维普资讯hpww. http://www.eqvip.com.com 《鱼病简讯》1989年第23期 抗草鱼出血病病毒药物的实验研究 朱心玲李爱华谢巧雄 (中国科学院水生生物研究所 草鱼出血病是我国首次发现的一种病毒性疾病,也是当前淡水养鱼业中危害最大的一种 鱼病。1972年我所在湖北省口养殖场发现此病后,即着手研究:1976年报导了该病是一种 传染性病毒性疾病1984年我所已确定此病的病原体为草鱼呼汤孤病( Reuvirus of Carplgrass)简称(G)本病潜伏期短、传播迅速,发病率高、危害极大因此如何 防治本病已成为一重要课题。 国外有关学者如 Ame nd.(1972b,1974b,1976);内庄明炎等(1984)、肖鱼等 (1984)也用药防治病毒病取得了效果。我所鱼病研究室在70年代对本病进行大量的 药筛工作,初步证实了某些药物有抗病毒的效能。随着动物病毒的分子生物学研究、对病毒 结构和理化特性的研究较为充分,寻找抗病毒物质如合成药和天然药物,特异地抑制感染 机体中病毒的繁殖,从而治疗病毒病已成为可能。为此,作者对本病的防治药物进行系统地 实验研究。 材料与方法 一、实验材料 (一)、药品:有核苷类、苯并咪唑类、抗生素类类、异啉类酮醛类、吖啶 类及其衍生物以及天然药物等。 (二)、病毒悬液的制备:用培养液将病毒组织在无菌条件下,制成101浆悬液备 用。 (三)、实验鱼:体重在2~10克之间的草鱼,取自本所实验场,取回后用2%食盐水溶 液,经药浴20~30分钟后,放入去氯自来水中暂养24小时左右排除粪便后,供实验用。 二、实验方法 (一)、用腹注射(ip)方法进行给药和人工感染。腹腔注射的给药途径又分 变性发展到死脱落,其临诊症状为全身竖鳞,腹部膨胀,充满淡黄色渗出液,呼吸困难, 浮于水面。这样的病鱼已很难存活。 对鱼病一定要做到“防重于治,无病先防有病早治”的原则,从组织上观察,一旦发 现组织变性,要立即找出原因,尽早消除致病原因使组织恢复正常机能,否则将会沙变性 导致可逆的坏死脱落。 3
《鱼病简讯》 1989年第2—3期 抗草鱼 出血 病病毒药物 的实 验研究 朱心玲 李 爱华 谢 巧雄 (中 国科学 院水 生生 l物研 究所 ) 草鱼 出血 病是 我国首次发现的一种病毒性疾病 ．也是 当前淡水养 鱼业 中危 害虽 犬的一种 鱼病 。I972年 我所 在湖北 省滠 口养殖场发现此病后 ，即着手研究 ；1976年报 导了该病是一 种 传 染 性病 毒 性 痰 病 ；1954年 我所 已 确 定 此 病 的 病 原体 为 革 鱼 呼 肠 孤 病 毒 (Reovirusof Carp rass)， 简 称 (Gf V) 本病 潜 伏 期 短 ， 传 播 迅 速 ， 发 病 串商 ，危 害极 大 。 因此 如 何 防 治本 病 已成 为 一 蓬 要 课 题 。 国外 有关 学 者 如 Amend． (1972b， ]974b， 1976)；田 内庄 明 炎 等 (1984)， 肖 鱼 等 (I984)电用药物 防治病毒病取得了 效 果。我所 鱼病研 究宦在 O年 代；曾对本病 进 行太帚 的 药筛工作，初步证实了 某些 药物有抗病 毒；j勺效能。随着动物病毒的分子 生物学研 究．对病毒 结构和理化特性 ：f研究较 为充分，寻找抗病毒物质，如合 成药和天 然药物，特异地抑制感染 机 体中病毒 的繁 殖，从而 治疗病毒 病 已成为可能。为此 ，作者对本病的 防冶药物进行系统地 实验研 究。 材料 与方法 一 ， 实 验 材 料 (一 )、药 品；有核苷 类 ，苯并眯唑类、抗 生素类、胍 类、异 嶝 啉类 ．酮 醛类 ，吖啶 类 及 其衍 生 物 以及 天然 药 物 等。 (二 )、病毒悬液 的制 备：用培养液 将病 毒组织在 无菌 条件下， 制成l0I1匀浆悬液 ，备 用 。 (三 ) 实验 鱼： 体 重在 2～ 1O克 之间均萆鱼，取 自本所实验场 ，取回后 用2 食盐 水溶 液， 经药浴20～30分 钟后， 放 入去氯 自来水中，暂养24小时左右排除粪便 后，供实验用。 二 、 实验 方 法 (一) 采用腹腔 注射 (ip)方法，进行给药和人 工感染 。腹 腔注射 的给药 途径．又分 变性 发展到坏死脱 落，其 临诊症 状为全身 竖鳞 ，腹 部膨胀， 充满淡 黄色渗 出液，呼吸困难， 浮于水面。这样 的病鱼 已很 难存 活。 对 鱼 病 一定 要 做 到 防 重 于 治， 无 痫 先 防， 育病 早 治 的原则 ， 从 组 织 上 观 察 。 一 旦 发 现组织变性 ，要 立即找 出原因， 尽早消除致痛原因，使 组织恢 复正常机能， 否则将会使变性 导致不可逆 的坏 死脱 落。 维普资讯 http://www.cqvip.com
