二、PCR技术的基本原理 2.PCR的基本步骤 ·扩增片段的特异性依赖于与靶序列互补 的寡核苷酸引物。 ·PC由变性-退火-延伸三个基本步骤构成， 这三个步骤构成一个循环，每次循环约 需2~4分钟，每次循环的产物作为下一 次循环的模板，如此循环30次，新生DNA 片段理论上约可达到2n个拷贝
21 2. PCR的基本步骤 • 扩增片段的特异性依赖于与靶序列互补 的寡核苷酸引物。 • PCR由变性-退火-延伸三个基本步骤构成， 这三个步骤构成一个循环，每次循环约 需2～4分钟，每次循环的产物作为下一 次循环的模板，如此循环30次，新生DNA 片段理论上约可达到2 n个拷贝。 二、PCR技术的基本原理
变性（denature):加热至约95℃，模板； DNA双链解离成单链，以便它与引物结合。 待扩增的目的序列 3 ↓热变性 3 5' 5' 3
22 变性（denature）：加热至约95℃，模板 DNA双链解离成单链，以便它与引物结合
退火(annealing) （复性)：模板DNA经加 热变性成单链后，将温度降至引物的Tm值左 右或以下(55℃左右)，引物与模板DNA单 链互补配对，形成杂交链。 3'c 5'0 3 ↓退火 日（一对引物） 3' 51 ▣沙 ←回 5 3
23 退火（annealing）（复性）：模板DNA经加 热变性成单链后，将温度降至引物的Tm值左 右或以下（55℃左右），引物与模板DNA单 链互补配对，形成杂交链
延伸(extension)：DNA模板-引物结合物在 TaqDNA.聚合酶的作用下(72℃)，以dNTP为 反应原料，靶序列为模板，按照碱基互补配对 合成一条新的与模板DNA链互补的链。 ↓延伸 3 5 : 5 3
24 延伸（extension）：DNA模板-引物结合物在 TaqDNA聚合酶的作用下（72℃），以dNTP为 反应原料，靶序列为模板，按照碱基互补配对， 合成一条新的与模板DNA链互补的链
↓变性-退火 ◆口 g ↓延伸 变性-退火-延伸
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