分子克隆技术
分子克隆技术
系列
系列一 利用质粒载体克隆水稻DNA片段
多克隆位点 外源DNA 限制性內切酶酶切 限制性内切酶酶切 3-0H 30H 5°P 30H CIAP去除5磷酸 30H T4连接酶连接 转化E.Coli
CIAP去除5‘磷酸 外源DNA 限制性内切酶酶切 5‘P 3‘OH 5’P 3‘OH 5’P 5’P 3‘OH 3‘OH T4连接酶连接 5’OH 5’OH 3’OH 转化E.Coli 限制性内切酶酶切 多克隆位点 3’OH
载体必备条件: 1.是一个复制子; 2.载体在受体细胞中能大量繁殖,其携带的外 源基因才能在受体细胞中得到大量扩增 3.有1到几个限制内切酶的单一识别与切割位 点,便于外源基因的插入; 4.具有选择性的遗传标记(如抗生素抗性标记 等)以此知道它是否已进入受体细胞,并据 此标记将受体细胞从其他细胞中分离出来
载体必备条件： 1. 是一个复制子； 2. 载体在受体细胞中能大量繁殖，其携带的外 源基因才能在受体细胞中得到大量扩增； 3. 有1到几个限制内切酶的单一识别与切割位 点，便于外源基因的插入； 4. 具有选择性的遗传标记(如抗生素抗性标记 等)以此知道它是否已进入受体细胞，并据 此标记将受体细胞从其他细胞中分离出来
基因克隆相关载体: Plasmid Cosmid. fosmid PI YAC(Yeast Artificial Chromosome) BAC(Bacterial Artificial Chromosome MAC(Mammalian Artificial Chromosome) PAC(PI-derived Artificial Chromosome) BIBAC (Binary-BAC TAC(Transformation-competent Artificial Chromosome)
基因克隆相关载体： • Plasmid • Cosmid, Fosmid • P1 • YAC (Yeast Artificial Chromosome) • BAC (Bacterial Artificial Chromosome) • MAC (Mammalian Artificial Chromosome) • PAC (P1-derived Artificial Chromosome) • BIBAC (Binary-BAC) • TAC (Transformation-competent Artificial Chromosome)