【参考范围】 治疗血药浓度范围 0.8~2.0 μg/L。【临床意义】地高辛是一种作用于心脏的强心试类药物，主要用于充血性心力衰竭和某些心律失常的治疗。由于地高辛治疗指数低，安全范围窄，如果其有效治疗剂量接近中毒剂量，通常地高辛治疗血药浓度范围介于0.8~2.0μg/L，地高辛稳态血浓度<0.8μg/L，般认为治疗无效，且无毒性反应。2.0~3.0ug/L为治疗及中毒血浓度交又范围。>3.0ug/l可视为中毒浓度。此外，由于地高辛药代动力学和药效学个体差异大等原因，常易发生剂量不足或中毒现象，因此在应用地高辛治疗过程中监测血药浓度，对控制用药剂量和防止中毒具有极其重要的意义【注意事项】使用全自动化学发光免疫分析仪应注意仪器的每日保养和每周保养工作程序。【评价】目前测定地高辛的方法有放射免疫法(RIA)、化学发光酶免疫分析法(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)、荧光偏振免疫分析法(FPIA)、酶放大免疫测定技术(EMIT)和酶联免疫吸附试验法(ELISA)。RIA 法优点是其成本低廉和灵敏度高，缺点是其放射性污染和放射性标记物半寿期短及批间RSD普遍偏大，且其检测时间过长很难适应临床检验的即时之需。EMIT法仅能检测小分子抗原或半抗原。ELISA法灵敏度高，但其所有底物中大部分有毒或为致癌物，此外酶的稳定性极易受温度和pH值的影响。FPIA法操作简便、快速省时、灵敏度高，结果准确，稳定性好，比较适应临床检验，但灵敏度不及RIA，且易受本底荧光的干扰。CLEIA法采用全自动恒温顺磁性铁微粒子混匀及单克隆抗体分离系统，底物发光剂发光时间可稳定在20min，测定灵敏度高，相当于pg水平，且无污染，样品用量少，所需时间短(整个测定时间为20min)，能适合临床检验即时之需。采用全自动化学发光免疫试剂盒，其地高辛的校正曲线回归方程为Y=0.989X+0.015F-0.9885。检测限为0.026ug/L，回收率91.67%~97.56%，批内CV为2.58%，批间CV为5.13%实验 113HPLC法测定血清苯妥英【原理】当化学结构不同的物质通过色谱分析柱时，因其理化性质的差异，它们在柱上保留时间不同，极性强的物质在反相C18柱上的保留时间短，出峰快；极性弱的物质则相反。因此，经色谱柱可把苯妥英(phenytoin)与其他杂质分离。血清样品加甲醇沉淀蛋白，上清液进样测定，据苯妥英峰高，从校正曲线方程求出苯妥英的浓度。6
6 【参考范围】 治疗血药浓度范围 0.8～2.0μg/L。 【临床意义】 地高辛是一种作用于心脏的强心甙类药物，主要用于充血性心力衰竭和 某些心律失常的治疗。由于地高辛治疗指数低，安全范围窄，如果其有效治疗剂量接近中毒 剂量，通常地高辛治疗血药浓度范围介于 0.8～2.0μg/L，地高辛稳态血浓度＜0.8μg/L，一 般认为治疗无效，且无毒性反应。2.0～3.0μg/L 为治疗及中毒血浓度交叉范围。＞3.0μg/L 可视为中毒浓度。此外，由于地高辛药代动力学和药效学个体差异大等原因，常易发生剂量 不足或中毒现象，因此在应用地高辛治疗过程中监测血药浓度，对控制用药剂量和防止中毒 具有极其重要的意义。 【注意事项】 使用全自动化学发光免疫分析仪应注意仪器的每日保养和每周保养工作 程序。 【评价】 目前测定地 高辛的方法有放 射免疫法(RIA)、化学发光酶免疫分析法 (chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA)、荧光偏振免疫分析法(FPIA)、酶放大免疫测 定技术(EMIT)和酶联免疫吸附试验法(ELISA)。RIA 法优点是其成本低廉和灵敏度高，缺点是 其放射性污染和放射性标记物半寿期短及批间 RSD 普遍偏大，且其检测时间过长很难适应临 床检验的即时之需。EMIT 法仅能检测小分子抗原或半抗原。ELISA 法灵敏度高，但其所有 底物中大部分有毒或为致癌物，此外酶的稳定性极易受温度和 pH 值的影响。FPIA 法操作简 便、快速省时、灵敏度高，结果准确，稳定性好，比较适应临床检验，但灵敏度不及 RIA， 且易受本底荧光的干扰。 