下游阶段在产业化中是板重要的 6下游阶段是将实验室成果产业化、商品化,主要 包括工程菌大规模发酵最佳参数的确立,新型生 物反应器的研制,高效分离介质及装置的开发 分离纯化的优化控制,高纯度产品的制备技术, 生物传感器等一系列仪器仪表的设计和制造,电 子计算机的优化控制等 工程菌的发酵工艺不同于传统的抗生素和氨基酸 发酵,需要对景响目的基因表达的因素进行分析, 对各种影响因素进行优化,建立适于目的基因高 效表达的发酵工艺,同时建立一系列相应的分离 纯化、质量控制、产品保存等技术
下游阶段在产业化中是极其重要的 下游阶段是将实验室成果产业化、商品化，主要 包括工程菌大规模发酵最佳参数的确立，新型生 物反应器的研制，高效分离介质及装置的开发， 分离纯化的优化控制，高纯度产品的制备技术， 生物传感器等一系列仪器仪表的设计和制造，电 子计算机的优化控制等。 工程菌的发酵工艺不同于传统的抗生素和氨基酸 发酵，需要对影响目的基因表达的因素进行分析， 对各种影响因素进行优化，建立适于目的基因高 效表达的发酵工艺，同时建立一系列相应的分离 纯化、质量控制、产品保存等技术
第三月的基因的获得 6对于目的基因的获得需要根据目的基因的来源采 取适当的方法。 6对于真核细胞来源的目的基因,是不能直接进行 分离的。真核细胞中单拷贝基因仅是染色体DNA 中的很小一部分,即使多拷贝基因也是极少的, 因此从染色体中分离纯化目的基因是很困难的。 6另外,原核表达系统是有局限性的,主要是由于 真核基因的内含子及基因的后翻译过程,所以真 核系统得到了相应发展
第三节 目的基因的获得 对于目的基因的获得需要根据目的基因的来源采 取适当的方法。 对于真核细胞来源的目的基因，是不能直接进行 分离的。真核细胞中单拷贝基因仅是染色体DNA 中的很小一部分，即使多拷贝基因也是极少的， 因此从染色体中分离纯化目的基因是很困难的。 另外，原核表达系统是有局限性的，主要是由于 真核基因的内含子及基因的后翻译过程，所以真 核系统得到了相应发展
第三节目的基因的获得 6目前克隆真核基因常用的方法有逆转录法和化学合成法 一、逆转录法 逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA,再反转录 成CDNA,然后进行CDNA的克隆表达。为了克隆编码某 种特异蛋白质多肽的DNA序列,可从产生该蛋白质的真 核细胞中提取mRNA,以其为模板,在逆转录酶的作用 下,反转录合成该蛋白质mRNA的互补DNA(CDNA第 链),再以CDNA第一链为模板,在逆转录酶或DNA聚 合酶I(或者 Klenow大片段)作用下,最终合成编码该 多肽的双链DNA序列。 6CDNA与模板mRNA序列严格互补,而不含内含子
第三节 目的基因的获得 目前克隆真核基因常用的方法有逆转录法和化学合成法 一、逆转录法 逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA，再反转录 成cDNA，然后进行cDNA的克隆表达。为了克隆编码某 种特异蛋白质多肽的DNA序列，可从产生该蛋白质的真 核细胞中提取mRNA，以其为模板，在逆转录酶的作用 下，反转录合成该蛋白质mRNA的互补DNA（cDNA第一 链），再以cDNA第一链为模板，在逆转录酶或DNA聚 合酶I（或者Klenow大片段）作用下，最终合成编码该 多肽的双链DNA序列。 cDNA与模板mRNA序列严格互补，而不含内含子
第三节目的基因的获得 6一、逆转录法 1、mRNA的纯化 62、CDNA第一链的合成 63、CDNA第二链的合成 64、CDNA克隆 65、将重组体导入宿主细胞 66、CDNA文库的鉴定 7、目的cDNA克隆的分离和鉴定
第三节 目的基因的获得 一、逆转录法 1、mRNA的纯化 2、cDNA第一链的合成 3、cDNA第二链的合成 4、cDNA克隆 5、将重组体导入宿主细胞 6、cDNA文库的鉴定 7、目的cDNA克隆的分离和鉴定
CDMA克隆示意图 mRNA 逆转录酶 SS-DNA Klenow芹段逆转录酶 dS-CDNA dS-cDNA
cDNA克隆示意图 mRNA 逆转录酶 ss-DNA DNA多聚酶I Klenow片段 逆转录酶 ds-cDNA ds-cDNA