5-10% 嘴酸性粒细跑 2一4% 容量 有形成分 白细跑
1. The Purification of Proteins a) Centrifugation：离心 血液样本 1）根据分子大小、密度不同的分离方法：
上游充通大兽 1.The Purification of Proteins SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY Differential centrifugation:差速离心 利用样品中各种组分的沉降系数不同而进行分离的方法。在 差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：细胞核、线粒体、微 粒体。 Centrifuge at5oo>×g for 10 minutes Supernatant Homogenate forms 10,000>×9 Pellet:Nuclear 20 minutes fraction 利用速度梯度，使 各种沉降系数不同 100,000>×g Pellet:Mitochondrial 的颗粒先后沉淀下 I hour fraction 来，达到分离的目 的。 Cytoplasm (soluble proteins) Pellet:Microsomal fraction
1. The Purification of Proteins Differential centrifugation：差速离心 利用样品中各种组分的沉降系数不同而进行分离的方法。在 差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：细胞核、线粒体、微 粒体。 利用速度梯度，使 各种沉降系数不同 的颗粒先后沉淀下 来，达到分离的目 的