动物肝脏中DNA的制备一、实验目的：1、学习并掌握用浓盐法从动物组织中的提取DNA方法及其原理。2、学习和掌握离心机使用方法。二、实验原理核酸的分类DNA(脱氧核糖核酸)主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA（cpDNA），质粒DNARNA（核糖核酸）存在于细胞质中，如mRNA,rRNA,tRNA等。除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。核酸的理化性质在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。DNA溶液粘度很大，RNA的粘度较小在强大离心力的作用下，可以从溶液中沉降下来步骤：破碎细胞：研磨、组织匀浆、超声、冻融；异硫氰酸胍、碱裂解；酶解（溶菌酶）除去其它不需要的核酸分子除去与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子：酚/氯仿抽提、蛋白变性剂（SDS、异硫氰酸胍等）、蛋白酶处理、高盐洗涤沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质动物肝脏中DNA的制备的方法：浓盐法：利用 RNA 和 DNA 在不同盐浓度溶液中的溶解度不同将二者分离。离子去污剂法：利用SDS、CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）等去污剂使蛋白质变性，直接从生物材料中提取DNA。苯酚抽提法：苯酚既是蛋白变性剂，又能抑制DNase 的降解。用苯酚处理匀浆
动物肝脏中 DNA 的制备 一、实验目的： 1、学习并掌握用浓盐法从动物组织中的提取 DNA 方法及其原理。 2、学习和掌握离心机使用方法。 二、实验原理 核酸的分类 DNA (脱氧核糖核酸) 主要存在于细胞核的染色体中。 核外也有少量 DNA，如线粒体 DNA（mtDNA），叶绿体 DNA（cpDNA），质粒 DNA。 RNA（核糖核酸） 存在于细胞质中，如 mRNA, rRNA, tRNA 等。 除上述 DNA，RNA 外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含 DNA， 或只含有 RNA。 核酸的理化性质 在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在 微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂 在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。 DNA 溶液粘度很大，RNA 的粘度较小 在强大离心力的作用下，可以从溶液中沉降下来 步骤： 破碎细胞：研磨、组织匀浆、超声、冻融；异硫氰酸胍、碱裂解；酶解（溶菌酶） 除去其它不需要的核酸分子 除去与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子：酚/氯仿抽提、蛋白变 性剂（SDS、异硫氰酸胍等）、蛋白酶处理、高盐洗涤 沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质 动物肝脏中 DNA 的制备的方法： 浓盐法：利用 RNA 和 DNA 在不同盐浓度溶液中的溶解度不同将二者分离。 离子去污剂法：利用 SDS、CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）等去污剂使蛋白质 变性，直接从生物材料中提取 DNA。 苯酚抽提法：苯酚既是蛋白变性剂，又能抑制 DNase 的降解。用苯酚处理匀浆
液时，由于蛋白与DNA连接键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。DNA-Pro(DNP)细胞核溶于高盐溶液（1mol/L),微溶于低盐溶液（0.14mol/L）RNA-Pro(RNP）核仁及细胞质，溶于低盐溶液（0.14mol/L），微溶于高盐溶液(1mol/L)核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质。用于核酸提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂。如：SDS、脱氧胆酸钠、4-氨基水杨酸钠、萘-1.5-二磺酸钠、异丙基萘磺酸钠去垢剂的作用：1.溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂；2．溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出来；3．对RNase、DNase有一定的抑制作用三实验步骤猪肝8g沉淀40ml的0.1Amel/L16ml的0.14mol/LNacl0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液勺浆21m1氯仿/异戊醇4m1 5% SDS离心，400/min,10min振荡30min（保鲜膜封口）加入3.6gNaC1固上清（弃掉）沉淀体，终浓度为1mol/L25m1缓冲液洗涤离心，3500r/min，20min离心，吸取上清（量取体积）400r/min，20min95%冷乙醇（缓慢加入）边加边朝一个方向缓慢搅动上清（弃掉）沉淀DNA粗制品
液时，由于蛋白与 DNA 连接键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚 相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而 DNA 溶于水相。 DNA-Pro(DNP) 细胞核 溶于高盐溶液（1mol/L）,微溶于低盐溶液（0.14mol/L） RNA-Pro(RNP) 核仁及细胞质，溶于低盐溶液（0.14mol/L），微溶于高盐溶液 （1mol/L） 核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质。用于核酸提取的去垢剂，一般都是 阴离子去垢剂。如：SDS、脱氧胆酸钠、4-氨基水杨酸钠、萘-1.5-二磺酸钠、三 异丙基萘磺酸钠 去垢剂的作用： 1．溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； 2．溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出来； 3．对 RNase、DNase 有一定的抑制作用。 三 实验步骤