《草鱼出血病》草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究：疫苗株的免疫原性及其有效免疫...

维普资hpw http/www.cqvip.com 第13卷第2期 水产学报 Vol.13, No. 2 1989年6月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA June,1989 草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究 疫苗株的免疫原性及其有效免疫 剂量的比较 杨先乐夏春左文功 中国水产科学研究院长江水产研究所) 提要本文比较了疫苗株854和F836-w的免疫原性,及其对三寸左右草鱼 种的有效免疫剂量。疫苗株-854和F836w均有较强的免疫原性,其保护力可达70% 以上。但试验结果初步证明,FR-84疫苗比F836-w疫苗免疫原性更强。经统计分析, F-854疫苗的免疫保护力可达88.9±12.0(6%,血清中和抗体效价为160.5±58.9(6);而 Fr-836-w疫苗分别只有71.3±14.2(6)%、88.3±262(6);二者有显的差异(0.05> 0.01)注射免疫三寸左右的草鱼种,FR-854的免疫剂量在3-5×10CD尾左右,r -836在8-5x10.CD尾左右,其免疫保护力可达80%左右,同时我们测得R-854 的半数免疫量为10D/ml 关键词草鱼出血病鱼呼肠孤病毒,细胞培养灭活疫苗疫苗株免疫剂量 草鱼(Ctenopharymgodom sdellus.etv.)血病是鱼呼肠孤病毒(fV)引起的病 毒性疾病(中国科学院武汉病毒所,中国水产科学研究院长江水产研究所沙市分所草鱼出 血病研究协作组,19831984a1984b),严重影响着草鱼的成活率,目前尚无理想的防治方 法。1985年以来,我们开始对草鱼肾细胞系CK)培养的鱼呼肠孤病毒灭活疫苗进行研 究,通过对其安全性、免疫原性和抗攻击保护力试验,初步证实了该疫苗防治草鱼出血 病的可行性,并且测得草鱼对该疫苗的应答时间(水温28左右)为10天,在第20天 时,免疫后的草鱼血清中和抗体水平达到峰值,免疫保护力也达到较高水平(杨先乐等, 1986) 对疫苗株的筛选及其抗原性的研究,是制备高效细胞培养灭活疫苗的一个重要方 面。但在水产领域,国内外对此报道甚少。疫苗的有效免疫剂量是疫苗的一个重要参数, 学者们曾作过一些研究(高汉姣等,1986 De Kinkelin et ab.1984),但各具特定性。为 此我们从十几株野毒株中,初步筛选出二株具有较强免疫原性的病毒株,对其免疫原性进 行了详细的比较,并对它们所制备的细胞培养灭活疫苗的有效免疫剂量作了研究 本文承卫生部上海生物制品研究所焦水真教授,国农科院哈尔滨兽医研究所徐振东副研究审阅,并提出 宝贵意见在此一并致谢 收稿年月:198年月;血病 (1)高汉姣等1986。草 84细胞培养灭活疫苗实验研究,疫苗度对出血病免疫力的影响。鱼 病简讯,(4):1

第 13卷 第2期 198g年 6月 水 产 学 报 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Vo1．13．No．2 Ju ．1989 草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究 — — 疫 苗株 的免疫原性及其有效免疫 剂量的比较 枥先乐 夏 春 左文功 (中国水产科学研究院长江水产研究所) 提 要 本文比较了疫苗株 FR~54和 FR-836-w 的免疫原性，及其对三寸左右草 鱼 种的有效免疫剂量。疫苗株 F1％~54和 Fl~836-w 均有较强的免疫原性 ，其保护力可达 70菇 E卫上。但试验结果初步证明，FR-854疫苗比 Fl~836-w 疫苗免疫原性更强。经统 计 分 析， FR~54疫苗的免疫保护力可 达 88．9±12．o(6) ，血清中和抗体教价为 16o．5±58．9(6)；而 FR-836-w 疫苗 分别只 有 71．3±14．2(6)彤、88．