实验一高压蒸汽灭菌锅的使用和玻璃器皿的洗涤、包扎及灭菌一、实验要求：1、熟悉微生物实验所需的各种常用器血名称和规格。2、掌握对各种器血清洗方法。3、掌握玻璃器血的干热灭菌操作过程。4、了解手提式高压蒸汽灭菌锅的结构、使用方法和操作要点；二、材料：1、常用各种玻璃器皿。2、清洗工具和去污粉、肥皂、洗涤液。3、电热干燥箱。三、概述：为了保证实验顺利进行，要求把实验用器血清洗干净。保持灭菌后无菌状态，需要对培养血、吸管等进行妥善包扎。试管和三角瓶要做棉塞。这些工作看来很普通，如操作不当或不按规定要求去做，会导致实验的失败。因此应看作是微生物实验的基本操作。四、方法：（一）器血洗涤的注意事项和方法1、任何洗涤方法，都不应对玻璃器血有所损伤，所以不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器血。2、一般新的玻璃器血用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充洗干净。1
1 实验一 高压蒸汽灭菌锅的使用和 玻璃器皿的洗涤、包扎及灭菌 一、实验要求： 1、熟悉微生物实验所需的各种常用器皿名称和规格。 2、掌握对各种器皿清洗方法。 3、掌握玻璃器皿的干热灭菌操作过程 。 4、了解手提式高压蒸汽灭菌锅的结构、使用方法和操作要点； 二、材料： 1、常用各种玻璃器皿。 2、清洗工具和去污粉、肥皂、洗涤液。 3、电热干燥箱。 三、概述： 为了保证实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净。保持灭 菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎。试管和三角 瓶要做棉塞。这些工作看来很普通，如操作不当或不按规定要求去 做，会导致实验的失败。因此应看作是微生物实验的基本操作。 四、方法： （一）器皿洗涤的注意事项和方法： 1、任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，所以不能用有腐 蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器 皿。 2、一般新的玻璃器皿用 2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充洗干净
3、用过的器血应立即洗涤，有时放置太久会增加洗涤困难。4、难洗涤的器血不要与易洗涤的器血放在一起。有油的器血不要与无油的器血放在一起，否则使本来无油的器血也沾上了油垢，浪费药剂和时间。5、强酸、强碱、琼脂等腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在废缸内。6、含有琼脂培养基的器血，可先用小刀或铁丝将器血中的琼脂培养基刮去，或把它们用水蒸煮，待琼脂融化后趁热倒出，然后用水洗涤。7、一般的器血都可用去污粉、肥皂或配成5%热肥皂水来清洗油质很重的器血，应先将油层擦去。8、如果器血沾有煤膏、焦油及树脂类的一些物质，可用浓硫酸或40%的氢氧化钠液洗，或用洗涤液浸泡。9、当器血上沾有蜡或油漆等物质，用加热方法使之融化措去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、丙酮、松节油等）拭措。10、洗涤后的器血达到玻璃能被水均匀湿润而无条纹和水珠。11、载玻片或盖玻片可先在2%盐酸溶液中浸1小时，然后在水中冲洗2~3次，最后用蒸馏水洗2~3次，洗后烘干冷却或浸于95%酒精中保存备用。用过的载玻片或盖玻片，先擦去油垢，再放在5%肥皂水中煮10分钟后，立即用清水冲洗，以后放在洗涤液（稀释）中浸泡2小时，再用清水洗至无色为止，最后用蒸馏水洗数次，干后浸于95%酒精中保存备用。12、凡遇有传染性材料的器血，洗涤前应经高压灭菌后清洗。（二）器血包扎为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器血均需包扎。1、养血洗净烘干后每10套迭在一起，用牢固的纸卷成一筒，外面用绳子捆扎，以免散开，然后进行灭菌。到使用时在无菌室中才打开取出培养血。2
