3、凝胶中核酸的变性（碱变) 凝胶置于NaOH溶液中使DNA变性断裂为较短的 单链DNA,中性缓冲液中和凝胶中的缓冲液
凝胶置于NaOH溶液中使DNA变性断裂为较短的 单链 DNA,中性缓冲液中和凝胶中的缓冲液。 3、凝胶中核酸的变性（碱变）
4、杂交膜的制备 指将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相 支持物上的过程 ①常用的固相支持物 ②常用的转移方法
4、杂交膜的制备 指将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相 支持物上的过程. ①常用的固相支持物 ②常用的转移方法
①常用的固相支持物 1)硝酸纤维素滤膜(Nitrocellulose filter,NCF) 目前使用最广泛的一种支持物。 可与三类大分子的结合，其机理不清楚，可能为被动吸附。 优点： i.用于DNA,RNA杂交分析时结果可靠，灵敏，本底低。 ii.用于蛋白质分析时，容量大(80μg/cm2)；可直接染色； 分辨率高；不需要预激活；易于操作
1）硝酸纤维素滤膜（Nitrocellulose filter, NCF） 目前使用最广泛的一种支持物。 可与三类大分子的结合，其机理不清楚，可能为被动吸附。 优 点： i. 用于DNA，RNA杂交分析时结果可靠，灵敏，本底低。 ii. 用于蛋白质分析时，容量大（80μg/cm2)；可直接染色； 分辨率高；不需要预激活；易于操作 ①常用的固相支持物
硝酸纤维素膜缺点 第一、硝酸纤维素滤膜是依赖疏水性相互作用结合DNA的， 这种结合并不十分牢固，随着杂交及洗膜进程，DNA会慢 慢脱离硝酸纤维素滤膜，从而使杂交效率下降。 第二、硝酸纤维素滤膜质地较脆弱，容易碎裂，因此操作 须小心谨慎（特别是经烘烤后）。 第三、硝酸纤维素滤膜与核酸的结合有赖于高盐浓度，在 低盐浓度时结合DNA效果不佳，不适宜于电转印迹法。 第四、硝酸纤维素滤膜对于小分子量的DNA片段（特别是 小于200bp的DNA片段)结合能力不强
硝酸纤维素膜缺点 第一、硝酸纤维素滤膜是依赖疏水性相互作用结合DNA的， 这种结合并不十分牢固，随着杂交及洗膜进程，DNA会慢 慢脱离硝酸纤维素滤膜，从而使杂交效率下降。 第二、硝酸纤维素滤膜质地较脆弱，容易碎裂，因此操作 须小心谨慎 (特别是经烘烤后)。 第三、硝酸纤维素滤膜与核酸的结合有赖于高盐浓度，在 低盐浓度时结合DNA效果不佳，不适宜于电转印迹法。 第四、硝酸纤维素滤膜对于小分子量的DNA片段 (特别是 小于200bp的DNA片段)结合能力不强
2) 尼龙膜 尼龙膜的优点： ■结合DNA和RNA的能力强于硝酸纤维素滤膜，对小分 子质量的核酸也能较好地结合。 ■尼龙膜韧性强，操作较方便，对离子浓度要求不高，可 重复用于杂交。 尼龙膜的缺点： ■杂交信号本底较硝酸纤维素滤膜高
2) 尼龙膜 尼龙膜的优点： ▪ 结合DNA和RNA的能力强于硝酸纤维素滤膜，对小分 子质量的核酸也能较好地结合。 ▪ 尼龙膜韧性强，操作较方便，对离子浓度要求不高，可 重复用于杂交。 尼龙膜的缺点： ▪ 杂交信号本底较硝酸纤维素滤膜高