3士26．2(6)；=者 有显 著的差 异(O．05>P> 0．01)．注射免疫三寸左右的草鱼种，FR-854的免疫剂量在 3—5X10“ TCID5。／尾左右 ，FR ≈36’W在 3—5xl0‘TCIDla／尾左右 ，其免疫保护力可达 8O 左右 ，同时我们测得 F 采畦 舶半效免疫量为 1O“TCID1．／mL 关键词 草鱼出血病 ，鱼呼肠孤病毒 ，细胞培养灭活疫苗 ，疫苗株，免疫剂量 草鱼 ( mo 池 ； sa．etV．)出血病是鱼呼肠孤病毒 (FRV)引起 的病 毒性疾病 (中国科 学院武 汉病毒所 ，中国水产科学研究 院长江水产研究所沙市分所草鱼出 血病研究协 作组 ，1983}1984a~1984b)，严重影响着草鱼的成活 率 ，目前 尚无理想 的防治方 法 。1985年 以来 ，我们开始对 草鱼肾细胞 系(CIK)培养的鱼呼肠 孤病毒灭 活疫苗进 行研 究 ，通过对其安全性 、免疫原性和抗攻击保护力试 验 ，初步证实 了该 疫苗 防治 草鱼出血 病的可行性 ，并且铡得草鱼对该 疫苗 的应答 时间 (水温 28a左右 )为 lO天 ，在 第 2O天 时 ，免疫后的草鱼 血清 中和抗体水平达到 峰值 ，免 疫保 护力 也达 到较 高水平 (杨先 乐等 ， 1986)。 对疫苗株 的筛选及其抗 原性 的研究 ，是制备高效细胞培养灭活疫苗 的 一 个 重 要 方 面。但 在水产领域 ，国 内外对此报遭甚步。疫苗的有效免 疫剂量 是疫 苗的一 个重要参数 ， 学者们 曾作过一些研究(高 汉姣 等 ，1986 }DeKinkelinet ；．1984)，但各具特定性。为 此我们从十几株野毒株 中，初步筛选出二株具 有较 强免 疫原性的病毒株 ，对其免疫原性进 行 了详细 的比较，并对它们所制备的细胞培养灭活疫苗的有效免疫剂量作了研究。 · 本文 承卫生 都上 海生物 制品研 究所焦 永真教 授 ，中国农 科院喧尔 滨兽 医研究所 棣振 糸副 研究 员审阅 ，并提 出 宝贵意见，在此一并致谢。 收 稿年 月：1988年 8月 ；同年 12月修 改 。 (1) 高汉蛀等．1986。草鱼出血病 GCK一84细胞培葬灭活疫苗实验研究，接苗陆鏖对 出血病免疫力的影响。鱼 霸简 讯 ，(4)：l 维普资讯 http://www.cqvip.com

杨先乐等:草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究 材料和方法 1.疫苗的制备与检定将在CIK细胞上增殖稳定的种子毒株FE854和FR836 分别接种 于已呈单层的CIK细胞,收获后灭括前测定其病毒滴度(TIm1)。疫苗制备和检定参照杨先乐等 (1986)所采用的方法。由此所得的细跑培养灭活疫苗,分别简称为FB854和FB886W疫苗。病毒 灭活前的滴度,作为确定疫苗免疫剂量的依据。 2.疫苗的接种及免疫原性测定采用腹腔注射的方法,对三寸左右的草鱼种进行免疫(水温28°C 左右)。疫苗注射量为08-06m以测定免疫鱼的免疫保护力和血清中和抗体效价评价疫苗的免疫效 果(杨先乐等,198)。 3.FR864和FR838-W疫苗棒免疫原性的比较用滴度相近、各批次未作任何稀释的FB~854 和FE-88-W疫苗,分别对草鱼种进行6次免疫接种试验(同时设立不注射疫苗的对照组,以下试验 同)。免疫后20天左右检测中和抗体及保护力,并将试验结果进行统计分析,以比较二疫菌株的兔疫 原性。另一方面,用无血清的 Eagles MEM准确将FB854和FB88W疫苗稀释成同一滴度后,同 时免疫一冬龄草鱼或当年草鱼,20天后,比较其免疫原性 4.疫苗有效免疫剂量和半数免疫量的测定用无血清的 Eagle s MEM将FB84疫苗或FB 836W疫苗作序列稀释后,同时免疫一冬龄草鱼,然后根据免疫20天后的免疫效果,衡量疫苗的有效免 疫剂量和半数免疫 试验结果 疫苗株免疫原性的比较 用滴度基本接近的各批次理R854和IR836W疫苗,不进行任何稀释,直接免疫 一冬龄或当年草鱼种,试验统计结果表明,二疫苗对草鱼出血病均有一定的抗攻击保护作 用,免疫保护力分别为88.9±12.0(6)%、71.3±14,2(6)%*。