【参考范围】同二乙酰一法(实验79)。【注意事项】1．在340nm试剂空白对水的吸光度应大于1.00A，试剂浑浊或吸光度低于1.00A的应放弃使用。2．测定过程中，各种器材和去离子水均应无氨离子污染，防止交叉污染，否则结果偏高3.血液标本最好用血清，含NaF的血浆可导致结果偏低。4．在内源性氨正常时，本法能用于测定尿中的尿素。因为在反应的最初几秒种内内源性氨会很快被耗尽，随后在340nm测定的是由脲酶催化尿素反应生成的氨所引起的吸光度。【评价】1.本法批内CV0.78%，批间CV2.94%；回收率93.0%~105.3%，线性上限为17.85mmol/L2．血红蛋白对测定有一定的干扰，应避免标本溶血。在自动分析仪中测定，因标本被大量稀释，故不受其它含氮化合物、胆红素、血红蛋白及高血脂的干扰。第二节血清肌酐测定肌酐的检测目前多用的仍然是碱性苦味酸比色法，手工分析需去除蛋白后再测定，以避免假肌酐干扰；自动化分析则用碱性苦味酸速率法或两点法即能避开假肌酐影响。近几年发展了酶法，如肌酐酰胺水解酶法、肌酐亚氨水解酶法等，但在临床上应用尚少。实验82去蛋白碱性苦味酸法测定血清肌酐【原理】血浆或血清标本经除蛋白处理后，肌酐与碱性苦味酸产生Jaffe反应，生成橙红色的苦味酸肌酐复合物，在510nm和520nm间测定吸光度，与肌酐含量成正比。尿液标本可稀释后直接测定。【试剂】1.35mmol/L钨酸溶液(1)100ml去离子水中，加入1g聚乙烯醇，加热助溶(勿煮沸)，冷却。(2)300ml去离子水中，加入11.1g钨酸钠(Na2WO42H20,Mw329.81)，使完全溶解；(3)300ml去离子水中，慢慢加入2.1ml浓硫酸，冷却。于1L容量瓶中，将(1)液加入(2)液中，再与(3)液混匀，加去离子水至刻度，室温稳定1年。6
6 【参考范围】 同二乙酰一肟法(实验 79)。 【注意事项】 1．在 340nm 试剂空白对水的吸光度应大于 1.00A，试剂浑浊或吸光度低于 1.00A 的应放 弃使用。 2．测定过程中，各种器材和去离子水均应无氨离子污染，防止交叉污染，否则结果偏高。 3．血液标本最好用血清，含 NaF 的血浆可导致结果偏低。 4．在内源性氨正常时，本法能用于测定尿中的尿素。因为在反应的最初几秒种内内源性 氨会很快被耗尽，随后在 340nm 测定的是由脲酶催化尿素反应生成的氨所引起的吸光度。 【评价】 1．本法批内CV 0.78%，批间CV 2.94%；回收率93.0%～105.3%，线性上限为17.85mmol/L。 2．血红蛋白对测定有一定的干扰，应避免标本溶血。在自动分析仪中测定，因标本被大 量稀释，故不受其它含氮化合物、胆红素、血红蛋白及高血脂的干扰。 第二节 血清肌酐测定 肌酐的检测目前多用的仍然是碱性苦味酸比色法，手工分析需去除蛋白后再测定，以避 免假肌酐干扰；自动化分析则用碱性苦味酸速率法或两点法即能避开假肌酐影响。近几年发 展了酶法，如肌酐酰胺水解酶法、肌酐亚氨水解酶法等，但在临床上应用尚少。 实验 82 去蛋白碱性苦味酸法测定血清肌酐 【原理】 血浆或血清标本经除蛋白处理后，肌酐与碱性苦味酸产生 Jaffé反应，生成橙 红色的苦味酸肌酐复合物，在 510nm 和 520nm 间测定吸光度，与肌酐含量成正比。尿液标本 可稀释后直接测定。 【试剂】 1．35mmol/L 钨酸溶液 (1) 100ml 去离子水中，加入 1g 聚乙烯醇，加热助溶(勿煮沸)，冷却。 (2) 300ml 去离子水中，加入 11.1g 钨酸钠(Na2WO4 2H2O,Mw 329.81)，使完全溶解； (3) 300ml 去离子水中，慢慢加入 2.1ml 浓硫酸，冷却。 于 1L 容量瓶中，将(1)液加入(2)液中，再与(3)液混匀，加去离子水至刻度，室温稳定 1 年
