未端配对测序3-kbsubclonelibrarySequencebothendsof3-kbinserts(b)Assemblesequencingreads(c)Assembledpaired-endreadsScale3kbAssesswhetherpaired-endreadsare-3kbapartintheassembly26FIGURE10-4
26 末端配对测序
双脱氧法测序方法：ideoxynucleotides（双脱氧核苷酸）H00ddNTPs是反应终止剂OHYCHzBaeeNormal可以当作正常碱基参与nuceotides:复制，一旦链入DNA0YHH中，其后就不能再继0CHz10续连接。Base:Dideoxy ChainTermimators:反应体系中dNTPs的浓业HH度远高于ddNTPs(一般*1: 3~4)27
27 ideoxynucleotides （双脱氧核苷酸） ddNTPs 是反应终止剂 可以当作正常碱基参与 复制，一旦链入DNA 中，其后就不能再继 续连接。 反应体系中dNTPs的浓 度远高于ddNTPs(一般 1：3~4) 测序方法：双脱氧法
基因组学家们巧妙地将在制造业中使用的P30/P386机器人扩大化利用以增加测序的通量，提高可靠性和精确性(a)(b)FIGURE10-8
28 基因组学家们巧妙地 将在制造业中使用的 机器人扩大化利用以 增加测序的通量，提 高可靠性和精确性
亚克隆测序的创新两大革新：放射性标记平板凝胶电泳荧光标记毛细管电泳1.4个链终止反应可以在同一1.无需费时的灌胶点样工序个体系中进行也可以在同一个2.同一个毛细管可以被多次使用泳道中进行电泳2.实时地自动检测3.整个测序反应都是机器人操作进行大大提高了测序的效率29
29 亚克隆测序的创新 放射性标记 平板凝胶电泳 两大革新： 荧光标记 毛细管电泳 大大提高了测序的效率 1.4个链终止反应可以在同一 个体系中进行也可以在同一个 泳道中进行电泳 2.实时地自动检测 1.无需费时的灌胶点样工序 2.同一个毛细管可以被多次 使用 3.整个测序反应都是机器人 操作进行 革 新 点
(a)(b)3dATPdGTPOGGCTCCTordGTPddATPOdCTPordTTPddTTP6andorTemplatedOCTPOACAGTCPrimerDNApolymerasePerform four separatesequencingreactionsRPool reactions and electrophorese on DNAAsequencing machine slabgel orcapillaryGGEmitted light isAOcollectedbycoptical detectorAAO-AGAACIOScanning laserGexcites fluorescentAACG0-GdyesasDNAData are sent一AfragmentspassAACGTSequencing laddertoacomputerbyduringGGGGAGCCTinonelaneoroneelectrophoresisAACGTAOCapillaryon DNAsequencing machineAACGTATAACGTATGCAACGTATGCOAACGTATGCT5'GSequencefrombottomtotopGATCTCGTATGCAAFIGURE10-9FGURE10-11早期的DNA测序分成4个独立的不同颜色荧光标记的反应进行延长后的DNA片段被放射性同位素标记（主要是32ddNTPs半自动化的测序机P和35S）日曝于X射线下进行DNA器进行DNA的测序30的检测
30 早期的DNA测序分成4个独立的 反应进行延长后的DNA片段被 放射性同位素标记（主要是32 P和35S）曝于X射线下进行DNA 的检测 不同颜色荧光标记的 ddNTPs半自动化的测序机 器进行DNA的测序