它们的中和抗体效价分 别达1605±58,9(6)883士26.2(6),与对照组有极其显著的差别(P值均小于0.001) 表1)。但是F854疫苗与836W疫苗相比,前者的免疫原性显著高于后者,无论 从免疫保护力还是血清中和抗体水平分析,二者均有显著的差异(t检验,0.05>p> 0.01) 另将R854疫苗和FR836W疫苗稀释成同一病毒滴度含量后,同时免疫一冬龄 草鱼70尾,当年草鱼50尾,其结果如表2。对一冬龄和当年草鱼种,FR-854疫苗的免 疫保护力和血清中和抗体效价都要高于或略高于FR-836-W疫苗。 、疫苗有效免疫剂量 将滴度为10GID/ml和100CID/ml的理R854疫苗分别稀释成10°,10-1, 2×10-2,10-2和10°,10-1,10-2,使其最终含量为10,105,2×10°,100,10OID ml,然后分成二组免疫一冬龄的草鱼种。试验结果表明,免疫剂量在10TcID/ml( 03-0.5ml)以上的PR854疫苗,保护力均在80%以上,血清中和抗体水平也较高;当免 疫剂量下降到104ID/ml(×0.3-0.5m)时,免疫效果明显下降,免疫保护力只有 6%,血清中和抗体效价也下降到12.2±14.4(2),基本上保持在对照水平(表3)。同时,根

2期 橱先乐等：草鱼出血病鲺晦培养灭活疫苗的研究 139 材 料 和 方 法 1．疫苗的制备与检定 将在 CIE 细胞上增殖稳定 的种子毒株 FR-854和 FR--836一w．分别接种 于已呈单层的 CIE 细胞，收获后灭活前测定其病毒滴度(TCII)¨／mI)。疫苗制各和检定参照杨先乐等 (1986)所采用的方法 由此所得的细胞培养死活疫苗 分别简称为 FR—854和 F 船 6-w疫苗 病 毒 死活前的滴度 ，作为确定疫苗免疫剂量的依据． 2．疫苗的接种爱免疫原性测定 采用腹腔注射的方法 ，对三寸左右的草鱼种进行免疫 (水温 28℃ 左右)。疫苗注射量为 0．8一O．缸 以测定免疫鱼的免疫保护力和血清中和抗体效价评价疫苗的免疫效 果 (杨先乐等，1986)。 5． FR-854和 FR--836-w 疫苗株免疫原性的比较 用潇度相近，各批次来作任何稀释的 FR-85~ 和 FR--836-w 疫苗，分别对草鱼种进行 6捷免疫接种试验 (同时设立不注射疫苗的对照组 ，以下试验 同)。免疫后 20天左右 ，检测中和抗体及保护力 ，并将试验结果进行统计分析 ，以比较二疫苗株的免疫 原性。另一方面 ，用无 血清的 B le，BMEⅡ 准确将 FR-854和 FR-83e-w 疫苗稀释成同一漓度后 ，同 时免疫一冬龄草鱼斌当年草鱼，2O天后 ，比较其免疫原性。 4．疫苗有效免疫帮量和半教免疫量的测定 用无血 清 的 F~ ldsMEM 将 F 诅 疫 苗 戒 FR 836--w疫苗作序列稀释后 ，同时免疫一冬龄草鱼，然后根据免疫 2O天后的免疫效果，衡量疫苗的有效 免 疫荆量和半数免疫量。 试 验 结 果 一 ， 疫苗 株免 疫原性的比较 用滴度基 本接近的各批次 FR-854和 FR-836-w 疫苗 ，不 进行任何稀释 ，直接免疫 一 冬 龄或 当年草鱼 种，试验统计结果 表明 ，二疫苗对草鱼 出血病均有一定 的抗攻击保护作 用 ，免疫保护力 分别为 88．9±12．O(6) 、71．3±14．2(6) 。 它们 的中和抗体效价分 别达 160．5±58．9(6)、88．3±26．2(6)’，与对 照组有极其显著的差别(P值均小于0．001) (表 1)。但是 FR-854疫苗 与 FR--836-w 疫苗相 比，前 者的免疫原性显著 高于后者 ，无论 从免疫保护力还是血清 中和抗体水平分析 ，二者均有显著的差 异 (t检 验 ，0．05>p> 0．01)。 另将 卫B一854疫苗 和 FR-836-w疫苗稀释成 同一病毒 滴度含量后 ，同时免疫一冬 龄 草 鱼 7O尾 ，当年草鱼 5O尾 ，其结果 如表 2。对一冬龄和当年草鱼种 ，FR-854疫苗 的免 疫 保护力和血清中和抗体效价都要高于或略高于 FR-836-w 疫苗。 二 、疫苗有效免疫剂量 将 滴度为 10 TCID 。