为药毒同时、先药后毒和先后药3种。与此同吋,还设置只注入病毒悬液的病毒对照和不 作任何处理的空白对照,尔后分别放入去氯自水中,水温控制在28°C~0°C之间,实验 期间不喂食。 (二)、药量按克体重计算 (三)、病毒悬液的使用滴度为102。 (四)、注射量按0.05m1/克体重计算。 (五)、药效观察:每日观察,连续10天、用肉眼鉴别垂死病鱼症状、确定药物抗毒效 (六)、抑毒效率的计算公式 抑毒效率(%)=、病毒对照组发病率-药物组发病率×100 病毒对照组发病率 结果 、几种有效抗病淼药物对鱼出血病病毒的作用。 通过86种抗病毒药物的初筛.选出丁87-01、87-06、88-04和88-05五种有效药物, 再进行确定有效剂量的试验,本次实验共用体重为2~10克之间的草鱼883尾。结果列于表 1。从表中可见5种药物中以87—0:为最好,腹注剂量为250μg/g,其抑毒效率为9459% 其次为88-02.腹注剂骚为孙g/,共抑毒效率为8320%;再之为87-06和88-03,两药用 量约为10g/g,抑毒效率兮别为7260、70,:1%;88-01腹注剂景为30u/g.抑毒效率为 66.40% 抗病毒药物87~仿对草鱼出血病病毒的最适抑毒效能实验 抗病毒药物870是一种育希望的药物,在初筛过程中已显示出药效稳定。因此,作者 对本药进行了确定最造有效剂量的试验。实验共用体重为6~8克草鱼558尾,用5、10、 20μg/g3种剂量,用腹注给药途径分别给药,结果分别列入表?。 从表分析本药的最适抑毒效能的腹注剂量,以}/为最好,其抑毒效为88.99; 其次为10μg/g,抑毒效宰为86,49%;以20μg{更次之,抑毒效率为82,9%。由此证明,本 药的抑毒放能与药物浓度成反比。 三、抗病毒药物87-05的不同给药途径的抑毒效能。 实验共用体重为6~8克草鱼591尾、采用先药后毒和先毒后药两种给药方法,观察 本药的抑毒效率,结果丹列入表3、4。从表3中間显可见、两种给药方法均以10μ药量 为最适抑毒效率 讨论 本实验结果表明,87-01、87-—5、87—06、88-01、88-02和88-03等6种抗病毒药 物,对草鱼出血病病毒有较好的抑毒效能。均为有希望的抗病毒药物,目前、对上述各药的 药效的进一步肯定,作者正在深入研宽之中
为 药毒 同时、先药岳毒千丌先毒后药 3种。 与此 同时 ，还设置 只注入病毒悬液 的病毒对照和不 作任何 处理的空 白对 照，尔后分别 放入去氯 自米水中，水温控 斜在 28。c～30。c之 间， 实验 期 间 不喂 食 。 (二 )、 药量按克 体重计算 。 (三 )、病毒悬液 的使用滴 度为10一。 (四 )、注射最按0．oamI／克体重计算 。 (五 )、药 效观察：每 日观 察，连续 1O无，用 肉眼鉴别垂死病 鱼症 状， 确定 药物抗毒效 能 。 (六 )， 抑 毒 效 率 的计 算 公 式t 抑毒效率( 痼孝碹 发病率 x10。 结 果 一 、 几种 有效抗病 毒药物对蒂龟 出血病病毒 的作 用。 通过86种抗病 毒药物的初筛，选 出了87—01、87—06、88一O4和88—0；五 种有效药物， 再进行确定有 效剂 景的试验，本 次实 硷共 用体 重为2～1og之 间的 ，草鱼 883尾。结果 列 于表 l。从袭 中可见 5种药物 中以87—0：为最 好。腹注剂量 为250r'-glg，其抑毒 效率为94．59 ； 其次为88—02，腹 注剂量为 g ， 共抑毒效率为83．20 ；再之为87— 06和88一 O3，两药用 星约 为l0 g ，抑毒效率讣别为72．