酪蛋白的制备一、目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。3、熟练掌握离心技术和抽滤技术二、原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。离心技术是物质分离的一一个重要手段，它是利用物质在离心力的作用下，按其沉降系数不同而分离随着温度的升高，酪蛋白胶囊之间热碰撞频率增加，酪蛋白容易相互结合成块，但温度超过一定范围后，蛋白质的次级结构遭破坏，静电斥力增加，使酪蛋白结合变得困难而不易结块，导致酪蛋白得率下降，最适合温度为40℃蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH 溶液能够维持一个稳定的状态。但是调节自质溶液的DH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法三、材料、试剂与器具(一) 材料新鲜牛奶(一) 试剂1、95%乙醇1200mL2、无水乙醚1200mL3、0.2mol/LpH4.7 醋酸一—醋酸钠缓冲液300ml先配A液与B液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2054.44g，定容至2000ml。B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸醋酸钠缓冲液3000ml。4、乙醇-—乙醚混合液
酪蛋白的制备 一、目的 1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 3、熟练掌握离心技术和抽滤技术 二、原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为 35g/L。 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为 4.7。 利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的 pH 调至 4.7 时，酪蛋白就沉淀出来。 用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 离心技术是物质分离的一个重要手段，它是利用物质在离心力的作用下，按其沉降系数 不同而分离 随着温度的升高，酪蛋白胶囊之间 热碰撞频率增加，酪蛋白容易相互结合成块。 但温 度超过一定范围后，蛋白质的次级结构遭破坏，静电斥力增加，使酪蛋白 结合变得困难而不易结块，导致酪蛋白得率下降，最适合温度为 40℃ 蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。另外，蛋 白质又是一种两性离子，在一定 pH 溶液能够维持一个稳定的状态。但是调节蛋 白质溶液的 pH 值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加 脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。等电点沉淀法主 要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不 同等电点而进行分离的一种方法。 三、材料、试剂与器具 （一）材料 新鲜牛奶 （一）试剂 1、95%乙醇 1 200mL 2、无水乙醚 1 200mL 3、0.2mol/L pH4.7 醋酸——醋酸钠缓冲液 300ml 先配 A 液与 B 液 A 液：0.2mol/L 醋酸钠溶液 称 NaAC·3H2O 54.44g，定容至 2000ml。 B 液：0.2mol/L 醋酸溶液，称优 纯醋酸（含量大于 99.8%）12.0g 定容至 1000ml。 取 A 液 1770ml，B 液 1230ml 混合即得 Ph4.7 的醋酸——醋酸钠缓冲液 3000ml。 4、乙醇——乙醚混合液
乙醇：乙醚=1：1(V/V)（二)器具2、抽滤装置1、离心机3、精密 pH 试纸或酸度计4、电炉5、烧杯6、温度计四、操作步骤（一）酪蛋白的粗提20mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液20mL用精密pH 试纸或酸度计调 pH至 4.7.将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000r/min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。2、在沉淀中加入6mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇一乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。3、将沉淀摊开在表面上，风干：得酪蛋白纯品。（三）准确称重，计算含量和得率。含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）测得含量×100%得率产理论含量式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。五、注意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。最好用酸度计测定。2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机落剂，最好在通风稠内操作。3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。六、实验报告1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。2、合理分析实验所得率七、思考题1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？
乙醇：乙醚=1 ：1（V/V） （二）器具 1、离心机 2、抽滤装置 3、精密 pH 试纸或酸度计 4、 电炉 5、烧杯 6、温度计 四、操作步骤 （一）酪蛋白的粗提 20mL 牛奶加热至 40℃。在搅拌下慢慢加入预热至 40℃、pH4.7 的醋酸缓冲液 20mL. 用精密 pH 试纸或酸度计调 pH 至 4.7。 将上述悬浮液冷却至室温。离心 15 分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 （二）酪蛋白的纯化 1、用水洗涤沉淀 3 次，离心 10 分钟（3 000r/min），弃去上清液。 2、在沉淀中加入 6mL 乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇 —乙醚混合液洗沉淀 2 次。最后用乙醚洗沉淀 2 次，抽干。 3、将沉淀摊开在表面 上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白 g/100 mL 牛乳（g%） 100% 测得含量 得率:理论含量 式中理论含量为 3.5g/100mL 牛乳。 五、注意事项 1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。 最好用酸度计测定。 2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。 3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的 相应指标计算。 六、实验报告 1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。 2、合理分析实验所得率 七、思考题 1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？ 2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？