／ml和 10 TCID。／m]的 ~ -854疫苗分别稀释成 1O。，10～， 2×10_。，10 和 lO。，10～，1O一，使其 最终含量为 10 ，10 ，2×10 ，10 ，10“TCID ／ ml，然后分成二组免疫一冬龄的草鱼种 。试验结果 表明 ，免疫剂量在 10“TCID-。／ml(× 0．3一 O．5m1)以上 的 FR-854疫苗 ，保护力均在 8O跖以上 ，血清中和抗体水平 也较 高 ；当免 疫剂量 下降到10‘。TCI 。／ml(×0．3— 0．5m1)时 ，免疫效果 明显下降 ，免疫保护力 只有 6 ，血清中和抗体效 价也下降到 12．2±14．4(2)，基本上保持在对照水平 (表 3)。同时 ，棍 维普资讯 http://www.cqvip.com

水产学报 13卷 表1各批次未稀释的近滴度FE854和FR836-w疫苗免疫原性比较 Table 1 Comparison of immunogenicity between FR-854s and FR-838-ws which were delivered at approximate doses 试验尾数 疫苗名称疫苗批号免疫组 时照组 第 了中和「存 血济中和度保护力 % 抗体效价 10010095.0 99 70,0 74.8 150/150 90,0 149,7 38.0 FR-864 102 497 11,2 80/0 18.8 100.0 9±11.4(6 12.±1762.7±1565(889±2.(6 60;17 70.0 644 89.0 89.8 11.2 89.0 6-8 17/17 88.2 128.0 8.2 89.8 28-1 60 60,0 28-2 60.0 89,1 16.7 18.8 B2.0 10/180 4.8±129(6 L28 127±12,66)14,3±12.86)71,8±14z() FB-8B4与F比836w比较 血清中和抗体效价:能保护B0%的细胞不产生病变的最终血清稀释度的倒数。 免疫保护力(%)=(1-试验组的 x100 表2稀释成同滴度的FB85疫苗与FR836w疫苗免疫原性的比较 Table 2 Comparison of immunogenicity between FR-854 and FR-838-w which were dilated to the equal titre with Eagles MEM 试验日期 1987年7月7日~8月28日19年8月4日~9月16日 一冬龄草鱼种 当年草鱼种 疫苗滴度 Titre(ToID/ml) 存恬尾数/试验尾数 7/10 FR-864 免疫保护力存活率% 免疫保护力%) 血清中和抗体效价 74.8 存活尾数/试验尾数 FR--886-w 免疫保护力存活率% 免疫保护力%) 血清中和抗体效价 97, 存活尾数/试验尾数 16.7 血清中和抗体效价 5,8 11.1 经适当处理后使用前在4t冰箱中已分别保存11天和150天 经适当处理后使用前在4℃冰箱中已分别保存1天和139天

l4O 水 产 学 报 l3卷 表 1 各批发未稀释的近漓度 FR-854和 FR-836-w疫苗免疫原性比较 Table 1 c啪Ⅲ ri∞ n ofim munogenicity between FR-f34sand FR-836-ws which were delivered atal xima抽 doses 试验 尾数 免 疫 组 对 照 姐 免疫保 护力 疫 苗 名称 疫苗批 号 (免 疫姐 ／ 存 括 率 血 清中和 · 存 活 率 对 照蛆 ) 血 清中和· (名 ) ( ) 抗 体鼓竹 ( ) 抗体效 价 7一I ltm／ltm 95．o 256．0 0 39．8 ％ ． 0 8—I 50／50 70．o 74．8 0 6．6 70． 0 9— 1 0， 0 90．0 l49．7 16 88． 0 船 ．2 FB—8取 lO一 1 55f醯 96．4 183．1 48．6 蜘 ． 1 1(—_2 7o1235 ioo．o 14日．7 0 11．2 100． 