2 3、用过的器皿应立即洗涤，有时放置太久会增加洗涤困难。 4、难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起。有油的器皿不要 与无油的器皿放在一起，否则使本来无油的器皿也沾上了油垢，浪 费药剂和时间。 5、强酸、强碱、琼脂等腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤 槽内，必须倒在废缸内。 6、含有琼脂培养基的器皿，可先用小刀或铁丝将器皿中的琼脂培 养基刮去，或把它们用水蒸煮，待琼脂融化后趁热倒出，然后用水 洗涤。 7、一般的器皿都可用去污粉、肥皂或配成 5%热肥皂水来清洗油质 很重的器皿，应先将油层擦去。 8、如果器皿沾有煤膏、焦油及树脂类的一些物质，可用浓硫酸或 40%的氢氧化钠液洗，或用洗涤液浸泡。 9、当器皿上沾有蜡或油漆等物质，用加热方法使之融化揩去，或 用有机溶剂（苯、二甲苯、丙酮、松节油等）拭揩。 10、洗涤后的器皿达到玻璃能被水均匀湿润而无条纹和水珠。 11、载玻片或盖玻片可先在 2%盐酸溶液中浸 1 小时，然后在水中 冲洗 2~3 次，最后用蒸馏水洗 2~3 次，洗后烘干冷却或浸于 95%酒 精中保存备用。用过的载玻片或盖玻片，先擦去油垢，再放在 5% 肥皂水中煮 10 分钟后，立即用清水冲洗，以后放在洗涤液（稀释） 中浸泡 2 小时，再用清水洗至无色为止，最后用蒸馏水洗数次，干 后浸于 95%酒精中保存备用。 12、凡遇有传染性材料的器皿，洗涤前应经高压灭菌后清洗。 （二）器皿包扎 为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需包扎。 1、养皿 洗净烘干后每 10 套迭在一起，用牢固的纸卷成一筒，外 面用绳子捆扎，以免散开，然后进行灭菌。到使用时在无菌室中才 打开取出培养皿
2、吸管洗净烘干后的吸管，在口吸的一端用尖头摄子或针塞入少许脱脂棉花，以防止菌体误吸口中，及口中的微生物吸入管而进入培养物中造成污染。塞入棉花的量要适宜，棉花不宜露在吸管口的外面，多余的棉花可用酒精灯的火焰把它烧掉。每支吸管用一条宽约4~5厘米，以45°左右的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，吸管的另一端用剩余纸条迭打结，不使散开，标上容量。若于支吸管扎成一束，灭菌后，同样要在使用时才从吸管中间拧断纸条抽去吸管（图见下页）。3、试管和三角瓶试管和三角瓶都要作合适的棉花塞。棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。棉花塞的制作要求使棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过松，过紧易挤破管口和不易塞入，过松易掉落和污染。棉花塞的长度不少于管口直径的二倍，约2/3塞进管口（见下页图）。若干支管用绳子扎在一起，在棉花塞部分外包，油纸或牛皮纸再在纸外用绳扎紧。三角瓶每个单独用油纸包扎棉花塞
3 2、吸管 洗净烘干后的吸管，在口吸的一端用尖头摄子或针塞入少 许脱脂棉花，以防止菌体误吸口中，及口中的微生物吸入管而进入 培养物中造成污染。塞入棉花的量要适宜，棉花不宜露在吸管口的 外面，多余的棉花可用酒精灯的火焰把它烧掉。每支吸管用一条宽 约 4~5 厘米，以 45°左右的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头 部，吸管的另一端用剩余纸条迭打结，不使散开，标上容量。若干 支吸管扎成一束，灭菌后，同样要在使用时才从吸管中间拧断纸条 抽去吸管（图见下页）。 3、试管和三角瓶 试管和三角瓶都要作合适的棉花塞。棉花塞的作 用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。棉花塞 的制作要求使棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过松，过 紧易挤破管口和不易塞入，过松易掉落和污染。棉花塞的长度不少 于管口直径的二倍，约 2/3 塞进管口（见下页图）。 若干支管用绳子扎在一起，在棉花塞部分外包，油纸或牛皮纸再在 纸外用绳扎紧。三角瓶每个单独用油纸包扎棉花塞
