江大学网络教育精品资源共享课 《药物分析》课程学习重点难点 中国药典 (见第1章) ①基本内容 《中国药典》由一部、二部、三部及其增补本组成,分别包括“凡例、正文、附录和索引 四部分基本内容。 e凡例 凡例是为正确使用《中国药典》进行药品质量检定的基本原则,是对《中国药典》正文、 附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。 正文 正文为药品质量标准,内容有:品名、结构式、分子式、含量限度、性状、鉴别、检查、 含量测定、类别、规格、贮藏等项目。 ④附录: 附录主要收载制剂通则、通用检测方法和指导原则。 6索引 《中国药典》索引:一部有中文、汉语拼音、拉丁名、拉丁学名四种索引;二部、三部 各有中文、英文两种索引。 药品分析方法的验证 (见第1章) 方法验证内容有:准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性 ①准确度: 指用该方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度,一般用回收率表示 ②精密度: 指在规定的测试条件下,同一个均匀供试品,经多次取样测定所得结果之间的接近程度, 一般用标准偏差(SD)或相对标准偏差(RSD)表示。有重复性、中间精密度和重现性三
浙江大学网络教育精品资源共享课 1 《药物分析》课程学习重点难点 中国药典 （见第 1 章） 基本内容： 《中国药典》由一部、二部、三部及其增补本组成，分别包括“凡例、正文、附录和索引” 四部分基本内容。 凡例： 凡例是为正确使用《中国药典》进行药品质量检定的基本原则，是对《中国药典》正文、 附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。 正文： 正文为药品质量标准，内容有：品名、结构式、分子式、含量限度、性状、鉴别、检查、 含量测定、类别、规格、贮藏等项目。 附录： 附录主要收载制剂通则、通用检测方法和指导原则。 索引： 《中国药典》索引：一部有中文、汉语拼音、拉丁名、拉丁学名四种索引；二部、三部 各有中文、英文两种索引。 药品分析方法的验证 （见第 1 章） 方法验证内容有：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。 准确度： 指用该方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度，一般用回收率表示。 精密度： 指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度， 一般用标准偏差（SD）或相对标准偏差（RSD）表示。有重复性、中间精密度和重现性三
江大学网络教育精品资源共享课 个层次。 6专属性 指在其他成分(如杂质〕可能存在下,采用的方法能准确测定出被测物的特性。 ④检测限 指在实验条件下,试样中被测物能被检出的最低量,无需准确定量。一般以信噪比2:1 或3:1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。 6定量限 指在实验条件下,试样中被测物能被定量测定的最低量,其测定结果必须具有一定的准 确度和精密度。一般以信噪比10:1时的相应浓度或注入仪器的量确定定量限。 ⑥线性 指在设定的被测物浓度(或量)范围内,测试结果(响应值)与试样中被测物浓度或量呈 正比关系的程度。用最小二乘法进行线性回归,以回归方程(y=bx+a)、相关系数(r)表示。 ⑦范围: 指能达到一定精密度、准确度和线性,测试方法适用的高低限浓度或量的区间 8耐用性:指在测定条件有小的变动时,对同一样品测定结果不受影响的承受程度。 典型药物的鉴别、区别试验 (见第2章) 对于药物的鉴别试验,应依据药物的结构特征理化性质分析方法这条主线开展学习。 典型的鉴别试验有重氮化偶合反应、三氯化铁反应、丙二酰脲反应等。 ①重氮化偶合反应 这是具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物,如芳胺类、磺胺类、苯并二氮杂卓类药 物的常用鉴别试验,主要试剂为亚硝酸钠、盐酸和碱性β-萘酚,最终产物为橙黄至猩红色 沉淀的偶氮染料。 (1)鉴别反应的原理:游离芳伯氨基在盐酸性溶液中与亚硝酸钠作用,生成重氮盐, 进而与碱性β-萘酚作用,生成橙黄至猩红色沉淀 (2)注意:具有游离芳伯氨基、潜在芳伯氨基(一般为酰胺键,需水解后才有反应)