0 I1— 1 8o／~0 10o．o 】49．7 18．7 l8．8 100． 0 检 侧 统 计 160．6± - X ±S．D．(N) i91．9±11．如 ． 58． 9(8) 12．6±17．1(6)盘 ．7±15．船 鹋 ．9土12． 0㈣ 6一 I 60,,170 70．o 89．1 21．4 8． o H ．6 6_2 76／78 83．o 89．8 o 11．2 83． o 扫— 17／17 船 ．2 228．o 舡 ．2 4．o 83． 8 FR—I8B—w 23— 1 45，50 6o．o 45．2 o 5． 8 60．o 23_ 2 60 0 6o．o 1 16． 7 18．8 62．o 2垂__l 10 I鼬 舾 ．7 89．1 6． 7 3B．o 84．6 捡溯统计 龉 ．8± L2 X±s．D(N) 74．5±12．啪 26．2(6) ． 7±12．@(6t14．3~12．曲71．8±14．I1 FE-854与 FP~836-W 比较 0．05>p 0．帖 >p > 0．01 > 0． 01 ‘ 血 请 中和抗体效 竹 能保护 5O名的 细胞 不产生 病 变的最 终血 请稀 释度 的倒 数 “免疫保护力c)=(一饕冀等藩 )x100 表 2 稀释咸同漓度的 FR-854疫苗与 FR--836-w疫苗免疫原性的比较 Table 2 Com partzcn 0f im m unogenicity between FIL~54 an d ．FR-836--w w hich wm diluted to the equaltitrv with Eagle BM EM 试 验 日 期 ’ I。87年 7月7日～8月28日 1987年8月14日～日月l6目 免 疫 对 象 一冬 龄草鱼 种 1当 年 草 鱼 种 痤苗 滴度 Titre(TOI o．／rn1) 10v- 10vE 存 活 尾数／试 验尾数 7／10 ／0,"10 FR—854 竟 症保 护力 存 活 率( ) 7o 100 疫 苗 免疫 保护 力( ) 70 1oo 血清 中和 抗体效 价 74．8 112．4 存 活尾 数／试 验尾数 6／lO 6／10 FR—88B_w 免疫 保护力 存 活 率 ( ) 60 6o 疫 苗¨ ． 免疫 保护力 ( ) 6o 62 血清 中和抗 体效竹 4．5．2 97． 5 有 活尾 数／试 验尾 数 O／lO 2／12 对 照 存 活 率 ( ) 0 16． 7 血请 中 和抗体效价 5．B 11． 1 ¨ 经适 当处理 后 使用 前在 4℃ 冰箱 中已分别保 存In 无和 18日天 ． 维普资讯 http://www.cqvip.com

期 都先乐等:草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究 141 据表3的试验结果,我们初步得到理R854疫苗的半数免疫量为10·oID/ml 表4是10…和102OHD4/m(x0,3-0.5m1)两种免疫剂量的FR836-W疫苗对 冬龄草鱼种的免疫效果的比较。结果表明,当免疫剂量下降到10CID/ml(×0.3 0.5ml时,该疫苗的免疫保护力下降到56,0±57(2)%,血清中和抗体效价也相应降 低。经t测验,它的免疫保护力与10°D/ml(x03-0.5ml)剂量的给予组有比较 显著的区别(0.1>p>0.05) 表3不同给予剂量的FR-854疫苗的免疫效果 Table 3 Immunity of vaccine FR-85is which were delivered at different dose 疫苗给予剂量( TCIDe/ml x080.5ml) 试验日期 捡测项目 2×1010 实际释度 10-1 2×10-2 存活尾数/试验尾数8/0 18/15 F 月免疫保护 存活率(%) 88.9 保护力%) 88.9 价0X 16.3 实际稀释度 1987年8 存活尾数/试验尾数 58/55265245 月Q日免疫保护力存活率(% 47.2 43.6 保护力%) 和抗体效价 180.8± 12,2± 11.2 因故障未获得数据 表4两种给予剂量的FR836-W疫苗的免疫效果 Table 4 Immunity of vaccine FR-036-w which were delivered at two different dose 对 度》免疫保护力(%) 血清中和抗体效价 存活率%) 血清中和抗故价 923±10,9(2) 172.6±83,5(2) 88±11.82) 84±3.92) 1060572):2) t测验 0,1>p>0.05 03>p>02 ·ToIw/m×(030.bml) 讨 论 1.