将胺叶先煎成10%水剂经测定胺液各浓度对细胞的无毒反应界限后,取其对细胞无毒 反应的浓度作为试验用量。在接人病毒的同时加人胺液,使培养液中含胺液浓度达1:100 经胺液处理的病毒在PSF细胞中传至19代已达到减毒目的,连续取19~29代的病毒液分别 用0.65%生理盐水稀释成10-和10-2浓度,以每尾0.2毫升的剂量,注射9~12厘米草鱼种 观察15天,均不发病,安全性为100%,再以草鱼出血病强毒.2毫升/尾的剂量攻毒,观察15 天,其免疫保护率亦均达100%。作者认为GCHV-892野毒的胺叶减毒株是很有希望的减毒 株,值得维线深人研究,并车进一步取得可靠实验数据后可作为制备弱毒疫苗的毒种 悼鱼,红痴,灭沈疲誨 草鱼出血病浸泡灭活疫苗的制作与应用 瞿浩哉 (杭州市水产科学研究所,310004) 5412 由呼肠孤病毒引起的草鱼出血病是草鱼养殖中危害极大的一种鱼病致使当年草鱼死亡 率常达Ⅺ¨左右、并能诱发草鱼烂鳃、肠炎和赤皮病的发生。多年来水产科技工作者借助免疫 方法致力于防治草鱼出血病的研究研制出草鱼出血病浸泡疫苗。生产实践证明,与注射疫苗 相比,浸泡疫苗不仅能增強卓鱼免疫力而且具有操作简便,省时省工,不易损伤鱼体的优点 亦能对4~6月龄的夏花鱼种施行免疫。为此我们借鉴以往全国各地对浸泡疫苗的研究,博采 众家之长,并加以补充改进,试制出浸泡灭活疫苗,1991年春在杭州市桐庐、临安、肖山、富阳 建德、西湖、江干等八个县(区)及省内绍兴、宁波、金华、台州、丽水、温州等八个地区推广应用, 使用单位反映良好,草鱼成活率平均87.55%,最高达99%。养殖单位大为减少了草鱼病造成 的损失、共浸泡免疫草鱼861万尾,平均提高成活率42.55%。增加产值2289万元,获得较高 的经济效益。 方法 1、制备毒种:选用自然发病具典型出血病症状的一龄草鱼的肝、脾、肾、肠和肌肉等制备成 组织浆、经3000转/分,离心半小时,取上清液,加人青霉素和链霉素。毒种的浓度为10 2、疫苗试制:将浓度10-毒种按0.5ml/尾注射到材料鱼体腔内,将其放入28℃水温的池 子内饲养,待鱼体出现典型出血病症状后,取病鱼的内脏和肌内等组织生理盐水,经过高速组 织捣碎机捣碎成匀浆,再行灭活处理,同时加入青、链霉素,最后包装成袋(内配小包山茛菪碱 作辅导剂)。放置4C冰箱保藏。 3、免疫接种法:将疫苗和山莨着碱放入小杯清水中搅散,再倒人50公斤塘水中,使莨着浓 度呈1-1ppm,加食盐成2%浓度,分二次浸泡草鱼种100公斤,每次20-25分钟,浸泡后 将鱼放鱼塘中饲养 4、疫苗使用时期:木疫苗经严格灭活使用不受季节影响,但是,为了生产上的便利最佳 使用时期为冬末春初鱼种放养季节,此时水温低新陈代谢水平低,操作时不易损伤鱼体。 应用效果
