琼脂糖凝胶电泳 制胶:先封好制胶板,调好梳子的高度;再 称取021g琼脂糖于30m0.5×TBE电泳液中, 融化,冷至50左右加μEB,混匀,倒胶; 制样:10溶解后的质粒加入1—2μ溴酚兰; 点样电泳; 结果观察:一般有三条带(超螺旋、开环 线型三种构型)
琼脂糖凝胶电泳 • 制胶：先封好制胶板，调好梳子的高度；再 称取0.21g琼脂糖于30ml 0.5×TBE电泳液中， 融化，冷至50 oC左右加2l EB，混匀，倒胶； • 制样：10μl溶解后的质粒加入1－2μl溴酚兰; • 点样电泳； • 结果观察：一般有三条带（超螺旋、开环、 线型三种构型）
SolutionI:葡萄糖50Mm Tris.HCI 25Mm EDTA 1OMm RNase A 100ug/ml Solution: Naoh o2N SDS 1%o Solutionis SM KAC 60ml 冰乙酸11.5ml HO 28.5ml
SolutionI: 葡萄糖50Mm Tris.HCl 25Mm EDTA 10Mm RNase A 100μg/ml SolutionII: NaOH 0.2N SDS 1% SolutionIII: 5M KAC 60ml 冰乙酸 11.5ml H2O 28.5ml
For sequence: Solution l: I MTris-HCI(pH7.6)2.5ml 0.25M EDTA 2.0ml ddh,o 45ml sterile by autoclave add 10mg/mI rnasea 05ml Solution iiis SMKAC 13.2ml ddo 27ml Adjust ph to 4.8 add ho to 50ml Sterile by autoclave
For sequence: Solution I: 1 M Tris-HCl(pH7.6) 2.5ml 0.25 M EDTA 2.0ml ddH2O 45ml sterile by autoclave add 10mg/ml RNaseA 0.5ml Solution III: 5 M KAC 13.2ml ddH2O 27ml Adjust pH to 4.8 add H2O to 50ml Sterile by autoclave
RNaseA:C或U的3’-P与相临的5 OH处切开。(配制:一般以10mg/ml 溶于TE中,然后在沸水中煮10-30分 钟之后分成小份储存于-20C EB:溴化乙锭,可嵌入DNA分子中, 受紫外光激发而发出荧光,利用它可 检测DNA。是诱变剂,可引起插入突 变,并有中度毒性,操作时应注意防 护
•RNaseA: C 或U的3’－P与相临的5’－ OH处切开。〔配制：一般以10mg/ml 溶于TE中，然后在沸水中煮10－30分 钟之后分成小份储存于－20oC〕 •EB：溴化乙锭，可嵌入DNA分子中， 受紫外光激发而发出荧光，利用它可 检测DNA。是诱变剂，可引起插入突 变，并有中度毒性，操作时应注意防 护
氨苄青霉素( ampicillin):能够杀死正在生长 的大肠杆菌,其主要通过肽聚糖交联而抑制 细胞壁的合成。 氨苄青霉素抗性基因(ampr):合成β-内酰胺 酶,在氨苄青霉素进入细胞之前将其水解
氨苄青霉素（ampicillin）: 能够杀死正在生长 的大肠杆菌，其主要通过肽聚糖交联而抑制 细胞壁的合成。 氨苄青霉素抗性基因（ampr）:合成β-内酰胺 酶，在氨苄青霉素进入细胞之前将其水解