基因工程原理各知识点复习思考题 基因工程概论 1简述基因克隆的两个基本特征？ 基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子（一般情况下都是DNA)在不同宿主中的繁殖，打破自 然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重 要特征是繁殖。 2.谈谈你对gcne的认识，并荷要说说gene概念的发展情况？ 参考答案：能够表达和产生基因产物(Proteinor RNA)的DNA序列（可自由发挥，发展情况请查找相关 资料)基因概念的发展：基因作为遗传学中的专用术语，其概念每发展一步都意味着速传学乃至整个生物 学的一次革命和突破，其内容的每次丰富和充实都凝聚着生物学家们的滴滴心血。“基因”概念的提出：遗 传学的莫基人孟德尔在1866年发表的论文《植物杂交试验》指出生物每一个性状都是通过遗传因子来传递 的，遗传因子是一些独立的遗传单位，这样把可观察的遗传性状和控制它的内在的遗传因子区分开来了， 速传因子作为基因的雏形名词诞生了1909年丹麦速传学家约逊在《精密速传学原理》一书中提出“基 因概念，以此来替代孟德尔假定的“遗传因子”。从此，能够表达和产生基因产物(protein or RNA)的DNA序 列（可自由发挥）“基因”一词一直伴随着遗传学发展至今。基因结构和功能的探索：摩尔根和他的学生们 利用果蝇作了大量的潜心研究，1926年他的巨著《基因论》出版，从而建立了著名的基因学说，首次完成 了当时最新的基因概念的描述，即基因以直线形式排列，它决定着一个特定的性状，而且能发生突变并随 着染色体同源节段的互换面交换，它不仅是决定性状的功能单位，而且是一个突变单位和交换单位。1941年 比德尔和塔特姆提出一个基因一个酶说：1949年鲍林与合作者在研究镰刀型细胞贫血症时推论基因决定着 多肽链的氨基酸顺序：1944年艾弗里、麦卡蒂首次用实验明确证实：DNA是遗传信息的载体：1952年赫 尔希和蔡斯进一步证明遗传物质是DNA而不是蛋白质：1953年美国分子生物学家沃森和英因分子生物学 家克里克通力协作，根据X射线衍射分析，提出了著名的D小A双螺旋结构模型，进一步说明基因成分就 是DA,它控制着蛋白质的合成：1957年法国遗传学家本滋尔以T4噬菌体作为研究材料分析了基因内 部的精细结构，提出了顺反子学说。这个学说打破了过去关于基因是突变、重组、决定遗传性状的“三位 体”概念及基因是最小的不可分割的遗传单位的观点，从面认为基因为DNA分子上一段核苷酸序列，负责 着遗传信息的传递，一个基因内部仍可划分为若干个起作用的小单位，即可区分成顺反子、突变子和重组 子。一个作用子通常决定一种多肽链合成，一个基因包含一个或几个作用子。突变子指基因内突变的最小 单位，而重组子为最小的重组合单位，只包含一对核首酸。所有这些均是基因概念的伟大突破。关于基因 的本顺确定后，人们又把研究视线转移到基因传递遗传信息的过程上。1961年开始，尼伦伯格和科拉纳等 人逐步搞清了基因以核苷酸三联为一组编码氢基酸，并在1967年破译了全部64个遗传密码，这样把核酸 密码和蛋白质合成联系起来。然后，沃森和克里克等人提出的中心法测更加明确地揭示了生命活动的基 本过程。1970年特明以在劳斯肉瘤病毒内发现逆转录酶这一成就进步发展和完善了“中心法购，至此，速 传信息传递的过程已较清晰地展示在人们的眼酶，过去人们对基因的功能理解是单一的即作为蛋白质合成 的模板。1961年法国雅各布和莫诺的研究成果，又大大扩大了人们关于基因功能的税野。他们在研究大肠 杆菌乳糖代谢的调节机制中发现了有些基因不起合成蛋白质模板作用，只起调节或操纵作用，提出了操纵
基因工程原理各知识点复习思考题 基因工程概论 1.简述基因克隆的两个基本特征？ 基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子（一般情况下都是 DNA）在不同宿主中的繁殖，打破自 然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重 要特征是繁殖。 2.谈谈你对 gene 的认识，并简要说说 gene 概念的发展情况？ 参考答案： 能够表达和产生基因产物（Proteinor RNA）的 DNA 序列（可自由发挥，发展情况请查找相关 资料）基因概念的发展：基因作为遗传学中的专用术语，其概念每发展一步都意味着遗传学乃至整个生物 学的一次革命和突破，其内容的每次丰富和充实都凝聚着生物学家们的滴滴心血。“基因”概念的提出：遗 传学的奠基人孟德尔在 1866 年发表的论文《植物杂交试验》指出生物每一个性状都是通过遗传因子来传递 的，遗传因子是一些独立的遗传单位。这样把可观察的遗传性状和控制它的内在的遗传因子区分开来了， 遗传因子作为基因的雏形名词诞生了。 1909 年丹麦遗传学家约翰逊在《精密遗传学原理》一书中提出“基 因”概念，以此来替代孟德尔假定的“遗传因子”。从此，能够表达和产生基因产物（protein or RNA）的 DNA 序 列（可自由发挥） “基因”一词一直伴随着遗传学发展至今。基因结构和功能的探索：摩尔根和他的学生们 利用果蝇作了大量的潜心研究， 1926 年他的巨著《基因论》出版，从而建立了著名的基因学说，首次完成 了当时最新的基因概念的描述，即基因以直线形式排列，它决定着一个特定的性状，而且能发生突变并随 着染色体同源节段的互换而交换，它不仅是决定性状的功能单位，而且是一个突变单位和交换单位。