浙江大学网络教育精品资源共享课 2 个层次。 专属性： 指在其他成分（如杂质）可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。 检测限： 指在实验条件下，试样中被测物能被检出的最低量，无需准确定量。一般以信噪比 2:1 或 3:1 时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。 定量限： 指在实验条件下，试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果必须具有一定的准 确度和精密度。一般以信噪比 10:1 时的相应浓度或注入仪器的量确定定量限。 线性： 指在设定的被测物浓度（或量）范围内，测试结果（响应值）与试样中被测物浓度或量呈 正比关系的程度。用最小二乘法进行线性回归，以回归方程（y=bx+a）、相关系数（r）表示。 范围： 指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 耐用性：指在测定条件有小的变动时，对同一样品测定结果不受影响的承受程度。 典型药物的鉴别、区别试验 （见第 2 章） 对于药物的鉴别试验，应依据药物的结构特征-理化性质-分析方法这条主线开展学习。 典型的鉴别试验有重氮化-偶合反应、三氯化铁反应、丙二酰脲反应等。 重氮化-偶合反应 这是具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，如芳胺类、磺胺类、苯并二氮杂卓类药 物的常用鉴别试验，主要试剂为亚硝酸钠、盐酸和碱性β-萘酚，最终产物为橙黄至猩红色 沉淀的偶氮染料。 （1）鉴别反应的原理：游离芳伯氨基在盐酸性溶液中与亚硝酸钠作用，生成重氮盐， 进而与碱性β-萘酚作用，生成橙黄至猩红色沉淀。 （2）注意：具有游离芳伯氨基、潜在芳伯氨基（一般为酰胺键，需水解后才有反应）
江大学网络教育精品资源共享课 无芳伯氨基药物之间的区别。 直接能反应的药物如:苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺、磺胺异嗯唑、磺胺 嘧啶、磺胺甲嗯唑等 水解后才有反应的药物如:对乙酰氨基酚、醋氨苯砜、氯氮卓、奥沙西泮等。 没有盦氮化偶合反应但结构类似的药物如:盐酸丁卡因,结构中含芳仲胺,在酸性溶液 中可与亚硝酸钠反应,生成N-亚硝基化合物的乳白色沉淀,可与具有芳伯氨基的同类药物 区别 e三氯化铁反应 具有酚羟基结构的药物,可与三氯化铁试液反应生成有色物质,该类鉴别反应常用于水 杨酸类、苯乙胺类、四环素类等药物的鉴别。苯甲酸类药物也可与三氯化铁反应,但产生有 色沉淀,可与之区别。 (1)水杨酸及其酯类药物的鉴别:在中性或弱酸性条件下,药物与三氯化铁试液反应, 生成红色(中性)或紫色(弱酸性)配位化合物 注意结构区别:具有游离酚羟基结构的药物,如水杨酸、二氟尼柳、对氨基水杨酸钠、 双水杨酯等均可与三氯化铁试液直接反应,呈显紫色。而酚羟基被酯化的药物,如阿司匹林、 贝诺酯等,则需在适当条件下水解后才能与三氯化铁试液反应,呈显紫色。 (2〕苯乙胺类药物的鉴别:肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素等苯 乙胺类药物的分子结构中含有1个或2个酚羟基,可与Fe离子配位显色(紫色或紫红色 (3)四环寰类抗生素的鉴别:本类抗生素分子结构中具酚羟基,遇三氯化铁试液即呈色。 (4)苯甲酸及其盐类药物的鉴别:在中性或碱性溶液中,苯甲酸钠与三氯化铁试液生成 赭色沉淀;丙磺舒生成米黄色沉淀 6丙二酰脲类反应 此为巴比妥类药物的一般鉴别试验,银盐法和铜盐法。 (1〕银盐法:在碳酸钠溶液中,巴比妥类药物与过量硝酸银溶液反应,生成白色二银盐 沉淀 (2〕铜盐法:在吡啶溶液中,巴比妥类药物与铜吡啶试液作用,形成紫色或紫色沉淀, 含硫巴比妥(如硫喷妥)呈绿色,可与之区别 ④硫色素反应
浙江大学网络教育精品资源共享课 3 无芳伯氨基药物之间的区别。 直接能反应的药物如：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺、磺胺异噁唑、磺胺 嘧啶、磺胺甲噁唑等。 水解后才有反应的药物如：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜、氯氮卓、奥沙西泮等。 没有重氮化-偶合反应但结构类似的药物如：盐酸丁卡因，结构中含芳仲胺，在酸性溶液 中可与亚硝酸钠反应，生成 N-亚硝基化合物的乳白色沉淀，可与具有芳伯氨基的同类药物 区别。 三氯化铁反应 具有酚羟基结构的药物，可与三氯化铁试液反应生成有色物质，该类鉴别反应常用于水 杨酸类、苯乙胺类、四环素类等药物的鉴别。苯甲酸类药物也可与三氯化铁反应，但产生有 色沉淀，可与之区别。 （1）水杨酸及其酯类药物的鉴别：在中性或弱酸性条件下，药物与三氯化铁试液反应， 生成红色（中性）或紫色（弱酸性）配位化合物。 