(一)、基本原理 DNA复性动力学基本原理设计 在一定条件下发生变性的DNA分子，恢复条件后又能通过 碱基互补配对的方式重新结合形成双链DNA分子。 Optical density 1.5 1.4 1.3 两条链分开 1.2 1.1 30 50 70 Tm9095100110[c]
DNA复性动力学基本原理设计 在一定条件下发生变性的DNA分子，恢复条件后又能通过 碱基互补配对的方式重新结合形成双链DNA分子。 （一）、基本原理
single-strandod DNA probes mixture of single-stranded ONA molecules hybridization in hybridization in 50%formamide 50%formamide 就42℃ at35℃ only A forms stable A.C.and E all form double helix stable double helices STRINGENT REDUCED-STRINGENCY HYBRIDIZATION HYBRIDIZATION
(二)、基本步骤 和奏 1、待测核酸样品的制备 ①裂解或破碎细胞 ②抽取纯化基因组DNA ③限制酶消化DNA为大小不同的DNA片段 限制性酶必须选择在探针分子中没有识别位点的酶才 能真实体现目的基因在基因组的分布水平
（二）、基本步骤 1、待测核酸样品的制备 ①裂解或破碎细胞 ②抽取纯化基因组DNA ③限制酶消化DNA为大小不同的DNA片段 限制性酶必须选择在探针分子中没有识别位点的酶才 能真实体现目的基因在基因组的分布水平
稻奏 切点位于探针外 单拷贝 切点位于探针内 两拷贝
A 单拷贝 两拷贝 切点位于探针外 切点位于探针内
2、待测DNA样品的电泳分离 ①琼脂糖浓度：分离大片段用低浓度胶 分离小片段用高浓度胶 ②凝胶电泳： 凝胶具有分子筛效应，大分子 DNA泳动慢，小分子DNA泳动快， 大小相同的分子处于同一条带 ③分子量标准：经HindⅢ消化的λDNA,杂交 所用分子量标准可用同位素标记
①琼脂糖浓度：分离大片段用低浓度胶 分离小片段用高浓度胶 ②凝胶电泳： 凝胶具有分子筛效应,大分子 DNA泳动慢,小分子DNA泳动快， 大小相同的分子处于同一条带 ③分子量标准：经HindⅢ消化的λDNA，杂交 所用分子量标准可用同位素标记 2、待测DNA样品的电泳分离