CLEIA 法采用全自动恒温顺磁性铁微粒子混匀及单克隆抗体分离系统，底物发光剂发光 时间可稳定在 20min，测定灵敏度高，相当于 pg 水平，且无污染，样品用量少，所需时间短 (整个测定时间为 20min)，能适合临床检验即时之需。 采用全自动化学发光免疫试剂盒，其地高辛的校正曲线回归方程为 Y=0.989X+0.015, r=0.9885。检测限为 0.026μg/L, 回收率 91.67%～97.56%, 批内 CV 为 2.58%, 批间 CV 为 5.13%。 实验 113 HPLC 法测定血清苯妥英 【原理】 当化学结构不同的物质通过色谱分析柱时，因其理化性质的差异，它们在柱 上保留时间不同，极性强的物质在反相 C18 柱上的保留时间短，出峰快；极性弱的物质则相 反。因此，经色谱柱可把苯妥英(phenytoin)与其他杂质分离。血清样品加甲醇沉淀蛋白，上 清液进样测定，据苯妥英峰高，从校正曲线方程求出苯妥英的浓度
【试剂】．甲醇(色谱纯)。2.200mg/L苯妥英标准液称取苯妥英20mg溶于甲醇中，加甲醇定容至100ml，4℃保存备用。3.内标示200mg/L苯乙酮甲醇液，称取苯乙酮10mg溶于甲醇中，加甲醇定容至50ml4℃保存备用。【操作步骤】1.血样的采集患者血药浓度达到稳态后，于下次给药前或早晨服药前采血，待血清析出，分离血清。2.校正曲线制作及样品测定按表15-3操作表 15-3 校正曲线制作及样品测定操作步骤加入物空白管测定管2A0.10.10.1对照血清(ml)0.10.11.05.010.015.025.0苯妥英标准(uI)-一25.020.025.0甲醇(μI)24.015.010.00.1 待测血清(ml)一50.00.02.010.020.030.0血清苯妥英浓度(mg/L)以上各管中加入0.04ml内标液和0.3ml甲醇，旋涡混合器上振荡30s，4000r/min离心15min，分离出上清液，取20u1进样测定，以苯妥英钠面积与内标峰面积的比值为纵坐标，苯妥英浓度(mg/L)为横坐标，绘制校正曲线，并进行线性回归求出校正曲线方程。3.色谱条件(1)SymmetryC18反相柱：150mmX3.9mm,5μm。(2）流动相：甲醇/蒸馏水(1：1，V/V)。(3）流速：1.0ml/min。(4）检测波长：210nm。(5）灵敏度：0.01AUFS【计算】据待测样品峰高值从校正曲线上查出相应浓度或由校正曲线方程求得。【参考范围】苯妥英的有效血药浓度范围及有关参数见表15-4
7 【试剂】 1．甲醇(色谱纯)。 2．200mg/L 苯妥英标准液 称取苯妥英 20mg 溶于甲醇中，加甲醇定容至 100ml，4℃保 存备用。 3．内标 200mg/L 苯乙酮甲醇液，称取苯乙酮 10mg 溶于甲醇中，加甲醇定容至 50ml， 4℃保存备用。 【操作步骤】 1．血样的采集 患者血药浓度达到稳态后，于下次给药前或早晨服药前采血，待血清析 出，分离血清。 2．校正曲线制作及样品测定 按表 15-3 操作。 表 15-3 校正曲线制作及样品测定操作步骤 加入物 空白管 1 2 3 4 5 测定管 对照血清(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 — 苯妥英标准(μl) — 1.0 5.0 10.0 15.0 25.0 — 甲醇(μl) 25.0 24.0 20.0 15.0 10.0 — 25.0 待测血清(ml) — — — — — — 0.1 血清苯妥英浓度(mg/L) 0.0 2.0 10.0 20.0 30.0 50.0 以上各管中加入 0.04ml 内标液和 0.3ml 甲醇，旋涡混合器上振荡 30s，4 000r/min 离心 15min，分离出上清液，取 20μl 进样测定，以苯妥英钠面积与内标峰面积的比值为纵坐标， 苯妥英浓度(mg/L)为横坐标，绘制校正曲线，并进行线性回归求出校正曲线方程。 3．色谱条件 (1) Symmetry C18 反相柱：150mm×3.9mm, 5μm。 (2) 流动相：甲醇/蒸馏水(1：1，V/V)。 (3) 流速：1.0ml/min。 (4) 检测波长：210nm。 (5) 灵敏度：0.01AUFS 【计算】 据待测样品峰高值从校正曲线上查出相应浓度或由校正曲线方程求得。 【参考范围】 苯妥英的有效血药浓度范围及有关参数 见表 15-4