第十四章核酸类药物 第一节核酸类物质的分离提取及其发酵生产 RNA与DNA的提取与制备 (一)RNA的提取与制备 工业用RNA的提取 (1)RNA及其工业来源 从微生物中提取RNA是工业上最实际和有效的方法。 通常在细菌中RNA占5%-25%,在酵母中占27%~15%, 在霉菌中占0.7%28%,面包酵母含RNA41%~72% 培养酵母菌体收率高,易于提取RNA,在工业上主要 由RNA生产5一核苷酸
第十四章 核酸类药物 第一节 核酸类物质的分离提取及其发酵生产 一、RNA与DNA的提取与制备 （一） RNA的提取与制备 1.工业用RNA的提取 （1）RNA及其工业来源 从微生物中提取RNA是工业上最实际和有效的方法。 通常在细菌中RNA占5％-25％，在酵母中占2.7％～15％， 在霉菌中占0.7%~28%, 面包酵母含RNA4.1％～7.2％。 培养酵母菌体收率高，易于提取RNA，在工业上主要 由RNA生产5‘－核苷酸
(2)高RNA含量酵母菌株的筛选 可以从自然界筛选到RNA含量高的酵母菌株,也可以用 诱变育种的方法提高酵母菌的RNA含量
（2）高RNA含量酵母菌株的筛选 可以从自然界筛选到RNA含量高的酵母菌株，也可以用 诱变育种的方法提高酵母菌的RNA含量
糖蜜水 种子 酵母浆 摇瓶发酵 保温抽提配料 糖蜜配料液 种子培养物 抽提液 水解 种子发酵 分离 抽提清液 水解液 种子发酵培养物 酸化 中和 连续发酵 酸化液 发酵液 过滤 中和沉淀 RNA 收集菌体 过滤 洗涤干燥 酵母菌体 RNA干粉 清糖水 水洗涤 磨粉包装 成品 发酵法生产高含量RNA酵母及其RNA提取工艺流程
糖蜜 水 糖蜜配料液 水解 水解液 中和 中和沉淀 过滤 清糖水 种子 揺瓶发酵 种子培养物 种子发酵 种子发酵培养物 连续发酵 发酵液 收集菌体 酵母菌体 酵母浆 保温抽提 配料 抽提液 分离 抽提清液 酸化 酸化液 过滤 RNA 洗涤干燥 RNA干粉 磨粉包装 成品 水洗涤 发酵法生产高含量RNA酵母及其RNA提取工艺流程
(3)用工业废水培养高含量RNA酵母 减少环境污染,降低粮食消耗 (4)RNA的提取实例 啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。 取100g压榨啤酒酵母(含水70%),加入230ml含NaOH 3g的水,20℃以下搅拌30min。用6 Mol/L HC调至pH7, 搅拌15分钟,离心得上清液25ml。冷至10℃以下, 6mol/LHCl调pH25,置冷过夜,离心等RNA18g(纯 度80%)
（3）用工业废水培养高含量RNA酵母 减少环境污染，降低粮食消耗 （4）RNA的提取实例 啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。 取100g压榨啤酒酵母（含水70％ ），加入230ml含NaOH 3g的水，20℃以下搅拌30min。用6mol/L HCl调至pH7， 搅拌15分钟，离心得上清液255ml。冷至10℃以下， 6mol/L HCl调pH2.5，置冷过夜，离心等RNA1.8g（纯 度80％）
(二)DNA的提取与制备 1.工业用DNA的提取 取新鲜冷冻鱼精20kg,用绞肉机粉碎2次成浆,加入等体 积水,搅拌均匀,倾入反应锅内,缓慢搅拌,升温至 100℃,保温15分钟,迅速冷却至20~25℃,离心去 除鱼精蛋白等沉淀物,共获得35L含热变性DNA溶液。 加乙醇沉淀,可得到固体DNA产品。 2.具有生物活性DNA的制备 动物内脏加4倍量生理盐水经组织捣碎机捣碎1分钟, 浆于2500rpm离心30分钟,沉淀用同样体积的生理盐水 洗涤3次,每次洗涤后离心,将沉淀悬浮于20倍量的冷 生理盐水中,再捣碎3分钟,加入2倍量5%十二烷基磺 酸钠,并搅拌2~3小时,在0℃2500rpm离心,在上层 液中加入等体积的冷乙醇,离心即可得纤维状DNA 再用冷乙醇和丙酮洗涤,减压低温干燥得粗品DNA
（二） DNA的提取与制备 1.工业用DNA的提取 取新鲜冷冻鱼精20kg，用绞肉机粉碎2次成浆，加入等体 积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌，升温至 100 ℃，保温15分钟，迅速冷却至20～25 ℃，离心去 除鱼精蛋白等沉淀物，共获得35L含热变性DNA溶液。 加乙醇沉淀，可得到固体DNA产品。 2.具有生物活性DNA的制备 动物内脏加4倍量生理盐水经组织捣碎机捣碎1分钟，匀 浆于2500rpm离心30分钟，沉淀用同样体积的生理盐水 洗涤3次，每次洗涤后离心，将沉淀悬浮于20倍量的冷 生理盐水中，再捣碎3分钟，加入2倍量5％十二烷基磺 酸钠，并搅拌2～3小时，在0 ℃2500rpm离心，在上层 液中加入等体积的冷乙醇，离心即可得纤维状DNA， 再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品DNA