睡液淀粉酶的活性观察【实验目的】1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性。2.掌握酶定性分析和注意事项。【基本原理】酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，具催化率比一般催化剂高1010"3。在生物体内，过氧化氢酶能催化过氧化氢很快地分解成为H:O和02，使H202不致在体内大量积累。铁粉也是过氧化氢分解反应的催化剂，但其催化效率仅为过氧化氢的100亿分之一。酶的催化作用受到温度的影响。在一定的温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至最大值。由于酶是一种蛋白质，温度过高会导致酶的失活，因此，反应速度到达最高值以后，温度继续升高，酶促反应速度反而急剧下降直至完全停止酶促反应。反应速度达到最大值时的温度称为酶作用的最适温度。酶活性受环境pH值的影响。通常各种酶只有在一定的pH 值范围才表现出活力。酶活性达到最高的pH值，称为最适pH值。低于或者高于最适pH值时，酶的活性均降低或者失去活性。睡液淀粉酶的最适pH值为 6.8。酶活性受环境中某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为抑制剂。值得注意的是，激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。例如，0.9%的氯化钠是唾液淀粉酶的激活剂，但氯化钠达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活力。本实验以唾液淀粉酶为材料来观察环境因素对酶活性的影响情况。唾液中含有α-淀粉酶，该酶属于内切酶。淀粉在该酶的催化作用下或随着时间的延长而出现不同程度的水解产物，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等产物。而碘液能指示淀粉的水解程度，淀粉及淀粉不同程度的水解产物遇到碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，而麦芽糖遇碘液则不呈颜色反应。如图所示：淀粉酶淀粉酶淀粉紫色糊精一暗褐色糊精红色糊精一一麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色（碘本身颜色）
唾液淀粉酶的活性观察 【实验目的】 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性。 2.掌握酶定性分析和注意事项。 【基本原理】 酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，具催化率比一般催化剂高 106 ~1013。 在生物体内，过氧化氢酶能催化过氧化氢很快地分解成为 H2O 和 O2，使 H2O2不致 在体内大量积累。铁粉也是过氧化氢分解反应的催化剂，但其催化效率仅为过氧 化氢的 100 亿分之一。 酶的催化作用受到温度的影响。在一定的温度范围内，随着温度的升高，酶 促反应速度增加，直至最大值。由于酶是一种蛋白质，温度过高会导致酶的失活， 因此，反应速度到达最高值以后，温度继续升高，酶促反应速度反而急剧下降， 直至完全停止酶促反应。反应速度达到最大值时的温度称为酶作用的最适温度。 酶活性受环境 pH 值的影响。通常各种酶只有在一定的 pH 值范围才表现出活 力。酶活性达到最高的 pH 值，称为最适 pH 值。低于或者高于最适 pH 值时，酶 的活性均降低或者失去活性。唾液淀粉酶的最适 pH 值为 6.8。 酶活性受环境中某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂； 有些物质能使酶的活性降低，称为抑制剂。值得注意的是，激活剂和抑制剂不是 绝对的，有些物质在低浓度时为酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。 例如，0.9%的氯化钠是唾液淀粉酶的激活剂，但氯化钠达到 1/3 饱和度时就可抑 制唾液淀粉酶的活力。 本实验以唾液淀粉酶为材料来观察环境因素对酶活性的影响情况。唾液中含 有α-淀粉酶，该酶属于内切酶。淀粉在该酶的催化作用下或随着时间的延长而 出现不同程度的水解产物，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等产物。 而碘液能指示淀粉的水解程度，淀粉及淀粉不同程度的水解产物遇到碘可呈 蓝色、紫色、暗褐色和红色，而麦芽糖遇碘液则不呈颜色反应。如图所示： 淀粉酶 淀粉酶 淀粉 紫色糊精 暗褐色糊精 红色糊精 麦芽糖+少量葡萄糖 加碘后： 蓝色 紫红色 暗褐色 红棕色 黄色（碘本身颜色）