:45合格的棉塞不合格的棉塞(三）灭菌使玻璃器血达到无菌状态叫灭菌，玻璃器皿主要用电热干燥箱进行灭菌。1、燥箱灭菌的物品放在箱内，堆置时要留空隙勿使接触四壁，关闭箱门。2、接通电源，把箱顶的通气口适当打开，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达到100℃时关闭。3、调节温度控制器旋扭，直至箱内温度达到所需温度为止，观察温度是否衡定，若温度不够再行调节，调节完毕后不可再拨动调节旋扭和通气口，保持140160℃2~3小时。4、切断电源，冷却到60℃时，才能把箱门打开，取出灭菌物品。5、将温度调节控制旋扭返回原处，并将箱顶通气口打开所有空箱，干净的玻璃器血及其它耐热器皿等一般都可用此法灭菌。如培养基和其它不耐热的橡皮塞等不可用此法灭菌。五、用手提式高压蒸汽灭菌锅进行湿热灭菌。高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌器装置严密，输入蒸汽不外逸，温度随蒸汽压力增高而升高，当压力增至103一206kPa时，湿度可达121.3-132℃。高压蒸汽灭菌法就是利用高压和高热释放的潜热进行灭菌，为目前可靠而有效的灭菌方法。适用于耐高温、高压不怕潮湿的物品，如敷料、手术器械、药品、细菌培养基等。4
4 合格的棉塞 不合格的棉塞 （三）灭菌 使玻璃器皿达到无菌状态叫灭菌，玻璃器皿主要用电热干燥箱进行 灭菌。 1、燥箱灭菌的物品放在箱内，堆置时要留空隙勿使接触四壁，关 闭箱门。 2、接通电源，把箱顶的通气口适当打开，使箱内湿空气能逸出， 至箱内温度达到 100℃时关闭。 3、调节温度控制器旋扭，直至箱内温度达到所需温度为止，观察 温度是否衡定，若温度不够再行调节，调节完毕后不可再拨动调节 旋扭和通气口，保持 140~160℃ 2~3 小时。 4、切断电源，冷却到 60℃时，才能把箱门打开，取出灭菌物品。 5、将温度调节控制旋扭返回原处，并将箱顶通气口打开所有空箱， 干净的玻璃器皿及其它耐热器皿等一般都可用此法灭菌。如培养基 和其它不耐热的橡皮塞等不可用此法灭菌。 五、用手提式高压蒸汽灭菌锅进行湿热灭菌。 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌器装置严密，输入蒸汽不外逸， 温度随蒸汽压力增高而升高，当压力增至 103－206kPa 时，湿度可 达 121.3-132℃。高压蒸汽灭菌法就是利用高压和高热释放的潜热 进行灭菌，为目前可靠而有效的灭菌方法。适用于耐高温、高压， 不怕潮湿的物品，如敷料、手术器械、药品、细菌培养基等
潜热是指当1g100℃的水蒸汽变成1g100℃水时，释放出2255.2J的热量。高压蒸汽灭菌的关键问题是为热的传导提供良好条件，而其中最重要的是使冷空气从灭菌器中顺利排出。因为冷空气导热性差，阻碍蒸汽接触欲灭菌物品，并且还可减低蒸汽分压使之不能达到应有的温度。木柄放气阀放气软管安全陶紧固螺旋荒2主体压力表拎环消疼桶一底架图5一1手提式高压蒸汽灭菌器手提式高压蒸汽灭菌器（图5一1）：为金属圆筒，分为二层，隔层内盛水，有盖，可以旋紧，加热后产生蒸汽。锅外有压力表当蒸汽压力升高时，温度也随之相应升高。该灭菌器体积小，可自发蒸汽，便于携带。操作方法如下：在灭菌器中盛水3000ml；将拟灭菌的物品随同盛装的桶放入灭菌器内；将盖子上的排气软管插于铝桶内壁的的方管中：盖好盖子，拧紧元宝螺丝，勿使漏气：锅下加热，打开排气活门，放出冷空气（一般在水沸后排气10一15分钟左右），关闭放气活门，使压力逐渐上升至103kPa，温度达121.3℃，维持20分钟后，排气至“0”时，慢慢打开盖子。如果突然开盖，冷空气大量进入，蒸汽凝成水滴，使物品潮湿，且玻璃类易发生爆裂。5
5 潜热是指当 lg100℃的水蒸汽变成 lg100℃水时，释放出 2255.2J 的热量。 高压蒸汽灭菌的关键问题是为热的传导提供良好条件，而其中 最重要的是使冷空气从灭菌器中顺利排出。因为冷空气导热性差， 阻碍蒸汽接触欲灭菌物品，并且还可减低蒸汽分压使之不能达到应 有的温度。 图 5－1 手提式高压蒸汽灭菌器 手提式高压蒸汽灭菌器（图 5－1）：为金属圆筒，分为二层， 隔层内盛水，有盖，可以旋紧，加热后产生蒸汽。锅外有压力表， 当蒸汽压力升高时，温度也随之相应升高。该灭菌器体积小，可自 发蒸汽，便于携带。 操作方法如下：在灭菌器中盛水 3000ml；将拟灭菌的物品随 同盛装的桶放入灭菌器内；将盖子上的排气软管插于铝桶内壁的的 方管中；盖好盖子，拧紧元宝螺丝，勿使漏气；锅下加热，打开排 气活门，放出冷空气（一般在水沸后排气 10－15 分钟左右），关 闭放气活门，使压力逐渐上升至 103kPa，温度达 121.3℃,维持 20 分钟后，排气至“0”时，慢慢打开盖子。如果突然开盖，冷空气 大量进入，蒸汽凝成水滴，使物品潮湿，且玻璃类易发生爆裂