4实验步骤（1）样品处理吸取样品5ml，加水40ml，在水浴上加热15min除去CO2后，移入250ml容量瓶中，加水至刻度，混匀后备用。(2）标定碱性酒石酸铜溶液吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5.0ml，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管中滴加约9m葡萄糖标准溶液，置于电炉上加热，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直到溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积V1，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。(3）样品溶液预测吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5.0ml，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，在电炉上2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，等溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样品溶液消耗体积。（4）样品溶液测定吸取碱性酒石酸铜甲乙液各5.0ml于250ml锥形瓶中，加水10ml，加人玻璃珠两粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品溶液，使在2min内加热至沸，沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样品溶液消耗体积，平行测定三份，得出平均值消耗体积。5数据处理与计算样品中还原糖的含量（以葡萄糖计）按下式进行计算：AX=-V2x10V,X式中：250X：每百克试样中还原糖含量（以葡萄糖计)，g/100mL；A：碱性酒石酸铜甲、乙液各5.0ml相当于某种还原糖的质量，mg；Vi：样品的质量，mL；V2：测定时平均消耗样品溶液的体积，ml。19
19 4 实验步骤 (1) 样品处理 吸取样品 5 ml，加水 40 ml，在水浴上加热 15 min 除去 CO2 后，移入 250 ml 容量瓶中，加水至刻度，混匀后备用。 (2) 标定碱性酒石酸铜溶液 吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各 5.0 ml，置于 250 ml 锥形瓶中，加水 10 ml，加入 玻璃珠 2 粒，从滴定管中滴加约 9 mL 葡萄糖标准溶液，置于电炉上加热，控制 在 2 min 内加热至沸，趁沸以每两秒 1 滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直到 溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积 V1，同时平行操 作三份，取其平均值，计算每 l0 mL（甲、乙液各 5 mL）碱性酒石酸铜溶液相当 于葡萄糖的质量（mg）。 (3) 样品溶液预测 吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各 5.0 ml，置于 250 ml 锥形瓶中，加水 10 ml， 加入玻璃珠 2 粒，在电炉上 2 min 内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定 管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，等溶液颜色变浅时，以每两秒 1 滴的 速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样品溶液消耗体积。 (4) 样品溶液测定 吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各 5.0 ml 于 250 ml 锥形瓶中，加水 10 ml，加入 玻璃珠两粒，从滴定管滴加比预测体积少 1 ml 的样品溶液，使在 2min 内加热至 沸，趁沸继续以每两秒 1 滴的速度滴定直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样品 溶液消耗体积，平行测定三份，得出平均值消耗体积。 5 数据处理与计算 样品中还原糖的含量（以葡萄糖计）按下式进行计算： 10 250 V V A X 2 1 式中： X: 每百克试样中还原糖含量(以葡萄糖计)，g/100 mL； A：碱性酒石酸铜甲、乙液各 5.0 ml 相当于某种还原糖的质量，mg； V1：样品的质量，mL； V2：测定时平均消耗样品溶液的体积，ml