1941 年 比德尔和塔特姆提出一个基因一个酶说；1949 年鲍林与合作者在研究镰刀型细胞贫血症时推论基因决定着 多肽链的氨基酸顺序； 1944 年艾弗里、麦卡蒂首次用实验明确证实： DNA 是遗传信息的载体； 1952 年赫 尔希和蔡斯进一步证明遗传物质是 DNA 而不是蛋白质； 1953 年美国分子生物学家沃森和英国分子生物学 家克里克通力协作，根据 X 射线衍射分析，提出了著名的 DNA 双螺旋结构模型，进一步说明基因成分就 是 DNA ，它控制着蛋白质的合成； 1957 年法国遗传学家本滋尔以 T4 噬菌体作为研究材料分析了基因内 部的精细结构，提出了顺反子学说。这个学说打破了过去关于基因是突变、重组、决定遗传性状的“三位一 体”概念及基因是最小的不可分割的遗传单位的观点，从而认为基因为 DNA 分子上一段核苷酸序列，负责 着遗传信息的传递，一个基因内部仍可划分为若干个起作用的小单位，即可区分成顺反子、突变子和重组 子。一个作用子通常决定一种多肽链合成，一个基因包含一个或几个作用子。突变子指基因内突变的最小 单位，而重组子为最小的重组合单位，只包含一对核苷酸。所有这些均是基因概念的伟大突破。关于基因 的本质确定后，人们又把研究视线转移到基因传递遗传信息的过程上。 1961 年开始，尼伦伯格和科拉纳等 人逐步搞清了基因以核苷酸三联为一组编码氨基酸，并在 1967 年破译了全部 64 个遗传密码，这样把核酸 密码和蛋白质合成联系起来。然后，沃森和克里克等人提出的“中心法则”更加明确地揭示了生命活动的基 本过程。 1970 年特明以在劳斯肉瘤病毒内发现逆转录酶这一成就进步发展和完善了“中心法则”，至此，遗 传信息传递的过程已较清晰地展示在人们的眼前。过去人们对基因的功能理解是单一的即作为蛋白质合成 的模板。 1961 年法国雅各布和莫诺的研究成果，又大大扩大了人们关于基因功能的视野。他们在研究大肠 杆菌乳糖代谢的调节机制中发现了有些基因不起合成蛋白质模板作用，只起调节或操纵作用，提出了操纵
子学说。从此根据基因功能把基因分为结构基因、调节基因和操纵基因.。基因概念的进一步发展：0年代 后，基因的概念随着多学科渗透和实验手段日新月异又有突飞猛进的发展，主要有以下几个方面。基因具 重叠性、内含子和外显子、管家基因与奢侈基因和基因的游动性，所有这些成果无疑给基因概念中注入鲜 活科学的内容，帮助人们揭开层层面纱去更加全面了解基因的真面目。时代在发展，科学在进步，基因概 念的深入发展，必将对人类的文明进步产生强大的推动作用 3.如何理解gcne及其产物的共线性和非共线性？ 基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。当一个基因的核苷酸序列与产物的 氨基酸序列是一一对应时，则表明它们是共线性的。在原核生物中，基因及其产物是共线性的。70年代以 来，在真核生物中，发现了间断基因，后来发现这种间断基因在真核生物中普着存在，也就是后来所说的 基因间存在着内含子。内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的DA片断，但可被转求，当两侧序 列的转录RNA被剪接在一起时，就将内含子转录的RNA从整个转录物中除去。外显子是指能够翻译成蛋 白质的任一间断的基因片段，一个基因可有多个外显子。内含子并不是一成不变的，具有相对性，对 个DNA片断来说，在某个基因中是内含子，但在另一个基因中却可以作为外显子. 4.什么是gene cloning?什么是亚克隆(subcloning)? 基因克隆：一定程度上等同于基因的分离，即从复条的生物体基因组中，经过南切，消化等步骤，分离带 有目的基因的DNA片段。基因亚克隆：初步克隆中的外源片段往往较长，含有许多目的基因片段以外 的DNA片段，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所对应的一小 段DNA找出来，这个过程叫亚克隆”， 5.假如从一个原核生物中cloning某基因(1-2kb),请谈谈它的基本步骤？ ①对原核生物染色体DNA进行不完全酶切，纯化所得到的DNA片断，并与载体连接，转化大肠杆菌：② 得到转化子后，根据目标基因两侧的已知序列设计探针，杂交，筛选转化子：®所得到的转化子中含有目 标基因，进一步作亚克隆，一步步地向目标基因通近，最后可得到目标基因 6.什么叫基因工程(Gene Engineering),试从理论和技术两个方面谈谈Gene Engineering廷 生的基础？ 基因工程(Gene Engineer ing)又称基因操作(Gene Manipulation)、重组DNA。基因工程是以分子遗传学 理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(D小NΛ分子)，按预先设计 的监图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原先的遗传特性，获得新品种，生产新 产品，或是研究基因的结构和功能。 7.简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。 8.为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？ 基因概念的提出和基因与DNA关系的建立为基因重组打下了物质基础。 DNA结构的阐明和DNA在生命活动中的作用的认识，为基因操作打下了理论基础。 基因操作技术的发展则直接导致基因工程的诞生和发展