【实验试剂、材料和器材】（一）试剂（1）0.5%淀粉溶液：称取0.5g可溶性淀粉，加入少量蒸馏水调成糊状，然后缓慢倒入沸腾的60mL蒸馏水中，搅动煮沸1min。冷却至室温后加水至100mL，置冰箱中存放。（2）碘液：称取2g碘化钾溶于5mL蒸馏水中，随后加1.2g碘，待碘溶解后，加蒸馏水至200mL，混合均匀后保存于棕色瓶中，用前稀释5倍。（3）不同pH值溶液A液——0.2mo1/LNazHPO溶液：称取35.62gNazHPO·12H20，溶于蒸馏水后定容至1000mLB液——0.1mo1/L柠檬酸溶液：称取21.01g一水柠檬酸，溶于蒸馏水后定容至1000mL。①pH3.8缓冲液一一取A液71.0mL、B液129.0mL混合而成②pH6.8缓冲液—一取A液145.5mL、B液54.5mL混合而成③pH8.0缓冲液——取A液194.5mL、B液5.5mL混合而成。（4）1%（W/V）CuSO.溶液：称取无水硫酸铜1g（或者称取五水硫酸铜约1.5625g），溶解后用蒸馏水稀释至100mL。（5）0.9%（W/V）NaC1溶液：称取氯化钠0.9g，溶解后用蒸馏水稀释至100mL。(6)2% H.O.溶液。（7）铁粉（二）材料马铃薯（生的，熟的各一份）（三）仪器白比色板，恒温水浴箱，制冰机，电炉，电子天平，棕色试剂瓶，研钵，试管（30mL），刻度吸管（移液枪），烧杯，容量瓶，水果刀，计时表，一次性杯子等【操作步骤】
【实验试剂、材料和器材】 （一）试剂 （1）0.5%淀粉溶液： 称取 0.5g 可溶性淀粉，加入少量蒸馏水调成糊状，然后缓慢倒入沸腾的 60mL 蒸馏水中，搅动煮沸 1min。冷却至室温后加水至 100mL，置冰箱中存放。 （2）碘液： 称取 2g 碘化钾溶于 5mL 蒸馏水中，随后加 1.2g 碘，待碘溶解后，加蒸馏水至 200mL，混合均匀后保存于棕色瓶中，用前稀释 5 倍。 （3）不同 pH 值溶液 A 液——0.2mol/L Na2HPO4溶液：称取 35.62 gNa2HPO4·12H2O，溶于蒸馏水后定 容至 1000mL。 B 液——0.1 mol/L 柠檬酸溶液：称取 21.01g 一水柠檬酸，溶于蒸馏水后定容至 1000mL。 ①pH3.8 缓冲液——取 A 液 71.0mL、B 液 129.0mL 混合而成。 ②pH6.8 缓冲液——取 A 液 145.5mL、B 液 54.5mL 混合而成。 ③pH8.0 缓冲液——取 A 液 194.5mL、B 液 5.5mL 混合而成。 （4）1%（W/V）CuSO4溶液： 称取无水硫酸铜 1g（或者称取五水硫酸铜约 1.5625g），溶解后用蒸馏水稀释至 100mL。 （5）0.9%（W/V）NaCl 溶液： 称取氯化钠 0.9g，溶解后用蒸馏水稀释至 100mL。 （6）2% H2O2溶液。 （7）铁粉 （二）材料 马铃薯（生的，熟的各一份） （三）仪器 白比色板，恒温水浴箱，制冰机，电炉，电子天平，棕色试剂瓶，研钵，试管（30mL）， 刻度吸管（移液枪），烧杯，容量瓶，水果刀，计时表，一次性杯子等 【操作步骤】