表5-1雪碧中还原糖含量的测定重复还原糖含消耗葡萄糖标准溶液的量葡萄糖测定时消耗样品溶液的量Vi次数(ml)的质量(ml)量平均(mg)平均12323三三6注意事项（1）碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别配制与贮存，用时才混合。(2）滴定必须在沸腾条件下进行，不能随意摇动锥形瓶，不能把锥形瓶从电炉上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。（3）严格控制滴定操作条件，碱性酒石酸铜溶液的标定、样品溶液预测及样品溶液的测定的操作条件应保持一致，包括溶液的用量、锥形瓶规格、电炉功率、滴定速度及终点的判断等都尽量一致。（4）样品溶液必须进行预测。要求每次滴定消耗的体积控制在与标定碱性就是酸铜溶液时所消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在10ml左右。当样品溶液中还原糖浓度过高时，应适当稀释，再进行正式测定。当浓度过低时则采取直接加入10ml样品液，免去加水10ml，再用还原糖标准溶液滴定至终点，记录消耗的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于10ml样液中所含还原糖的量。20
20 表 5-1 雪碧中还原糖含量的测定 重复 次数 消耗葡萄糖标准溶液的量 （ ml） 葡萄糖 的质量 （mg） 测定时消耗样品溶液的量 V1 （ml） 还原糖含 量 1 2 3 平均 1 2 3 平均 一 二 三 6 注意事项 (1) 碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别配制与贮存，用时才混合。 (2) 滴定必须在沸腾条件下进行，不能随意摇动锥形瓶，不能把锥形瓶从电炉上 取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。 (3) 严格控制滴定操作条件，碱性酒石酸铜溶液的标定、样品溶液预测及样品溶 液的测定的操作条件应保持一致，包括溶液的用量、锥形瓶规格、电炉功率、滴 定速度及终点的判断等都尽量一致。 (4) 样品溶液必须进行预测。要求每次滴定消耗的体积控制在与标定碱性就是酸 铜溶液时所消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在 10 ml 左右。当样品溶液中 还原糖浓度过高时，应适当稀释，再进行正式测定。当浓度过低时则采取直接加 入 10 ml 样品液，免去加水 10 ml，再用还原糖标准溶液滴定至终点，记录消耗 的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于 10 ml 样液中所含还原糖 的量
实验六果汁粉中维生素C的测定（2，6-二氯酚靛酚法）1实验目的(1）了解测定蔬菜和果汁中维生素C含量意义。(2）掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。（3）进一步掌握滴定法的基本操作技术。2实验原理维生素C（Vc)是人类营养中最重要维生素之一，最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，缺少它是会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbicacid)。食物中的维生素C被人体小肠上段吸收，一且吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素C代谢活性中约有1500mg维生素C，最高峰值为3000mg维生素C。当维生素C缺乏时，会患坏血病等一些疾病，严重缺乏甚至会造成死亡。人和一些高等动物与植物以及低等动物不同，不能自身合成维生素C，只能从食物中摄取。维生素C广泛分布在新鲜的水果和绿色蔬菜中，特别是枣、辣椒、柿子叶、苹果、猕猴桃、芹菜等果蔬中含量较多。果蔬中维生素C含量受果树种类、品种、栽培条件、成熟度和贮藏条件有关，因此，测定维生素C的含量，可以作为果蔬的营养品质和贮藏效果的评价之一。维生素C是已糖醛酸，属于水溶性维生素，纯品呈无色无臭的片状晶体，分子式为C6H80O6，摩尔质量为176.12g:mol-l，易溶于水，不溶于有机溶剂，在酸性环境中稳定，遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是由氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时，可促进其氧化破坏。氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型26-二氯酚靛酚无色。维生素C具有很强的还原性，能将染料2，6-二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶液中的维生素C全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2.6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中维生素C的含量。21