注意结构区别：具有游离酚羟基结构的药物，如水杨酸、二氟尼柳、对氨基水杨酸钠、 双水杨酯等均可与三氯化铁试液直接反应，呈显紫色。而酚羟基被酯化的药物，如阿司匹林、 贝诺酯等，则需在适当条件下水解后才能与三氯化铁试液反应，呈显紫色。 （2）苯乙胺类药物的鉴别：肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素等苯 乙胺类药物的分子结构中含有 1 个或 2 个酚羟基，可与Fe3+ 离子配位显色（紫色或紫红色）。 （3）四环素类抗生素的鉴别：本类抗生素分子结构中具酚羟基，遇三氯化铁试液即呈色。 （4）苯甲酸及其盐类药物的鉴别：在中性或碱性溶液中，苯甲酸钠与三氯化铁试液生成 赭色沉淀；丙磺舒生成米黄色沉淀。 丙二酰脲类反应 此为巴比妥类药物的一般鉴别试验，银盐法和铜盐法。 （1）银盐法：在碳酸钠溶液中，巴比妥类药物与过量硝酸银溶液反应，生成白色二银盐 沉淀。 （2）铜盐法：在吡啶溶液中，巴比妥类药物与铜吡啶试液作用，形成紫色或紫色沉淀， 含硫巴比妥（如硫喷妥）呈绿色，可与之区别。 硫色素反应
江大学网络教育精品资源共享课 此为维生素B1的专属反应。在碱性溶液中,维生素B1被铁氰化钾氧化生成硫色素,溶 于正丁醇(或异丁醇等)中,显蓝色荧光。 6紫外光谱法鉴别药物 常用的测定方法有: ①测定最大吸收波长,或同时测定最小吸收波长; ②规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度; ③规定吸收波长和吸收系数; ④规定吸收波长和吸光度比值; ⑤经化学处理后,测定其反应产物的吸收光谱特性 以上方法可结合起来使用,以增加方法的专属性。 杂质检查 (见第3章) ①一般杂质检查 指药物中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、水分、炽灼残渣等项目的检查。重点 掌握氯化物、重金属、砷盐、炽灼残渣等杂质检查原理、反应条件、适宜浓度、限量计算等 中国药典收载的盦金属检查方法:第一法为硫代乙酰胺显色法(pH3.5);第二法为三酸 处理后硫代乙酰胺显色法(pH3.5),第三法为硫化钠试液显色法(碱性溶液)。 中国药典收载的砷盐检查方法:古蔡氏法和Ag(DDC)法。掌握检查中所加试剂碘化钾、 酸性氯化亚锡、醋酸铅棉花、溴化汞试纸等作用,两种方法的异同点。 炽灼残渣的炽灼温度:一般700~800℃,残渣留作重金属检查时,温度控制在500~ 600C 恒重操作:炽灼至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续炽灼30min后 进行,恒重是指在规定条件下连续两次炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量。 残留溶剂测定方法:中国药典规定GC法,定量方法(外标法、内标法、标准加入法)。 2特殊杂质检查 通常采用色谱法进行检查,如TLC法和HPLC法,少数采用光谱法检查 (1)TLC法检查药物中杂质时,有以下几种方法:①杂质对照品法;②供试品溶液自身
浙江大学网络教育精品资源共享课 4 此为维生素B1的专属反应。在碱性溶液中，维生素B1 （1）TLC 法检查药物中杂质时，有以下几种方法：杂质对照品法；供试品溶液自身 被铁氰化钾氧化生成硫色素，溶 于正丁醇（或异丁醇等）中，显蓝色荧光。 紫外光谱法鉴别药物 常用的测定方法有： ①测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长； ②规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度； ③规定吸收波长和吸收系数； ④规定吸收波长和吸光度比值； ⑤经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性； 以上方法可结合起来使用，以增加方法的专属性。 杂质检查 （见第 3 章） 一般杂质检查 指药物中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、水分、炽灼残渣等项目的检查。重点 掌握氯化物、重金属、砷盐、炽灼残渣等杂质检查原理、反应条件、适宜浓度、限量计算等。 中国药典收载的重金属检查方法：第一法为硫代乙酰胺显色法(pH3.5)；第二法为三酸 处理后硫代乙酰胺显色法(pH3.5)，第三法为硫化钠试液显色法（碱性溶液）。 中国药典收载的砷盐检查方法：古蔡氏法和 Ag(DDC)法。掌握检查中所加试剂碘化钾、 酸性氯化亚锡、醋酸铅棉花、溴化汞试纸等作用，两种方法的异同点。 炽灼残渣的炽灼温度：一般 700～800℃，残渣留作重金属检查时，温度控制在 500～ 600℃。 恒重操作：炽灼至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续炽灼 30min 后 进行，恒重是指在规定条件下连续两次炽灼后称重的差异在 0.3mg 以下的重量。 残留溶剂测定方法：中国药典规定 GC 法，定量方法（外标法、内标法、标准加入法）。 特殊杂质检查 通常采用色谱法进行检查，如 TLC 法和 HPLC 法，少数采用光谱法检查