（一）唾液淀粉酶的制备每人先用自来水水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净。然后用一次性杯子取蒸馏水约20mL含入口中，做咀嚼动作3~4分钟，以分泌较多的唾液。将口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中，此即为稀释的睡液淀粉酶液。（二）酶的高效性及环境因素对酶活性的影响1.pH对酶活力的影响取3只试管编号，按表1操作。表1 pH 值酶活力的影响mL2编号13pH=3.8 缓冲溶液33pH=6.8缓冲溶液-一-3pH=8.0缓冲溶液10.5%淀粉溶液11唾液淀粉酶111将上述各管溶液混匀后在37℃水浴中保温 5min每隔1min，从2号试管中取出1滴溶液置于白瓷板上，检查淀粉水解程度用碘液检查淀粉的水解程度，待溶液不再变色时，从水浴中取出所有试管向各管中均加碘液1°2滴，摇匀观察，记录并解释各管的现象取3只试管编号，按表2操作。2.温度对酶活性的影响表2温度对酶活力的影响编号123淀粉酶液(mL)0. 5 0. 5 0. 5 pH6.8的缓冲溶液（mL)1111110.5%淀粉溶液（mL）37反应温度（℃，10min）0100取出各试管冷水冷却I一向各管中均加碘液1~3滴，摇匀，观察，记录并解释各管的现象
（一）唾液淀粉酶的制备 每人先用自来水水漱口，将口腔内的食物残渣清除干净。然后用一次 性杯子取蒸馏水约 20mL 含入口中，做咀嚼动作 3~4 分钟，以分泌较多的唾 液。将口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中，此即为稀释的唾液淀粉酶液。 （二）酶的高效性及环境因素对酶活性的影响 1.pH 对酶活力的影响 取 3 只试管编号，按表 1 操作。 表 1 pH 值酶活力的影响 mL 编号 1 2 3 pH=3.8 缓冲溶液 3 — — pH=6.8 缓冲溶液 — 3 — pH=8.0 缓冲溶液 — — 3 0.5%淀粉溶液 1 1 1 唾液淀粉酶 1 1 1 将上述各管溶液混匀后在 37℃水浴中保温 5min 检查淀粉水解程度 每隔 1min，从 2 号试管中取出 1 滴溶液置于白瓷板上， 用碘液检查淀粉的水解程度，待溶液不再变色时，从水 浴中取出所有试管 向各管中均加碘液 1~2 滴，摇匀 观察，记录并解释各管的现象 2.温度对酶活性的影响 取 3 只试管编号，按表 2 操作。 表 2 温度对酶活力的影响 编号 1 2 3 淀粉酶液（mL） 0.5 0.5 0.5 pH6.8 的缓冲溶液（mL） 1 1 1 0.5%淀粉溶液（mL） 1 1 1 反应温度（℃，10min） 0 37 100 取出各试管 — — 冷水冷却 向各管中均加碘液 1~3 滴，摇匀, 观察，记录并解释各管的现象
3.酶的激活剂和抑制剂对酶活性影响取3只试管编号，按表3操作。表 3 酶的激活剂和抑制剂对酶活性的影响A编号231-0.9%NaC1溶液1一1%CuSO.溶液-1-1蒸馏水一0.5%淀粉溶液11111唾液淀粉酶液1将上述各管溶液混匀后在37℃水浴中保温检查淀粉水解程度每隔1min，从1号试管中取出1滴溶液置于白瓷板上，用碘液检查淀粉的水解程度，待溶液不再变色时，从水浴中取出所有试管向各管中均加碘液2滴，摇匀观察，记录并解释各管的现象3.酶的反应的特异性。取试管3支编号，按下表4操作表4睡液淀粉酶专一性的实验观察试剂试管pH6.8缓冲液淀粉溶液蔗糖溶液制备睡液煮沸睡液10滴5滴1I:2310 滴一5 滴20 滴10滴5滴将上述各管混匀后，置37℃水浴中保温10分钟，然后每管加入班氏试剂20滴再放入沸水浴中煮沸约15分钟，观察各管颜色反应，并说明原因
3.酶的激活剂和抑制剂对酶活性影响 取 3 只试管编号，按表 3 操作。 表 3 酶的激活剂和抑制剂对酶活性的影响 mL 编号 1 2 3 0.9%NaCl 溶液 1 — — 1%CuSO4溶液 — 1 — 蒸馏水 — — 1 0.5%淀粉溶液 1 1 1 唾液淀粉酶液 1 1 1 将上述各管溶液混匀后在 37℃水浴中保温 检查淀粉水解程度 每隔 1min，从 1 号试管中取出 1 滴溶液置于白瓷板上， 用碘液检查淀粉的水解程度，待溶液不再变色时，从水 浴中取出所有试管 向各管中均加碘液 2 滴，摇匀 观察，记录并解释各管的现象 3.酶的反应的特异性。 取试管 3 支编号，按下表 4 操作 表 4 唾液淀粉酶专一性的实验观察 试剂试管 pH6.8 缓冲液 淀粉溶液 蔗糖溶液 制备唾液 煮沸唾液 1 20 滴 10 滴 － 5 滴 － 2 20 滴 10 滴 － － 5 滴 3 20 滴 － 10 滴 5 滴 － 将上述各管混匀后，置 37℃水浴中保温 10 分钟，然后每管加入班氏试剂 20 滴， 再放入沸水浴中煮沸约 15 分钟，观察各管颜色反应，并说明原因