SITAS碱性磷酸酶的分离提取王勤
碱性磷酸酶的分离提取 王勤
S/TAS实验目的1.学习蛋白质分离纯化的一般原理和步骤2.掌握牡蛎碱性磷酸酶制备的操作技术3.对硝基苯酚标准曲线的制作
1.学习蛋白质分离纯化的一般原理和步骤 2.掌握牡蛎碱性磷酸酶制备的操作技术 3.对硝基苯酚标准曲线的制作 实验目的
SITAS实验原理
实验原理
蛋白质的分离纯化separationandpurificationITAS材料》鲜度、含量、保存方法组织捣碎法、研磨法、匀浆法、超声破碎法、破碎冻融法等提取缓冲液（pH、温度等）、搅拌、增溶剂、抽提抽提液与抽提物的比例等分离盐析、有机溶剂（乙醇、丙酮等）、等电点沉淀等纯化》离子交换柱层析、凝胶过滤柱层析、亲和层析等酶活力、纯度、分子量分析及鉴定
材料 破碎 抽提 分离 纯化 组织捣碎法、研磨法、匀浆法、超声破碎法、 冻融法等 提取缓冲液（pH、温度等）、搅拌、增溶剂、抽提 液与抽提物的比例等 盐析、有机溶剂（乙醇、丙酮等）、等电点沉淀等 离子交换柱层析、凝胶过滤柱层析、亲和层析等 鲜度、含量、保存方法 蛋白质的分离纯化 separation and purification 分析及鉴定 酶活力、纯度、分子量
盐析Salting-out高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子ITAS从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析OH-HtH+OH-PH>pI.带负电荷在等电点状态的pH<pI，带正电荷，又有水膜，是稳定的又有水膜·是秘定的酶蛋白，水膜未脱，亲水胶体亲水胶体楚不稳定的亲水胶体中性盐中性盐中性垫破坏水膜破坏水膜破坏水膜中性盐中和其电荷中性盐中和其电荷NHt或Na+等SOi-等蛋白质沉淀
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子， 从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶 液中沉淀出来。 各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶 液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。 盐析Salting-out