2)荧光测定法 荧光测定法也是一种连续观测方法,原理:如果酶 反应的底物与产物之一具有荧光,那未荧光变化的速 度可代表酶反应速度 可以应用此法测定的酶反应有两类 (1)脱氢酶等反应,它们的底物本身在酶反应过 程就有荧光变化。(2)利用荧光源底物的酶反应 优点:是灵敏度极高,它比光吸收测定法还要高2 3个数量级,因此特别适于酶量或底物量极低时的快 速酶分析
(2)荧光测定法 荧光测定法也是一种连续观测方法,原理:如果酶 反应的底物与产物之一具有荧光,那末荧光变化的速 度可代表酶反应速度。 可以应用此法测定的酶反应有两类: (1)脱氢酶等反应,它们的底物本身在酶反应过 程就有荧光变化。(2)利用荧光源底物的酶反应。 优点:是灵敏度极高,它比光吸收测定法还要高2- 3个数量级,因此特别适于酶量或底物量极低时的快 速酶分析
(3)旋光测定法 某些酶反应过程常伴随着旋光变化,在没有 其它更好的方法可用时,可考虑旋光测定法。 旋光法的缺点是准确度和灵敏度不高,待测 物浓度至少比光吸收法要求的大2个数量级。 酶反应过程中高比旋的蛋白质分子可能发生旋 光变化,导致测定精确度下降。此外,旋光测 定法操作也不甚方便,故一般少用
(3)旋光测定法 某些酶反应过程常伴随着旋光变化,在没有 其它更好的方法可用时,可考虑旋光测定法。 旋光法的缺点是准确度和灵敏度不高,待测 物浓度至少比光吸收法要求的大2个数量级。 酶反应过程中高比旋的蛋白质分子可能发生旋 光变化,导致测定精确度下降。此外,旋光测 定法操作也不甚方便,故一般少用
3.电化学测定法 这也是一类连续分析法,灵敏度和准确度都 很高,可和光学方法相比;而且即使测定系 统中有某些物质污染,也不会影响结果。 但是要求一定的仪器设备
3.电化学测定法 这也是一类连续分析法,灵敏度和准确度都 很高,可和光学方法相比;而且即使测定系 统中有某些物质污染,也不会影响结果。 但是要求一定的仪器设备
(1)离子选择性电极测定法 最普通的是以玻璃电极测定酸度(pH)的变化, 可用于产酸反应的测定 此法操作简单,但有两个缺点: 是随着反应的进行,pH不断变.酶活力也 发生变化; 是测定系统的pH依赖于介质的缓冲能力 蛋白质是高缓冲性物质,粗的待测样品中往往 包含大量惰性蛋白,因而难以保证恒定的缓冲 强度,测定结果不易准确
(1)离子选择性电极测定法 最普通的是以玻璃电极测定酸度(pH)的变化, 可用于产酸反应的测定。 此法操作简单,但有两个缺点: 一是随着反应的进行,pH不断变.酶活力也 发生变化; 二是测定系统的pH依赖于介质的缓冲能力, 蛋白质是高缓冲性物质,粗的待测样品中往往 包含大量惰性蛋白,因而难以保证恒定的缓冲 强度,测定结果不易准确
2)氧电极测定法 这是极谱分析、或者说电解分析的一种应用 其原理是,如果给水溶液中的电极加上一定 电压,那未其中的溶解物质就会在电极上进 行氧化还原反应,从而产生电解电流,测定 这种电流就可以知道溶质的浓度。各种物质 产生电极反应所需要加的电极电压是不同的 因此可以进行选择性测定
(2)氧电极测定法 这是极谱分析、或者说电解分析的一种应用。 其原理是,如果给水溶液中的电极加上一定 电压,那末其中的溶解物质就会在电极上进 行氧化还原反应,从而产生电解电流,测定 这种电流就可以知道溶质的浓度。各种物质 产生电极反应所需要加的电极电压是不同的, 因此可以进行选择性测定