江大学网络教育精品资源共享课 稀释对照法;③杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用;④对照药物法;⑤以试验 条件下显色剂对杂质的检出限来控制杂质限量。 (2)HPLC法检查药物中杂质时,有以下几种方法:①内标法;②外标法;③加校正因 子的主成分自身对照法;④不加校正因子的主成分自身对照法;⑤面积归一化法 (3)紫外可见光谱法:利用药物与杂质的紫外吸收特性差异进行检查。如肾上腺素中 肾上腺酮的检查,酮体在3l0nm有最大吸收,而药物在此波长处无吸收,规定一定浓度供 试溶液的吸光度不得超过某一值来控制酮体的限量 (4)红外光谙法:主要用于检查药物种低效或无效晶型杂质。如甲苯咪唑中无效A晶 型的检查。 (5)原子吸收光谱法:主要用于药物中金属杂质的检查。如甲芬那酸中铜的检查、维生 素C中铜的检查 计算题类型与计算原理 药物分析中的计算题主要有两类:杂质限量计算和药物含量计算。 ①杂质限量计算(见第三章) 杂质最大允许量 基本公式如下:杂质限量 100% (1) 品供试量 式中杂质最大允许量由以下几种方法得到 ①在一般杂质检查中,采用杂质对照品对照法进行检查时,用杂质对照溶液的浓度(C) 与体积(V)的乘积来表示,杂质对照溶液的浓度一般是固定的(按药典规定)。 ②在特殊杂质检查中,常用色谱法检查,如薄层层析、高效液相色谱,杂质对照液浓 度根据样品不同而不同,杂质的最大允许量由杂质对照液浓度与进样(或点样)体积的乘积 来表示,但若杂质对照液和样品供试液的点样(或进样)体积一致,则体积就不用考虑 接用对照液浓度表示。 ③在光谱分析中,一般需要通过计算获得杂质最大允许量。 百分吸收系数法:由方法规定的样品溶液在某一波长处的吸光度值(A)除以杂质纯品 在该波长处的百分吸收系数(E)值,而获得供试溶液中杂质的浓度(C=AE)。 杂质对照品对照法:根据杂质对照溶液浓度(C对)与其吸光度值(A对),以及方法规 定的样品溶液在某一波长处的吸光度限量值(A样),采用单点对照法计算供试溶液中杂质的
浙江大学网络教育精品资源共享课 5 稀释对照法；杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用；对照药物法；以试验 条件下显色剂对杂质的检出限来控制杂质限量。 （2）HPLC 法检查药物中杂质时，有以下几种方法：内标法；外标法；加校正因 子的主成分自身对照法；不加校正因子的主成分自身对照法；面积归一化法 （3）紫外-可见光谱法：利用药物与杂质的紫外吸收特性差异进行检查。如肾上腺素中 肾上腺酮的检查，酮体在 310nm 有最大吸收，而药物在此波长处无吸收，规定一定浓度供 试溶液的吸光度不得超过某一值来控制酮体的限量。 （4）红外光谱法：主要用于检查药物种低效或无效晶型杂质。如甲苯咪唑中无效 A 晶 型的检查。 （5）原子吸收光谱法：主要用于药物中金属杂质的检查。如甲芬那酸中铜的检查、维生 素 C 中铜的检查。 计算题类型与计算原理 药物分析中的计算题主要有两类：杂质限量计算和药物含量计算。 杂质限量计算（见第三章） 基本公式如下：杂质限量= 杂质最大允许量 样品供试量 ×100% （1） 式中杂质最大允许量由以下几种方法得到： ① 在一般杂质检查中，采用杂质对照品对照法进行检查时，用杂质对照溶液的浓度（C） 与体积（V）的乘积来表示，杂质对照溶液的浓度一般是固定的（按药典规定）。 ② 在特殊杂质检查中，常用色谱法检查，如薄层层析、高效液相色谱，杂质对照液浓 度根据样品不同而不同，杂质的最大允许量由杂质对照液浓度与进样（或点样）体积的乘积 来表示，但若杂质对照液和样品供试液的点样（或进样）体积一致，则体积就不用考虑，直 接用对照液浓度表示。 ③ 在光谱分析中，一般需要通过计算获得杂质最大允许量。 百分吸收系数法：由方法规定的样品溶液在某一波长处的吸光度值（A）除以杂质纯品 在该波长处的百分吸收系数（E）值，而获得供试溶液中杂质的浓度（C=A/E）。 杂质对照品对照法：根据杂质对照溶液浓度（C对）与其吸光度值（A对），以及方法规 定的样品溶液在某一波长处的吸光度限量值（A样），采用单点对照法计算供试溶液中杂质的