子学说。从此根据基因功能把基因分为结构基因、调节基因和操纵基因。基因概念的进一步发展： 70 年代 后，基因的概念随着多学科渗透和实验手段日新月异又有突飞猛进的发展，主要有以下几个方面。基因具 重叠性、内含子和外显子、管家基因与奢侈基因和基因的游动性。所有这些成果无疑给基因概念中注入鲜 活科学的内容，帮助人们揭开层层面纱去更加全面了解基因的真面目。时代在发展，科学在进步，基因概 念的深入发展，必将对人类的文明进步产生强大的推动作用。 3.如何理解 gene 及其产物的共线性和非共线性？ 基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。当一个基因的核苷酸序列与其产物的 氨基酸序列是一一对应时，则表明它们是共线性的。在原核生物中，基因及其产物是共线性的。 70 年代以 来，在真核生物中，发现了间断基因，后来发现这种间断基因在真核生物中普遍存在，也就是后来所说的 基因间存在着内含子。内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的 DNA 片断，但可被转录，当两侧序 列的转录 RNA 被剪接在一起时，就将内含子转录的 RNA 从整个转录物中除去。外显子是指能够翻译成蛋 白质的任一间断的基因片段，一个基因可有多个外显子。内含子并不是一成不变的，具有相对性，对一 个 DNA片断来说，在某个基因中是内含子，但在另一个基因中却可以作为外显子。 4.什么是 gene cloning ？什么是亚克隆（subcloning）？ 基因克隆：一定程度上等同于基因的分离，即从复杂的生物体基因组中，经过酶切，消化等步骤，分离带 有目的基因的 DNA 片段。基因亚克隆：初步克隆中的外源片段往往较长，含有许多目的基因片段以外 的 DNA 片段，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所对应的一小 段 DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。 5.假如从一个原核生物中 cloning 某基因（1-2kb），请谈谈它的基本步骤？ ①对原核生物染色体 DNA 进行不完全酶切，纯化所得到的 DNA 片断，并与载体连接，转化大肠杆菌；② 得到转化子后，根据目标基因两侧的已知序列设计探针，杂交，筛选转化子；③所得到的转化子中含有目 标基因，进一步作亚克隆，一步步地向目标基因逼近，最后可得到目标基因 6.什么叫基因工程（Gene Engineering），试从理论和技术两个方面谈谈 Gene Engineering 诞 生的基础？ 基因工程（Gene Engineering ）又称基因操作（Gene Manipulation）、重组 DNA 。基因工程是以分子遗传学 理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因（DNA 分子），按预先设计 的蓝图，在体外构建杂种 DNA 分子，然后导入活细胞，以改变生物原先的遗传特性，获得新品种，生产新 产品，或是研究基因的结构和功能。 7.简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。 8.为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？ 基因概念的提出和基因与 DNA 关系的建立为基因重组打下了物质基础。 DNA 结构的阐明和 DNA 在生命活动中的作用的认识，为基因操作打下了理论基础。 基因操作技术的发展则直接导致基因工程的诞生和发展
9.简述基因的结构组成对基因操作的影响。 工具酶 一、解释下列名词 1.Restriction and modification 20世纪50年代初，发现细菌具有host controlled specificity。元噬南体具有代表性和普遍性， 其在不同宿主中的转染频率不同，当入在感染某一宿主后，再去感染其它宿主时受到限制， 其感染频率大大减低，这种现象称为限制与修饰现象。 2.Matched ends 匹配末端。识别位点为回文对称结构的序列，经限制南切制后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端， 亦即粘性未端()。 3.Blunt ends 平末端。在回文对称袖上同时切制DNA的两条链，产生的没有碱基突出的末端称为平末端。 4.Isoschizomer 可裂酵。识别相同序列的限制酶称同裂酵，但它们的切制位点可能不问， 5.Isocaudiners 同尾酶。来源不同、识别序列不同，·但产生相同粘性末端的酶。 6.Site preferences 位点偏爱。某些限制酶对同一介质中的不同位置的同一个识别序列表现出不同的切制效率的现象称为位点偏 爱 7.Star activity 星星活性。在极端非标准条件下，限制酶能切制与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活 8.Nicking enzyme 切口酶。有些限制只切制双链DNA中的一条链，产生单链缺口，这种称为切口酶 9.Klenow fragment Klenow片段，Klenow DNA聚合酯是吵merase经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除 去5了3外切活性的多肚大片段，而聚合活性和35外切活性不受影响。 10.Reverse transcriptase