2.0.04mol/L苦味酸溶液苦味酸(Mw229.104)9.3g，溶于500ml80℃去离子水中，冷却至室温，加去离子水至IL。用0.1mol/L氢氧化钠滴定，以酚酞作指示剂。根据滴定结果，用去离子水定容至0.04mmol/L。0.04mol/L氢氧化钠1ml相当于0.04mmol/L苦味酸1ml(9.1644mg)。3.0.75mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠30g，加去离子水使其溶解，冷却后用去离子水定容至1L。4.肌酐标准贮存液(10mmol/L）113mg肌酐(Mw113.12)用0.1mol/L盐酸溶解，并移入100ml容量瓶内，再用0.1mo/L盐酸定容至刻度。5.肌酐标准应用液(100μmol/L）取1ml肌酐标准贮存液，用0.1mo/L盐酸稀释至100ml。【操作步骤】1.取血清(或血浆)0.5ml，加入35mmo/L钨酸溶液4.5ml，充分混勺，静置5min,3000r/min离心10min，取上清液；若为尿液标本用去离子水作1:200稀释。2.按表13-4操作。表13-4去蛋白碱性苦味酸法操作步骤加入物(ml)测定管标准管空白管血清无蛋白滤液(或1:200稀释尿液）3.03.0肌酐标准应用液3.0去离子水1.0 苦味酸溶液1.01.01.01.0氢氧化钠溶液1.0混匀后室温15min，波长510nm，空白管调零，读取各管吸光度。【计算】A血清肌酐(μmol /L):×100A标准【参考范围】男性：44~133μmol/L；女性：70~106μmol/L【临床意义】血液肌酐经肾小球过滤，肾小管既不重吸收，也不分泌，即肾脏对肌酐的排泄能力强，因而肾脏疾病早期血浆肌酐通常不高，在反映肾小球滤过率下降方面，血肌酐比血尿素的灵敏度低。但血肌酐受饮食、运动、激素、蛋白质代谢等因素的影响较少，所以诊断特异性比血尿素好。【注意事项】1.据报道碱性肌酐苦味酸复合物的最大吸光度在485nm，过量苦味酸离子存在于反应液
7 2．0.04mol/L 苦味酸溶液 苦味酸(Mw229.104)9.3g，溶于 500ml 80℃去离子水中，冷却 至室温，加去离子水至 1L。用 0.1mol/L 氢氧化钠滴定，以酚酞作指示剂。根据滴定结果，用 去离子水定容至 0.04mmol/L。0.04mol/L 氢氧化钠 1ml 相当于 0.04mmol/L 苦味酸 1ml (9.1644mg)。 3．0.75mol/L 氢氧化钠溶液 氢氧化钠 30g，加去离子水使其溶解，冷却后用去离子水 定容至 1L。 4．肌酐标准贮存液(10mmol/L) 113mg 肌酐(Mw113.12)用 0.1mol/L 盐酸溶解，并移入 100ml 容量瓶内，再用 0.1mol/L 盐酸定容至刻度。 5．肌酐标准应用液(100μmol/L) 取 1ml 肌酐标准贮存液，用 0.1mol/L 盐酸稀释至 100ml。 【操作步骤】 1．取血清(或血浆)0.5ml，加入 35mmol/L 钨酸溶液 4.5ml，充分混匀，静置 5min，3 000r/min 离心 10min，取上清液；若为尿液标本用去离子水作 1∶200 稀释。 2．按表 13-4 操作。 表 13-4 去蛋白碱性苦味酸法操作步骤 加入物(ml) 测定管 标准管 空白管 血清无蛋白滤液(或 1∶200 稀释尿液) 3.0 － － 肌酐标准应用液 － 3.0 － 去离子水 － － 3.0 苦味酸溶液 1.0 1.0 1.0 氢氧化钠溶液 1.0 1.0 1.0 混匀后室温 15min，波长 510nm，空白管调零，读取各管吸光度。 