将胺 叶先煎成 10 水剖 ，经测定胺 液各浓度对细胞 的无 毒反应界限后 ，取其对 细胞无毒 反应 的 浓 度 作 为 试骑 用量 在 接入 病毒 的 同 时 加入 胺 液 ，使 培 养液 中含 胺 液 浓 度 达 1：1000， 经 胺 液 处理 的病 毒在 PSF细 胞 中 传至 19代 已达 到 减 毒 目的 。连 续 取 19～29代 的病 毒液 分 别 用 0，65 生 理 盐 水 稀 释 成 10 和 10 浓 度 ，以每 尾 O 2毫 升 的 剂量 ，注 射 9～ 12厘 米 草 鱼种 ， 观察 15天 、均不 发病 ，安全性 为 100 ，再以草 鱼出血病强毒 0．2毫 升／尾的剂量攻毒 ，观 察 15 天 ，其免疫保护率亦均达 100 。作 者认为 GCHV 892野毒的胺叶减毒株是很有希望的减毒 …杭州市水产科学研究所，31004，)‘5l口，t．IlI 由呼肠 孤 病 毒 I起 的 草 鱼 出血 病 是 草 鱼 养 殖 中危 害 极 大 的 一 种 鱼 病 ，致 使 当年 草 鱼 死 亡 率 常达 。丘 右 ．薛能 诱 发 草 龟 烂鳃 、肠 炎 和 赤皮 病 的 发 生 。多 年 来 水 产科 技 工 作 者 借助 免疫 方 法 致 力 于 防 治 草 鱼 出 血病 的 研 究 ．研 制 出草 鱼 出血 病 浸 泡疫 苗 。生 产 实践 证 明 ，与 注射 疫 苗 相 比，浸泡疫 苗不仅 能增 强草 鱼免疫力 ，而且具 有操作简便 ，省 时省 工，不易损 伤鱼体的优点， 亦能对 4～6月龄的夏花鱼种施行免疫 为此，我们借鉴以往全 国各地对 浸泡疫苗的研究 ，博采 众家之长 ，并加 以补充改进 ，试制出浸泡灭活疫 苗 ，1991年春 在杭州市 桐庐 、临安 、肖山、富阳、 建 德 、西湖 、江 干等 八个 县 (区 )及省 内 绍 兴 、宁 波 、金 华 、台 州 、丽 水 、温州 等 八 个 地 区推 广 应 用 ， 使用单位反映 良好，草鱼成活率 平均 87．55 ，最高达 99 。养殖单位大为减少 了草鱼病造成 的损 失 ，共 浸 泡 免 疫 草 鱼 861万 尾 ，平 均 提 高 成 活 率 42．55 。增 加 产 值 2289万 元 ，获 得 较 高 的经 济 效 益 。 一 、 方 法 1、制备毒种 ：选用 自然发病具 典型 出血病症状的一龄草鱼的肝、脾 、肾、肠 和肌 肉等制备成 组织浆 、经 3000转／分 ，离心半小时 ，取上清液 ，加人 青霉 索和链霉索 。毒种的浓度为 10 。 2、疫苗试制 ：将浓度 lo 毒种按 0．5ml／尾注射到材料鱼体腔 内．将其放入 28℃水温 的池 子内饲养 ，待 鱼体 出现 典型 出血病症状 后 ，取病鱼 的内脏和肌 肉等组织生理盐 水 ，经过高 速组 织 捣碎机捣碎成匀浆．再行 灭活处理 ，同时加人青 、链霉索 ，最 后包装 成袋 (内配小包 山莨 菪碱 作辅导剂)。放置 4c冰箱保藏。 3、免疫接 种法 ：将疫苗和山莨菪碱放入小杯清水 中搅散 ，再倒入 5o公斤塘水中，使莨菪浓 度呈 1～10ppm，加食盐成 2 浓度 ，分二次浸泡草 鱼种 100公斤 ，每次 2。～25分钟 ，浸泡后 ， 将 鱼 放 鱼 塘 中 饲养 。 4、疫 苗使 用时期 本疫苗经严格灭活 ，使用不受季节影响 ，但是 ，为 了生产 上的便利 ，最佳 使用时期 为冬末春初鱼种放养 季节 ，此时水 温低 ，新陈代谢水平低 ．操作时不易损伤鱼体 。 二 、应 用效 果 】6 一 啡 耽 靼 维普资讯 http://www.cqvip.com