自Duff(1942)率先报告使用疫苗防治鱼类疖疮病以来,已有四十多年的历史 但是鱼用疫苗的使用还相当有限,研究进展也比较缓慢,尤其是鱼类病毒疫苗,至今仍处 在探索之中,即使目前工作做得较多的病毒性出血性败血症(ⅴHS疫苗,也还处在实验 室试验阶段,尚无商品性疫苗投入使用( De Kinkelin et ai.1984)。尽管如此,国外对鱼

2期 杨先乐等：草鱼出血病细胞培养死活疫苗的研究 1n 据表 3的试验结果 ，我们初步得到 FR-854疫苗 的半 数免疫量为 1O TaID。。／ml。 表 4是 l0。’和 10 ‘TOID,。／ml(×0．3一O．5m1)两种免 疫剂量 的 FR-836一w疫 苗对 一 冬龄草鱼种的免疫效果的 比较 结果表 明 ，当免疫剂量 下降到 10 ‘TOID。。／ml(×0．3 M 0·5m1)时 ，该疫苗 的免疫保护力 下降蓟 50．0±5．7(2) ，血 清中和抗 体效 价也相应降 低。经 t测验 ，它的免疫保护力 与 10|’‘TCIDo／ml(×0．3—0．5m1)剂量的给予组有 比较 显著的 区别(0．1>P>0．o5)。 表 5 不同给予剩量的 FR．-854疫苗的免疫效果 T~ble3 Immunity ofvaccineFR_{lS如 which 霄er|}delivere~!a±differentdose 疫苗 培予 剂 量(TOZD~／mlx 0．3__0．5m1) 试 验 日期 检 测 项 目 对 照 10丁·‘ 10I·s 2×105·‘ 10"·5 lot·_ 实 葡 稀 释 度 10a 10一 2×10 lO-Z 19盯 雕； 月7坩月1日日一免疫保 护力r鬟蓁数88／．0131G／1O3188B，．175F 0，1O5 血蝴 接 价 61珊0．5．9(2±)16122．．88(2±) 1鞠15．4．8(2±)曲．1±O(2) 1762．3(2±) 实 际 稀 释 度 10I lo一‘ 1o 1987年 8 护力 戤 53／55 58／55 26~55 2t55 月 l口日一 96．4 98．4 47．2 43．6 7月 秘 日 80． 1 舯 ．1 B．0 血耍富{{怎 价 148．oOC．32± 15603．．25(2±) 1142．4．2(2±) 112 ‘ 商故障来获得数据 。 表 4 两种培予剂量的 FR-8~一w疫苗的免疫效果 Table4 Im m untty of vaccine FR -B36-w which were delivered attwo differentdose 疫苗培 予剂 量 对 照 (剂 量 ／实际 稀释度 ) 免疫 保 护力 ( ) 血 清 中和 抗体 效价 存 活 率( ) 血 清 中和抗体 教价 10'一s／] 92． 3±10．9(2) 172 6±88．5(2) 8．8±1】．8(2) 8．4±8．9(2) 10T·s，1o-, 66． o±5．7(2) 71．8±甜 ．O(2) t测 验 0．1>p>0．05 0．8>P>0．2 ‘TcI口 ／m1×(O．3-0．5m]．) 讨 论 1．自 Duff(1942)率先 报告使用 疫苗 防治鱼类疖疮病 以来 ，已有 四十多年 的 历 史 ， 但是 鱼用疫苗 的使用还相 当有 限 ，研究进展也 比较 缓慢 ，尤 其是鱼类病毒 疫苗 ，至今仍 处 在探索之 中，即使 目前工 作做得较多 的病 毒性 出血 性败血 症 (VⅡs)疫苗， 也还处在实 验 室试验 阶段 ，尚无商 品性 疫苗投入使用 (DeKinkelin 口 ．1984)。尽管如此 ，国外对 鱼 维普资讯 http://www.cqvip.com