【计算】 100 A A (mol / L) = 标准 血清肌酐 测定 【参考范围】 男性：44～133μmol/L；女性： 70～106μmol/L 【临床意义】 血液肌酐经肾小球过滤，肾小管既不重吸收，也不分泌，即肾脏对肌酐 的排泄能力强，因而肾脏疾病早期血浆肌酐通常不高，在反映肾小球滤过率下降方面，血肌 酐比血尿素的灵敏度低。但血肌酐受饮食、运动、激素、蛋白质代谢等因素的影响较少，所 以诊断特异性比血尿素好。 【注意事项】 1．据报道碱性肌酐苦味酸复合物的最大吸光度在 485nm，过量苦味酸离子存在于反应液
中，在波长低于500nm时会产生明显的吸收。2．反应温度以15～25℃为宜，10℃以下，会抑制Jaffe反应。温度升高，可使碱性苦味酸溶液显色增深，但测定管较标准管更为明显3.呈色后标准管色泽较稳定，但测定管吸光度随时间延长而增加，可能与血标本中存在的非特异性物质有关，故在加显色剂后30min内比色为宜，4.苦味酸一定要纯，否则需纯化。若含有杂质，则使试剂空白吸光度增加而影响测定结果。【评价】1.特异性血浆中的蛋白质和糖、丙酮、维生素C、丙酮酸、乙酰乙酸等均能与碱性苦味酸发生非特异性反应，反应速率稍慢。红细胞中这类物质最多，约有60%，血浆或血清约20%，尿液约5%。故血清和血浆需制备无蛋白滤液后测定。2.回收率受无蛋白滤液的pH影响，滤液pH在3~4.5时，回收率为85%～90%，pH在2以下时，回收率为100%。3.线性范围肌酐含量在1320umoL/L以内线性良好。实验83不去蛋白速率法测定血清肌酐【原理】根据肌酐与苦味酸反应生成桔红色苦味酸肌酐复合物的速度与假肌酐不同，而设置适宜的检测时间。一些假肌酐如乙酰乙酸在20s内已与碱性苦味酸反应，而在20~80s之间，肌酐反应占绝对优势，80s后其它多数干扰物才有较快的反应，故而选择25～60s的反应速率来反映真肌酐的含量。【试剂】1.0.04mol/L苦味酸溶液。2.0.32mol/L氢氧化钠溶液。3.碱性苦味酸溶液根据用量，将0.04mol/L苦味酸和0.32mol/L氢氧化钠等体积混合可加适量表面活性剂如 TritonX-100，放置20min以后即可应用。4.肌酐标准液同除蛋白碱性苦味酸法。【操作步骤】采用自动/半自动分析仪速率法检测，按试剂盒说明书操作，或参照以下参数分析：仪器波长510nm，比色杯光径1.0cm，反应温度37℃，样品/反应体积=1/11。延迟时间20~30s，测量时间30s。得到标准管AA/min和测定管AA/min。d
8 中，在波长低于 500nm 时会产生明显的吸收。 2．反应温度以 15～25℃为宜，10℃以下，会抑制 Jaffe 反应。温度升高，可使碱性苦味 酸溶液显色增深，但测定管较标准管更为明显。 3．呈色后标准管色泽较稳定，但测定管吸光度随时间延长而增加，可能与血标本中存在 的非特异性物质有关，故在加显色剂后 30min 内比色为宜。 4．苦味酸一定要纯，否则需纯化。若含有杂质，则使试剂空白吸光度增加而影响测定结 果。 【评价】 1．特异性 血浆中的蛋白质和糖、丙酮、维生素 C、丙酮酸、乙酰乙酸等均能与碱性苦 味酸发生非特异性反应，反应速率稍慢。红细胞中这类物质最多，约有 60%，血浆或血清约 20%，尿液约 5%。故血清和血浆需制备无蛋白滤液后测定。 2．回收率 受无蛋白滤液的 pH 影响，滤液 pH 在 3～4.5 时，回收率为 85%～90%，pH 在 2 以下时，回收率为 100%。 3．线性范围 肌酐含量在 1 320μmoL/L 以内线性良好。 实验 83 不去蛋白速率法测定血清肌酐 【原理】 根据肌酐与苦味酸反应生成桔红色苦味酸肌酐复合物的速度与假肌酐不同， 而设置适宜的检测时间。