1、浸泡灭活疫苗在生产中具有的先进性、实用性。 一九九一年春,我们试制的疫苗在杭州地区八个县(区)及省内八个地区推广·统计结果, 推广总面积57426.7亩,浸泡鱼种8614000尾年终起捕尾数7491480尾,成活率78-99%, 平均87.5冶,增加产值2289万元 经过差异显著性T检查得出t=39.67、自由度n=13-1=12.查表t0.001(12)=4.32 故t10.001(12),即P<0.001,说明浸泡疫苗组与未浸泡疫苗组的草鱼成活率差异极显著 提高草鱼成活率42.55,使用浸泡疫苗大大提高了草鱼成活率 草鱼出血病是由病毒引起,由于其严格的活细胞寄生,一般药物治疗较难奏效而且药物 防治往往只能在最初发现病情时,有一定疗效,一且病情严重,一般治愈效果很差。刘介勋、庄 明炎、黄森等各研究用大黄台剂,中药(PHA)聚乙烯氮戊环酮(PVP-1)防治草鱼出血病.将 草鱼成活率分别提高到54%、71.2%和60%而浸泡疫苗将草鱼成活率提高为87.55%最高 达99%说明它防治草鱼出血病的功效远远大于其他药物。 浸泡疫苗在生产使用中操作简便,省工省时,只需一次浸泡鱼种20~25分钟,即可使鱼体 产生免疫力,所以在生产中非常实用 2、浸泡灭活疫苗与茛菪药配合使用的安全性及高效性 我们试制的没泡疫苗采用了最佳灭活方法.即疫苗于01%福尔马林在32℃水温水浴72 小时。即可使病毒的感染性蛋白完全失活、又能使疫苗的免疫原性损失最小还加了青链霉 素于疫苗内确保疫苗无菌从而使疫苗质量保证,安全可靠。 由于疫苗(抗原)为大分子物质,较难透过细胞膜进入鱼体引起免疫反应而医学界已证明 莨菪能通过增强细胞膜上Na泵、CB泵的活力,影响膜上各种脂质体流动力,以增强细胞膜上 的通透性。提高细胞膜转运蛋白分子的能力。莨菪药物还能改善微血管的做循环,有加强吞噬 细胞功能的作用增进鱼体免疫功能。艾桃山等研究证明茛菪在1~10ppm浓度下对鱼体的生 理状况,存活情况没有影响鱼类对药物不存在应急反应,茛菪对鱼体不产生副作用。为此,我 们用茛菪药作辅导剂在部分地区进行了实验比较统计结果表明灭活疫苗单独使用,草鱼成活 率平均72%,而灭活疫苗与茛若配合使用草鱼成活率平均87.5%,说明通过加莨菪药浸泡 灭活疫苗的功效有了较大提高、这与张念慈等的研究结果一致。 3、使用方法 先将草鱼种拉网锻炼,出塘时先入冈箱暂养操作时先将浸泡疫苗放在搪瓷脸盆中搅散,然 后倒入木制容器内(木船或桶)加塘水稀释,按每包疫苗加清沽塘水50公斤同时加入食盐使 呈3%的浓度再将草鱼种100公斤分二次放入浸泡20至25分钟,然后将鱼种放入库塘。 浸泡时间均在12月至翌年3月底以前,水温13℃至19℃以下为最佳时间
1、浸 泡 灭 活疫 苗 在 生 产 中具 有 的先 进 性 、实 用性 。 一 九 九 一年 春 ，我 们试 制 的 疫 苗在 杭 州地 区 八 个 县 (区 )及省 内八 个 地 区推 广 ，统 计 结 果 一 推广总 面积 57426．7亩 ，浸泡 鱼种 8614000尾，年终起捕尾 数 7491480尾 ，成 活率 78～99 ， 平均 87．55 增 加 产 值 2289万 元 。 经 过 差 异显 著 性 T 检 查 得 出 t=39．67、自 由度 13．