三、构建基因文库的步骤 在原核生物中，结构基因通常会在基因组DNA上形成一个连续的编码 区域，但在真核细胞中，外显子往往会被内含子分开。因此，对于原核 基因和真核基因的分离，要采取不同的克隆步骤。 要克隆原核生物中的基因，首先要用限制性内切酶对总DNA酶解，然 后把这些酶解的DNA片段克隆进载体，再对带有外源DNA片段的重组克隆 进行鉴定、分离、再培养和进一步鉴定。整个过程称为基因文库的构建 。构建基因文库大多采用一种识别4个碱基序列的限制性内切酶进行酶 解，理论上应该是每256(44)个碱基就可切一次，调整酶解反应的条件 可以使它部分酶解基因组DNA,产生出所有的可能大小的片段。由于限 制性内切酶的位点在基因组上并不是随机排列的，有些片段可能会太大 而无法克隆，这时文库就不完整，要找到某一个特异的目的DNA片段也 许就要难一些
在原核生物中，结构基因通常会在基因组DNA上形成一个连续的编码 区域，但在真核细胞中，外显子往往会被内含子分开。因此，对于原核 基因和真核基因的分离，要采取不同的克隆步骤。 要克隆原核生物中的基因，首先要用限制性内切酶对总DNA酶解，然 后把这些酶解的DNA片段克隆进载体，再对带有外源DNA片段的重组克隆 进行鉴定、分离、再培养和进一步鉴定。整个过程称为基因文库的构建 。 三、构建基因文库的步骤 构建基因文库大多采用一种识别4个碱基序列的限制性内切酶进行酶 解，理论上应该是每256（4 4）个碱基就可切一次，调整酶解反应的条件 可以使它部分酶解基因组DNA，产生出所有的可能大小的片段。由于限 制性内切酶的位点在基因组上并不是随机排列的，有些片段可能会太大 而无法克隆，这时文库就不完整，要找到某一个特异的目的DNA片段也 许就要难一些
织 载体（选择一种) DNA 部分或完全 消化的DNA 大小分级 可供克隆的 DNA片段 ◆连接DNA片段和载体 构建基因组DNA文库的流程示意图
构建基因组DNA文库的流程示意图 组 织 可供克隆的 DNA片段 DNA 部分或完全 消化的DNA 大小分级 载体（选择一种） 连接DNA片段和载体