一些假肌酐如乙酰乙酸在 20s 内已与碱性苦味酸反应，而在 20～80s 之间，肌酐反应占绝对优势，80s 后其它多数干扰物才有较快的反应，故而选择 25～60s 的反 应速率来反映真肌酐的含量。 【试剂】 1．0.04mol/L 苦味酸溶液。 2．0.32mol/L 氢氧化钠溶液。 3．碱性苦味酸溶液 根据用量，将 0.04mol/L 苦味酸和 0.32mol/L 氢氧化钠等体积混合， 可加适量表面活性剂如 Triton X-100，放置 20min 以后即可应用。 4．肌酐标准液同除蛋白碱性苦味酸法。 【操作步骤】 采用自动/半自动分析仪速率法检测，按试剂盒说明书操作，或参照以下 参数分析：仪器波长 510nm，比色杯光径 1.0cm，反应温度 37℃，样品/反应体积＝1/11。延 迟时间 20～30s，测量时间 30s。得到标准管 ΔA/min 和测定管 ΔA/min
_测定 MA/mlx×100【计算】血清肌酐(μmo / L=标准A/m【参考范围】男性：53~97umol/L：女性：44~80umol/L【注意事项】1．必须严格控制反应时间，以尽量避免快速或慢速反应假肌酐物质的干扰。2．溶血产生的红细胞内非特异性物质将干扰反应。3．胆红素可引起负偏差。某些全自动生化分析仪，能设置空白速率参数，能去除胆红素负干扰。【评价】1．特异性本法基本上可消除生理浓度的葡萄糖、维生素 C和蛋白质等的干扰。但乙酰乙酸>500umol/L、维生素C>2840umol/L、丙酮酸>1140umol/L时有明显的干扰。高胆红素标本有明显的负干扰，溶血标本也有负干扰，标本应避免溶血。2.回收试验96.7%~100.4%，平均98.5%。3．线性范围肌酐在1768umol/L范围内，线性良好。实验84内生肌酐清除率测定【原理】通过测定血和尿中肌酐含量来计算每分钟或24h有多少毫升或升血浆中的肌酐通过肾脏被清除，此值称为内生肌酐清除率。肌酐清除率与个体的大小有关，可用体表面积来校正。【操作步骤】试验前3天，嘱受检者禁食肉类，避免饮用咖啡或茶，停用利尿剂，避免剧烈运动。适量饮水，使尿量不少于1ml/min。收集24h尿样的同时，抽静脉血3ml。同时测定血、尿肌酐含量。【计算】尿中肌酐(mol/)×24h 尿量(L)内生肌酐清除率(L/24h)=血中肌(μmol / L)内生因的,) -2 1.73校正后内生肌酐清除率(ml/min)=内生肌酐清除率×体表面积(m2)体表面积可根据人体体表面积计算图查阅，见图13-1。9
9 【计算】 100 min min ( / ) = A A mol L 标准 测定 血清肌酐 【参考范围】 男性：53～97μmol/L；女性：44～80μmol/L 【注意事项】 1．必须严格控制反应时间，以尽量避免快速或慢速反应假肌酐物质的干扰。 2．溶血产生的红细胞内非特异性物质将干扰反应。 3．胆红素可引起负偏差。某些全自动生化分析仪，能设置空白速率参数，能去除胆红素 负干扰。 【评价】 1．特异性 本法基本上可消除生理浓度的葡萄糖、维生素 C 和蛋白质等的干扰。但乙 酰乙酸＞500μmol/L、维生素 C＞2840μmol/L、丙酮酸＞1 140μmol/L 时有明显的干扰。高 胆红素标本有明显的负干扰，溶血标本也有负干扰，标本应避免溶血。 2．回收试验 96.7%～100.4%，平均 98.5%。 3．线性范围 肌酐在 1 768μmol/L 范围内，线性良好。 实验 84 内生肌酐清除率测定 【原理】 通过测定血和尿中肌酐含量来计算每分钟或 24h 有多少毫升或升血浆中的肌 酐通过肾脏被清除，此值称为内生肌酐清除率。肌酐清除率与个体的大小有关，可用体表面 积来校正。 