60、7o．34 {88—0l 愎注剂量为3O~g／g．抑毒效率为 66．40 二、抗病 毒药 物87~05对草鱼 出血病 病毒的最适抑毒 效能实验 抗 病 毒 药 物87— 0j是 一种 有希 望 的 药 物 ， 在 初筛 过 程 中 已显示 出药 效稳 定 。 田此 ， 作 者 对 本药进行 了确定最适有 效剂量 的试 验。实验共 用体 重为 6～ 8克 草鱼 558尾 ，用 5、lO， 2on．~／g3种剂最 ，用腹注给药途径分别给药 ．结 果分 别列 入表2。 从 表2J)-析 本药的展适抑 毒效能的腹注剂鼍， 以5 g／g为最好， 其抑 毒效率为 88．9e％； 其 次为1O g／g，抑毒效率为86．49 ；以20 g／g更次之，抑毒效 率为82．29 。F}1此证 明，本 药 的 抑毒 效能 与 药 物 浓 度 成 反 比。 三 ，抗病 毒药 物87～05的不同给药途径的 抑毒 效能。 实验共用体重为 6～ 8克m草 鱼 591尾， 采用先药后毒和先毒后药 两种给 药方法，观 察 术药的抑毒效率，结果 丹列入表 3、 4。从衰 3中明 最可见 ，两种给药方法均 以1O” ／g药 匮 为最 适 抑 毒 效 率 。 讨 论 本实验结果表 明，87-01、87— 05、87一O6、88— 01，88一O2和 88— 03等 6种抗病 毒药 物，对 草鱼 出血病病 毒有较 好的抑毒 效能 。均为有希望 的抗病毒 药 物， 目前，对 上述 各药的 药 效 的 进 一步 定 ，作 苦正 在深 入研 究 之 中 。 84 维普资讯 http://www.cqvip.com
本病病莓的敏感细胞培养技术尚不稳定,作者采用鱼体直接筛选药物的方法,使所得实 验结果史为可靠,更符合生产实际应用。 87-01的抑毒效率为9.59%,抑毒效能好。但用量较大,作者对此药正在作减少药量、 增加药效的研究 87-05的抑毒效能稳定,作者对本药进行的最适给药途径和给药剂量的实验研究,结果 表明本药是极有希望的药物。作者对本药对抗GRcV的作用机理、药代动力学、毒理学研究 正在进行中。本药的毒理学研究报告将另文报导。 表1几种有效抗病毒药物对GR上v的作用 5名 试验 腹注 抑毒 及 鱼数 剂量 魚数 效率 组别 (尾 (μg/g) (%) 3.95 196 白 163 0 病 毒白一 1对对6对对 照 44 空 30 66。40 病毒对照 空白对照 88-02 10,00 83·0 病毒对照 59,52 空自对照 88-03 0.34 病 空 毒白 对对 照 表287-0对GR的最适给药剂量试验 组别 试验 瞍注 发病 发病 抑春 鱼数 剂蜇 鱼数 效率 (尾 给药组 12 病毒对照 空白对照 给 病 药毒 组对 照 空白对照 病 药毒 组对 8899 照 空白对照 0
本病病毒的敏感细胞培养技术尚不稳定，作者采用鱼体直接筛选药物的方法，使所得实 验 结果更为 可靠 ，更 符合生产实 际应用 。 87一 O1的抑毒效率为94．59 ，抑毒 效能 好 但 用量较 大 ，作者对此药 正在 作减少药量 、 增 加 药 效 的 研 究 。 87一 O5的抑毒效能稳定， 作者对 本药进行的最 适给 药途径和给药 剂量 的实验研究，结果 袭明本药是极有希望的药 物。作者对 本药对抗GP,JC,Y~作用机理 、药 代动力 学，毒 理学研究 正在进行 中。本药的毒理 学研 究报 告将另文 报导。 ～ 囊 1 几种有效抗寓毒药物耐GR莨_v的作用 药 名 及 组 别 87一 O1 病 毒对 照 空 白对 照 87- 06 病 毒对 照 空 白对 照 88— 01 病 毒对 照 空 白对 照 88— 02 病 毒对 照 空 白对 照 88— 03 病 毒对 照 空 白对 飘 20 o 发病 率 抑 毒 效 率 ( ) ( ) 3．95 94．59 72．60 19．{4 70．97 20．00 59．52 10．00 59．52 20．00 67． 4 85 赚雠 。 ； “ ： 。。 ： 舶 她 一。渤 种 m 舱馓㈣ m 毛；鲫的蛇鲫 卸如姐 维普资讯 http://www.cqvip.com