21 实验六 果汁粉中维生素 C 的测定 （2，6-二氯酚靛酚法） 1 实验目的 (1) 了解测定蔬菜和果汁中维生素 C 含量意义。 (2) 掌握 2，6-二氯酚靛酚法测定维生素 C 的原理和方法。 (3) 进一步掌握滴定法的基本操作技术。 2 实验原理 维生素 C (Vc)是人类营养中最重要维生素之一，最初于 1928 年从牛的肾上 腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，缺少它是会产生 坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。食物中的维生素 C 被人体小肠上 段吸收，一旦吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素 C 代谢活性中约有 1500 mg 维生素 C，最高峰值为 3000 mg 维生素 C。当维生素 C 缺乏时，会患坏血病等一些疾病，严重缺乏甚至会造成死亡。人和一些高等动 物与植物以及低等动物不同，不能自身合成维生素 C，只能从食物中摄取。维生 素 C 广泛分布在新鲜的水果和绿色蔬菜中，特别是枣、辣椒、柿子叶、苹果、猕 猴桃、芹菜等果蔬中含量较多。果蔬中维生素 C 含量受果树种类、品种、栽培条 件、成熟度和贮藏条件有关，因此，测定维生素 C 的含量，可以作为果蔬的营养 品质和贮藏效果的评价之一。 维生素 C 是己糖醛酸，属于水溶性维生素，纯品呈无色无臭的片状晶体，分 子式为 C6H8O6，摩尔质量为 176.12 g·mol-1，易溶于水，不溶于有机溶剂，在酸 性环境中稳定，遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是由氧化酶及痕量铜、铁 等金属离子存在时，可促进其氧化破坏。 氧化型 2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色， 还原型 2,6-二氯酚靛酚无色。维生素 C 具有很强的还原性，能将染料 2，6-二氯 酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。当用此染料滴定含 有维生素 C 的酸性溶液时，在维生素 C 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原 成无色；一旦溶液中的维生素 C 全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉 红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的 Vc 刚刚被氧化完全，从滴定时 2,6 一 二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中维生素 C 的含量
HOHOHHO-C-+白色HO-红色CH,OHCH,OHOHOH还原型维生素C2,6-二氯酚靛酚氧化脱氢维生素C2,6-二氯二对酚胺3实验仪器和试剂(1）实验仪器滴定管、容量瓶、烧杯(2）实验试剂2%草酸溶液：溶解20g草酸于200ml水中，然后稀释至1000ml。1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液500ml，用水稀释至1000m1。0.01000mol/L碘酸钾标准储备液：精密称取干燥的碘酸钾0.2140g，用蒸馏水溶解于100ml容量瓶中并定容至刻度（碘酸钾摩尔质量214.001g·moll）。0.0010mol/L碘酸钾标准应用液：取碘酸钾标准储备液10ml稀释至100ml。此液1.0ml相当于抗坏血酸0.528mg（抗坏血酸摩尔质量176.1gmol）1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉0.5g，加水1滴，搅拌成糊状以后倒人50ml沸水中，混匀，冷藏待用；6%碘酸钾溶液称取碘酸钾0.6g溶解于10ml蒸馏水中。临用前配制；抗坏血酸溶液称取纯抗坏血酸粉未20mg，用1%草酸溶解于100ml容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，冷藏保存；碳酸氢钠溶液称取碳酸氢钠40.2g，溶解在200ml沸水中；2,6-二氯酚靛酚称取2,6-二氯酚靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中，冷后放冰箱中，过夜，次日过滤在250ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，贮于棕色瓶中，冷藏保存。4.实验步骤(1)2，6-二氯酚靛酚溶液的标定抗坏血酸溶液的标定：抗坏血酸溶液5ml于锥形瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5ml，1%淀粉溶液3滴，再以0.001mol-L-碘酸钾标准溶液滴定，抗坏血酸具有强还原性，极容易被氧化，能把+5价的碘还原成I，反应完全后，稍过量的碘酸钾和碘离子发生歧化反应产生I2，终点为淡蓝色，即为终点。3C6H:O6+KI03C6H406+KI+3H20103+51+6H+→312+3H2022