【操作步骤】 试验前 3 天，嘱受检者禁食肉类，避免饮用咖啡或茶，停用利尿剂，避 免剧烈运动。适量饮水，使尿量不少于 1ml/min。收集 24h 尿样的同时，抽静脉血 3ml。同时 测定血、尿肌酐含量。 【计算】 内生肌酐清除率(L/24h) = ( / ) ( / ) mol L mol L 血中肌酐 尿中肌酐 ×24h 尿量(L) 内生肌酐清除率(ml/min) = L/24h× 1440 1000 校正后内生肌酐清除率(ml/min) = 内生肌酐清除率× ( ) 1.73 2 体表面积 m 体表面积可根据人体体表面积计算图查阅，见图 13-1
图13-1人体体表面积计算图图13-1人体体表面积计算图【参考范围】男：105±20ml/min女：95±20m/min【临床意义】血浆肌酐浓度(Sc)反映肾小球滤过功能，与肾小球滤过率(GRF)共同用于慢性肾功能不全的分期：第一期（肾功能不全代偿期)：Scr133~177umol/L；GRF50~80ml/min。第二期（肾功能不全失代偿期)：Scr178~442μmol/L：GRF50~20ml/min。第三期（肾功能衰竭期)：Scr443～707umol/L；GRF20~10ml/min第四期（尿毒症期)：Scr≥707umol/L；GRF<10ml/min。【注意事项】1．最常见误差来源是尿液收集时间记录不准，或部分尿液丢失，因此要准确收集尿液。要避免尿液在膀胱内潴留造成负误差，即要排空膀胱。2.收集尿液期间避免作剧烈运动。3．不同体表面积对结果影响很大，每个个体都应查图得出此值。第三节血清尿酸测定尿酸测定方法可分为尿酸酶紫外法、尿酸酶一过氧化物酶偶联法及磷钨酸法三类。其中以尿酸酶紫外法的分析性能最为优越，是尿酸测定的参考方法。磷钨酸法先用血清或血浆制备无蛋白滤液再进行测定，方法繁琐，需手工测定，现在临床已较少应用。自动化分析可用尿酸酶一过氧化物酶偶联法，无需做无蛋白滤液实验85磷钨酸还原法测定血清尿酸【原理】去蛋白滤液中的尿酸在碱性溶液中被磷钨酸氧化生成尿囊素和二氧化碳，磷钨酸被还原为蓝色的钨蓝。钨蓝的生成量与尿酸浓度成正比。【试剂】10
10 图 13-1 人体体表面积计算图 图 13-1 人体体表面积计算图 【参考范围】 男：105±20ml/min 女：95±20 ml/min 【临床意义】 血浆肌酐浓度(SCr)反映肾小球滤过功能，与肾小球滤过率(GRF)共同用于慢性肾功能不全 的分期： 第一期 (肾功能不全代偿期)：SCr 133～177μmol/L；GRF 50～80ml/min。 第二期 (肾功能不全失代偿期)：SCr 178～442μmol/L；GRF 50～20ml/min。 第三期 (肾功能衰竭期)：SCr 443～707μmol/L；GRF 20～10ml/min。 第四期 (尿毒症期)：SCr≥707μmol/L；GRF＜10ml/min。 【注意事项】 1．最常见误差来源是尿液收集时间记录不准，或部分尿液丢失，因此要准确收集尿液。 要避免尿液在膀胱内潴留造成负误差，即要排空膀胱。 2．收集尿液期间避免作剧烈运动。 3．不同体表面积对结果影响很大，每个个体都应查图得出此值。 第三节 血清尿酸测定 尿酸测定方法可分为尿酸酶紫外法、尿酸酶－过氧化物酶偶联法及磷钨酸法三类。其 中以尿酸酶紫外法的分析性能最为优越，是尿酸测定的参考方法。磷钨酸法先用血清或血 浆制备无蛋白滤液再进行测定，方法繁琐，需手工测定，现在临床已较少应用。自动化分 析可用尿酸酶－过氧化物酶偶联法，无需做无蛋白滤液。 实验 85 磷钨酸还原法测定血清尿酸 【原理】 去蛋白滤液中的尿酸在碱性溶液中被磷钨酸氧化生成尿囊素和二氧化碳，磷 钨酸被还原为蓝色的钨蓝。钨蓝的生成量与尿酸浓度成正比。 【试剂】