142 水产学报 13卷 用疫苗的研究仍很火热,也取得了不少成就初步展示了鱼用疫苗的应用前景。我国关于 鱼用疫苗的研究起步较晚,应用尚处于空白(不考虑组织浆疫苗)。从我们的研究结果可 以看出,无论是FR-854疫苗还是FR-836-W疫苗,都能获得较理想的免疫效果,这就 进一步证明了用免疫预防的方法防治草鱼出血病是一条很有希望的途径 2. Dorson(1984)在概述鱼类应用免疫学时说,免疫原的质和量是判断一种疫苗好 坏的重要根据之一一种疫苗成功与否,很大程度上决定该抗原能否诱导鱼体产生保护性 抗体。因而筛选具有强抗原性的疫苗株是进行鱼类疫苗研究的一个重要方面,它不仅能 提高疫苗的免疫效果,而且也能降低疫苗的成本,为疫苗实际应用和商品化生产奠定基 础。我们从分离到的十几株野毒株中,初步筛选出FR-854和FR-836W疫苗株,通过 对二毒株所制备的疫苗免疫接种后的抗体应答及抗攻击保护作用比较观察,初步证实了 FR-854比FR-836-W疫苗株的免疫原性更强。 FR-854与F-836-W毒株于不同年份采集于湖北荆沙地区,关于其免疫原性差异 的原因我们正在深入研究之中。 3.以病毒灭活前的滴度作为疫苗免疫剂量的参考标准,我们认为是一个可行又较合 理的方法。 De Kinkelin等(1984)在研究灭活的病毒性出血性败血症疫苗时,曾以此作 为确定疫苗免疫剂量的方法,而高汉姣等(1986)在研究疫苗免疫剂量对免疫力的影响时, 却把疫苗的稀释度作为疫苗免疫剂量的衡量标准。从我们对FR-854疫苗两个同等稀释 度(10-)而不同病毒滴度(灭活前)所获得的不同免疫效果的试验(表3),我们认为以病 毒灭活前的滴度作为疫苗免疫剂量的衡量标准较为合适。 疫苗的有效免疫剂量是疫苗的一个重要参数。关于VHsv灭活疫苗, De Kinkelin 等(1984)确定以每克鱼体重注射2×10°pu(空斑形成单位)的给于量时,其成活率可达 90%左右,根据试验结果,我们初步认为FR-854疫苗的半数免疫为10·ToID/ml。 以FR-854疫苗和FR-836-W疫苗对3寸左右的草鱼种注射免疫接种,其免疫剂量分别 约为10oD/ml(x0.3-0.5m1)和10· TCIDso/ml(x0.3-0.5ml),即3-5 10…oID/尾和3-5×10OD。/尾时,对草鱼出血病的兔疫保护力可达80%左有。 分析不同免疫剂量的FR-854疫苗的免疫效果,我们发瑰10oD/ml似乎比 10TOTD3a/m1接种量对草鱼的免疫效果要好一些。同样,表2中也有类似的现象,只 保存111天的F-854疫苗(灭活前病毒滴度为10oI5/ml)却比保存了150天(灭 活前滴度为10TOID/m1)的该疫苗的免疫保护力和血清中和抗体效价要低。这是因 为偶然的异常,还是因为疫苗免疫过程中导致部分免疫耐受性?假若如此这就提示我们 在使用疫苗时要做到免疫剂量适宜。 italian(1980)研究鲤鱼的免疫效果时发现,注射 过量的牛血清白蛋白会导致免疫耐受。 Manning et al.(1980)用人类r球蛋白注射1 14日龄的硬头鳟也得到了同样的结果。关于F854疫苗能否引起草鱼免疫耐受性的 问题,有待于进一步研究 4.从试验统计的结果,我们发现草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的免疫保护力,大致 上与血清中和抗体水平相平行,也就是免疫保护力较高时,血清中和抗体水平也较高。然 而有个别时候,却也存在免疫保护力与血清中和抗体水平不一致的现象,这种情况在疖疮 病疫苗和弧菌疫苗的研究中也有发现( Michel C,eta.1984)。 Smith(1982)提出,疖疮