=13— 1=12，查 表 t0．001(12)一4．32一 故 t>t0．00l(12)，即 P<0．00l，说 孵浸 泡 疫 苗组 与 未 浸 泡 疫 苗 组 的 草 鱼 成 活 率 差 异极 显 著 ， 提 高 草 鱼 成 活 率 42 55 ，使 用 浸 泡疫 苗 大 大 提 高 了 草鱼 成 括 率 。 草 鱼出血病 是由病毒 引起 ，由于其严格的活细胞寄生 ，一般 药物 治疗 较难奏效 ，而 且药物 防治 往往 只能 在 最 初 发 现 病 情 时 +有 一 定疗 效 ，一旦 病 情 严重 ，一 般 治愈 教 果 很 差 。刘 介 勋 、庄 明 炎 、黄 森 等 各 研究 用大 黄台 剂 ，中药 (PHA) 聚 乙烯 氮 戊 环 酮 (PVP一 1)防治 草 鱼 出 血病 ，将 草 鱼成活率分别提高到 54 、71．2 和 6o ，而浸泡疫苗将 草鱼成活 率提高 为 87．55，，最高 达 99 ，说 明它 防治 草 鱼 出 血病 的功 效 远 远大 于 其他 药 物 浸泡疫苗在生产 使用中操作简便 ，省工省时 ，只需一次浸泡鱼种 20～25分钟 ，即可使鱼体 产 生免 疫 力 ，所 以在 生 产 中非 常 实 用 2、浸泡灭活疫苗与茛菪药配合使用的安全性 及高效性 我们试制的浸泡疫苗采 用了最佳 灭活方法 ，即疫苗 于 0．1 榀 尔马林在 32℃水温 水浴 72 小时 。即可使病毒 的感 染性蛋 白完全失 活 又能使疫苗的免疫原性损失最小 ，还加 了青 、链 霉 素 于 疫 苗 内 确 保疫 苗 无 菌 ，从 而使 疫 苗 质 量 保 证 ，安 全 可靠 由于疫 苗f抗 原)为大分 子物 质，较难 透过细胞膜进入 鱼体引起免疫反应 ，而压学界已证明 莨菪能通过增强细胞膜 七Na泵、ca泵 的活力 ，影响膜上各种脂质体流动力 ，以增强细 胞膜 上 的通透性 提 高细胞膜转运蛋 白分 子的能力 。莨菪药物还能改善微血管的微循环 ，有加强吞噬 细胞 功能的作用，增进鱼体免疫功能 。艾挑 山等 研究证明茛菪在 1—10ppm 浓虞下对鱼体的生 理 状 况 ，存 活 情 况 没有 影 响 ，鱼 类 对 药 物 不 存 在应 急 反 应 ．茛菪 对 鱼 体 不产 生 副 作用 为此 ，我 们用茛菪药作辅导剂在部分地区进行了实验 比较 。统 计结果表 明灭活疫苗单独使用 草鱼成 活 率平 均 72 一而灭活疫苗与茛菪配合使用，草鱼成活率平 均 87．5％，说 明通过加莨菪药 ，浸泡 灭活 疫 苗 的 功效 有 了较 大 提 高 。这 与 张念 慈等 的研 究 结 果一 致 ， 3、使 用 方法 先将 草鱼种拉网锻炼 ，出塘 时先入网箱暂养操作 时先将浸泡疫苗放在搪瓷脸盆 中搅散 ，然 后倒人术 制容器 内(木船 或桶 )加塘水稀释 ，按每包疫 苗加 清洁塘水 50公斤 ，同时加入食盐 使 呈 3 的浓 度 ，再 将 草 鱼 种 100公 斤 分 二 次 放 人 浸 泡 20至 25分 钟 ，然后 将 鱼 种 放入 库 塘 ， 授泡时问均在 12月至翌年 3月底以前，水温 l3℃至 l9℃ 下为最佳时间。 17 维普资讯 http://www.cqvip.com