22 3 实验仪器和试剂 (1) 实验仪器 滴定管、容量瓶、烧杯 (2) 实验试剂 2％草酸溶液：溶解 20 g 草酸于 200 ml 水中，然后稀释至 1000 ml。 1％草酸溶液：取上述 2％草酸溶液 500 ml，用水稀释至 1000 m1。 0.01000 mol/L 碘酸钾标准储备液：精密称取干燥的碘酸钾 0.2140 g，用蒸馏 水溶解于 100 ml 容量瓶中并定容至刻度（碘酸钾摩尔质量 214.001 gmol-1）。 0.0010mol/L 碘酸钾标准应用液：取碘酸钾标准储备液 10 ml 稀释至 100 ml。此 液 1.0 ml 相当于抗坏血酸 0.528 mg（抗坏血酸摩尔质量 176.1 gmol-1） 1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉 0.5 g，加水 1 滴，搅拌成糊状以后倒人 50 ml 沸水中，混匀，冷藏待用； 6%碘酸钾溶液 称取碘酸钾 0.6 g 溶解于 10 ml 蒸馏水中。临用前配制； 抗坏血酸溶液 称取纯抗坏血酸粉末 20 mg，用 1%草酸溶解于 100ml 容量瓶中 并稀释至刻度，摇匀，冷藏保存； 碳酸氢钠溶液 称取碳酸氢钠 40.2 g，溶解在 200 ml 沸水中； 2, 6-二氯酚靛酚 称取 2，6-二氯酚靛酚 50 mg 溶解在上述碳酸氢钠溶液中， 冷后放冰箱中，过夜，次日过滤在 250 ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇 匀，贮于棕色瓶中，冷藏保存。 4. 实验步骤 (1) 2，6-二氯酚靛酚溶液的标定 抗坏血酸溶液的标定：抗坏血酸溶液 5 ml 于锥形瓶中，加入 6％碘化钾溶液 0.5 ml，1％淀粉溶液 3 滴，再以 0.001 molL -1 碘酸钾标准溶液滴定，抗坏血酸具 有强还原性，极容易被氧化，能把+5 价的碘还原成 I -，反应完全后，稍过量的碘 酸钾和碘离子发生歧化反应产生 I2，终点为淡蓝色，即为终点。 3C6H8O6+KIO3→C6H4O6+KI+3H2O IO3 -+5I-+6H+→3I2+3H2O
计算如下：抗坏血酸浓度（mg/mL）=V×0.528VVi：滴定时所耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的量(mL)V2：所取抗坏血酸的量(mL）0.528：1mL0.001mol-L-碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量(mg.mL-)（抗坏血酸摩尔质量176.1gmoll）2，6-二氯靛酚溶液的标定：取5m1已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1%草酸溶液5ml，摇匀，用上述配制的染料溶液滴定至溶液呈粉红色于15秒不褪色，即为终点。每毫升染料溶液相当于Vc的毫克数=滴定度(T)：T-CXVV,式中：c；抗坏血酸(Vc)的浓度(mg/mL)Vi：抗坏血酸的体积(mL)V2：消耗染料溶液体积(mL)(2）样品的测定用移液管准确量取25ml水溶c100于250ml容量瓶内，加等量的2%草酸溶液，用1%草酸溶液稀释至刻度，摇匀。吸取上述溶液5mL于锥形瓶中，用以标定的2.6-二氯靛酚染料溶液滴定至溶液呈淡粉色，15s内不褪色为终点。用蒸馏水做空白滴定，如浓度过高，应适当稀释。5数据处理与计算计算：每100ml样品中抗坏血酸含量（mg）=（V-VTx10025.00×5.00250.0式中：Vi：滴定时所耗去染料溶液的量，mL；Vo：空白滴定时所用的染料量，ml；T：lmL染料溶液相当于抗坏血酸标准溶液的量，mg；23
23 计算如下： 2 1 V V 0.528 mg mL 抗坏血酸浓度（ / ） V1：滴定时所耗 0.001 mol/L 碘酸钾标准溶液的量(mL) V2：所取抗坏血酸的量(mL) 0.528：l mL 0.001 molL -1 碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量(mg·mL-1 ) （抗坏血酸摩尔质量 176.1 g·mol-1） 2，6-二氯靛酚溶液的标定：取 5 m1 已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入 1％ 草酸溶液 5 ml，摇匀，用上述配制的染料溶液滴定至溶液呈粉红色于 15 秒不褪 色，即为终点。 每毫升染料溶液相当于 Vc 的毫克数=滴定度(T)： 2 1 V c V T 式中： c；抗坏血酸(Vc)的浓度(mg/mL) Vl：抗坏血酸的体积(mL) V2：消耗染料溶液体积(mL) (2) 样品的测定 用移液管准确量取 25 ml 水溶 c100 于 250 ml 容量瓶内，加等量的 2％草酸 溶液，用 1％草酸溶液稀释至刻度，摇匀。 吸取上述溶液 5 mL 于锥形瓶中，用以标定的 2, 6-二氯靛酚染料溶液滴定至 溶液呈淡粉色， 15 s 内不褪色为终点。 用蒸馏水做空白滴定，如浓度过高，应适当稀释。 5 数据处理与计算 计算： 100 250.0 5.00 25.00 V - V T 100 ml mg 1 0 （ ） 每 样品中抗坏血酸含量（ ） 式中： V1：滴定时所耗去染料溶液的量，mL； V0：空白滴定时所用的染料量，ml； T：lmL 染料溶液相当于抗坏血酸标准溶液的量，mg；