4、用S1核酸酶或RNA酶消化DNA/RNA或者RNA/RNA杂交体是分 析基因转录或RNA加工的重要方法; 5、对某一已知基因或已克隆测序的基因可利用核酸杂交技术进行 染色体定位; 6、可用于遗传病的基因诊断,用于限制性片段长度多态性作疾病 的相关分析,基因连锁分析,法医学上的性别分析和亲子鉴定。 7、在人类学研究中,LA分型等方面也有应用价值
4、用S1核酸酶或RNA酶消化DNA/RNA或者RNA/RNA杂交体是分 析基因转录或RNA加工的重要方法; 5、对某一已知基因或已克隆测序的基因可利用核酸杂交技术进行 染色体定位; 6、可用于遗传病的基因诊断,用于限制性片段长度多态性作疾病 的相关分析,基因连锁分析,法医学上的性别分析和亲子鉴定。 7、在人类学研究中,HLA分型等方面也有应用价值
三、核酸分子杂交的原理 核酸分子杂交的基本原理是:具有互补序列的两条单链核酸分子在 一定条件下(适宜的温度及离子强度等)碱基互补配对结合,重新 形成双链;在这一过程中,核酸分子经历了变性和复性的变化,以 及复性过程中分子间键的形成和断裂等。杂交的双方是待测核酸序 列和已知核酸序列。在杂交体系中已知的核酸序列称作探针( probe),探针通常用于进行核素或非核素示踪标记
核酸分子杂交的基本原理是:具有互补序列的两条单链核酸分子在 一定条件下(适宜的温度及离子强度等)碱基互补配对结合,重新 形成双链;在这一过程中,核酸分子经历了变性和复性的变化,以 及复性过程中分子间键的形成和断裂等。杂交的双方是待测核酸序 列和已知核酸序列。在杂交体系中已知的核酸序列称作探针( probe),探针通常用于进行核素或非核素示踪标记。 三、核酸分子杂交的原理
探针的意义:要检测某一样品或基因组DNA中特定的DNA顺序或基因片段 ,首先必须获得相应的探针,即已知顺序的DNA或RN片段,并使它带上 可检测到的示踪标记
探针的意义:要检测某一样品或基因组DNA中特定的DNA顺序或基因片段 ,首先必须获得相应的探针,即已知顺序的DNA或RNA片段,并使它带上 可检测到的示踪标记
分子杂交的形式: ()固一液相杂交一般在进行某一核酸顺序的检测时,先将待测 的单链靶核酸固定在适当的载体上,然后置于含相应单链核酸探针的杂 交反应体系中,通过碱基互补配对原则,两条单链的同源顺序通过氢键 互相结合,形成双链结构。经过对标记探针的检测可以判断待检测样品 中相应顺序的存在与否及分子量大小。 (2)液相杂交有时也将待测核酸和已知核酸同时放在液体中进行 杂交反应。 两种杂交形式的基本原理都是一样的
分子杂交的形式: ⑴ 固—液相杂交 一般在进行某一核酸顺序的检测时,先将待测 的单链靶核酸固定在适当的载体上,然后置于含相应单链核酸探针的杂 交反应体系中,通过碱基互补配对原则,两条单链的同源顺序通过氢键 互相结合,形成双链结构。经过对标记探针的检测可以判断待检测样品 中相应顺序的存在与否及分子量大小。 ⑵ 液相杂交 有时也将待测核酸和已知核酸同时放在液体中进行 杂交反应。 两种杂交形式的基本原理都是一样的
四、核酸分子杂交的的过程一DNA的变性与复性 1、变性:在物理或化学因素作用下,例如加热、酸碱或紫外线照射, 可以导致两条DNA链之间的氢键断裂,而核酸分子中的所有共价键 (如磷酸二酯键、糖苷键等)则不受影响,称为DNA变性(DNA denaturation)。 导致DNA变性的常用方法有三种: (1)热变性 (2)碱变性 (3)化学试剂变性
1、变性:在物理或化学因素作用下,例如加热、酸碱或紫外线照射, 可以导致两条DNA链之间的氢键断裂,而核酸分子中的所有共价键 (如磷酸二酯键、糖苷键等)则不受影响,称为DNA变性(DNA denaturation)。 四、核酸分子杂交的的过程—DNA的变性与复性 导致DNA变性的常用方法有三种: ⑴热变性 ⑵碱变性 ⑶化学试剂变性