碱性磷酸酶实验模块粗纯化分离和提取制备精纯化离子交换柱层析比活力碱性磷酸酶米氏常数性质研究纯度SDS-PAGE分子量
碱性磷酸酶 制备 粗纯化 分离和提取 精纯化 离子交换柱层析 性质研究 比活力 米氏常数 纯度 分子量 SDS-PAGE 碱性磷酸酶实验模块
实验目的和原理
实验目的和原理
实验目的1．理解电泳技术的基本原理2.3理解SDS-PAGE检测蛋白质分子量的原理3．掌握SDS-PAGE的实验技术及结果分析4.以碱性磷酸酶为例，进一步提高分析鉴定蛋白质的思维能力建立SDS-PAGE应用的基本概念
实验目的 1. 理解电泳技术的基本原理 2. 理解SDS-PAGE检测蛋白质分子量的原理 3. 掌握SDS-PAGE的实验技术及结果分析 4. 以碱性磷酸酶为例，进一步提高分析鉴定蛋白质的思维能力， 建立SDS-PAGE应用的基本概念
电泳技术的基本原理·电泳：带电粒子在电场中的定向移动。电泳技术就是根据各种带电粒子在电场中迁移速度（泳动率）的不同而对物质进行分离的一类实验技术影响迁移速度的因素A内因：1.净电荷（电荷多，泳动速度快）2.质点大小（质点大，泳动速度慢）Samp3.质点形状（球形分子比纤维状分子快）Piasti外因：1.电场强度（电场强度高，泳动速度快）2.缓冲液的pH (pH恒定)（影响净电荷）3.离子强度[1]最适：0.02-0.24.电渗：液体对固体支持物的相对移动
电泳技术的基本原理 l电泳：带电粒子在电场中的定向移动。电泳技术就是根据各种带电粒子在 电场中迁移速度（泳动率）的不同而对物质进行分离的一类实验技术。 l影响迁移速度的因素 内因：1.净电荷 （电荷多，泳动速度快） 2.质点大小 （质点大，泳动速度慢） 3.质点形状 （球形分子比纤维状分子快） 外因：1.电场强度 （电场强度高，泳动速度快） 2.缓冲液的pH (pH恒定) （影响净电荷） 3.离子强度[I] 最适:0.02-0.2 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动 A B
SDS-PAGE电泳原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N一亚甲基双丙烯酰胺（Bis）在催化剂（过硫酸铵）和加速剂（四甲基乙二胺TEMED）作用下聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同将蛋白质分离成若干条带。SDS（十二烷基硫酸钠）与蛋白质结合，掩盖各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS复合物在电泳时的迁移速率，不再受原有电荷和分子形状的影响而只与分子大小相关。推力：电荷（E）吸引；阻力：凝胶（PAG）阻碍物质运动
SDS－PAGE电泳原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺 （Bis）在催化剂（过硫酸铵）和加速剂（四甲基乙二胺TEMED）作用下， 聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分 子大小的不同将蛋白质分离成若干条带。 SDS（十二烷基硫酸钠）与蛋白质结合, 掩盖各种蛋白分子间天然的电荷差 异。因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移速率，不再受原有电荷 和分子形状的影响，而只与分子大小相关。 推力：电荷（E）吸引；阻力：凝胶（PAG）阻碍物质运动