水 产 学 报 l3卷 用 疫苗的研究仍很火热 ，也取得 了不 步成 就 ，初步展示了 鱼用 疫苗的应用前景 我国关 于 鱼用疫苗 的研究起步较晚 ，应用 尚处于 空 白(不考 虑组 织浆疫苗 )。从我们 的研 究结果 可 以看 出 ，无论是 FR一854疫苗 ，还是 FR一886-w 疫苗 ，都能 获得 较理 想的免疫效果，这 就 进 一 步 证 明 了 用 免 疫 预 防 的方 法 防 治草 鱼 出 血 病是 一条 很有 希望 的途 径 。 2．Dorson4198,1)在 概述 鱼类 应用 免疫学时 说，免疫原的质和量是 判断一 种疫 苗 好 坏 的重 要 根 据 之 一 }一 种 疫苗 成 功 与 否 ，很 大 程 度 上 决 定 该 抗 原能 否诱 导 鱼 体 产 生保 护性 抗 体。因而 筛选具有强抗原性的疫苗株 是进行鱼类疫苗研究的一个重要 方面，它不仅 能 提高疫苗 的免 疫效果 ，而且也能降低疫苗的成本 ，为疫苗 实际应用和商 品化生产 奠定基 础 。我们从分离到 的十几株野毒株中 ，初 步筛 选出 FR-854和 FR-836-w 疫苗株 ，通 过 对 二毒株所制备的疫苗免疫接种后的抗 体应咎 厦抗 攻击保 护作 用比较观 察 ，初步证实 了 FR-854比 FR-836-w 疫 苗株 的免 疫 原性 更 强 。 FR-854与 FR--836-w 毒株于不同年份采 集于 湖北 荆沙地 区，关于其免疫 原性差异 的 原因我们正在深入研 究之中。 3。以病毒灭活前的滴度作为疫苗免疫剂量的参考 标准 ，我们认为是一个可行又较 合 理 的方法。DeK／nkelin等 (1984)在研究灭 活的病毒性 出血性败血症疫苗时， 曾以此 作 为确定疫苗免疫剂量 的方 法 ，而高汉姣等(1988)在研 究疫苗免疫剂量对免 疫力 的影响 时， 却把疫苗的稀释度作 为疫苗免疫剂量 的衡量标准。从我们对 FR一85,1疫苗两个同等稀释 度 (10 )而不 同病毒滴度 (灭 活前 )所 获得 的不 同免疫效果 的试验 (表 3>，我们认为 以病 毒灭活前的滴度作为疫苗 免疫剂量的衡量标准较为合适。 疫 苗 的 有 效 免 疫 剂 量是 疫苗 的一 个 重 要 参 数 。 关 于 VHSV 灭 活 疫苗 ，DeKinkel／n 等 (1984)确定以每 克鱼体重注射 2x10‘pfu(空斑形成单 位)的给予量 时，其成 活率可达 90 左右 ，根据试验结果 ，我们初 步认为 FR-854疫苗 的半 数免疫罡为 10 TOID 。／ml。 以 FR-854疫苗和 FR-836-w 疫苗对 8寸左右的草 鱼种注射免 疫接 种，其免疫剂量分别 约 为 10 TOID；o／ml(×0．一 0．5m1)和 10 ‘TOIDB。／ml(×0．3— 0．5m1)， 即 3— 5× 10 TOID。／尾和 3— 5×10 TOID ／尾时 ，对草鱼 出血病的免疫保护力 可达 80 左右 。 分析不 同免疫剂量的 FR-854疫苗 的免疫效果 ， 我们发现 lO TOID。／ml似 乎 比 10‘TOID 。／m]接 种量对草鱼的免疫效果要 好一些。同样 ，表 2中也有类似的现象，只 保 存 1】l天的 FR一85,1疫苗 (灭活前病毒 滴度为 10 TOID 。／mh却 比保存 了 15o天 (灭 活 前滴度为 10 TOID。／m1)的该 疫苗 的免疫保护力和血清 中和抗体效价要 低。这 是因 为偶 然的异常 ，还是 因为疫苗免疫 过程中导致部分 免疫 耐受性?假若 如此 ，这就提示我们 在使用疫苗时要做到免疫剂量 适宜。A'v~l／an(1980)研 究鲤鱼的免疫效果 时发现 ，注射 过 量 的牛 血清 白蛋 白会 导致 免 疫 耐受 。Manning eta1．(1980) 用 人类 r球 蛋 白 注射 1— 14日龄的硬头蹲也得到了同样的结果 关于 FR-854疫苗能否 引起草鱼免疫耐 受 性 的 问 题 ，有 待 于 进一 步 研 究 。 4．从试验统计的结果 ，我们发 现草鱼 出血病细胞培养灭 活疫 苗的免疫 保护力， 大致 上 与血清中和抗 体水平相平行 ，也就是免疫保护力较 高时 ，血清 中和抗体水 平也较高。然 而 有个别时候 ，却也存在免疫保护力 与血清 中和抗 体水平不 一致 的现象 ，这 种情况 在疖 疮 病疫苗和 弧菌 疫苗 的研究 中也有发现 (Michel0．et ．1984)。Smith41982)提 出，疖疮 维普资讯 http://www.cqvip.com