9.简述基因的结构组成对基因操作的影响。 工具酶 一、解释下列名词 1. Restriction and modification 20 世纪 50 年代初，发现细菌具有 host controlled specificity。 噬菌体具有代表性和普遍性， 其在不同宿主中的转染频率不同，当 在感染某一宿主后，再去感染其它宿主时受到限制， 其感染频率大大减低，这种现象称为限制与修饰现象。 2. Matched ends 匹配末端。识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端， 亦即粘性末端（cohesive end）。 3. Blunt ends 平末端。在回文对称轴上同时切割 DNA的两条链，产生的没有碱基突出的末端称为平末端。 4. Isoschizomer 同裂酶。识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同。 5. Isocaudiners 同尾酶。来源不同、识别序列不同，• 但产生相同粘性末端的酶。 6. Site preferences 位点偏爱。某些限制酶对同一介质中的不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象称为位点偏 爱。 7. Star activity 星星活性。在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活 8. Nicking enzyme 切口酶。 有些限制酶只切割双链 DNA中的一条链，产生单链缺口，这种酶称为切口酶。 9. Klenow fragment Klenow 片段。Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除 去 5'-3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3'-5' 外切活性不受影响。 10. Reverse transcriptase
反转录希.即依赖于RNA的DNA聚合酶，它有-3合成DNA活性，但是无3-S外切活性.它来自AMV(离 成随细胞箱病毒)或Mo-MLV(Moloney鼠白血病病毒，又称M-MuLV)。 11.Terminal transferase 术端转移酶。来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的D八Λ聚合 酶，在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加于DNA分子的3羟基端。若dNTP为T或C,此二价 阳离子首选钻离子：若dNTP为A或G,此二价阳离子首选镁离子. 12.T4 polynucleotide kinase T4多核苷酸激。催化ATP的r晓酸基转移至DNA或RNA的末端， 13.Alkaline phosphatase 碱性磷酸酶。主要来源于牛小肠(Calfinestnalkae phosphatase),简称CIP或CIP,也有来自细菌(BAP)。 催化除去DNA或RNA3磷酸. 14.S1 nuclease S核酸酶，来源于米曲霉(Aspergillus),可降解单链DNA或RNA,产生带了酸的单核苷酸或寡核 苷酸双链：对d由DNA,dsRNA,DNA:RNA杂交体不敏感. 外切核酸酶Ⅲ.来源于大肠杆菌，催化从dsDNA3OH逐一去除单核苷酸的反应，底物为dsDNA或线状和 带切口或缺口的环状DNA,反应结果是在dsDNA上产生长的单链区。 二、填空题 1.Ecok的一般分子组成为R2M2S,在这些亚基中，R亚基具有()的作 用，M亚基具有()的作用，S亚基具有()的作用，当该该酶发生作用时， 需用到的辅因子有：（)、()、()。限制酶：甲基化：识别DNA序列：ATP:SAM: 2.限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease)的命名是按属名和种名相结合的原则的， 通常第一个大写字母取自()，第二、三个字母取自()，第四个字母则用()表示。 属名的第一个字母：种名的前两个字母：菌株名 3.Ⅱ型限制酶识别回文对称序列，在回文序列()或()切割DNA,产生带3一OH 和了一P基团的DNA的产物，需()的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只 需SAM。 内部：附近：Mg2+ 4.从因特网上可以找到限制酶的数据库()，该网站由New England Biolabs公司维 护(http://www.neb.com）。 REBASE
反转录酶。即依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，它有 5'-3' 合成 DNA 活性，但是无 3'-5' 外切活性。它来自 AMV（禽 成髓细胞瘤病毒）或 Mo-MLV （Moloney 鼠白血病病毒，又称 M-MuLV）。 11. Terminal transferase 末端转移酶。来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的 DNA 聚合 酶，在二价阳离子存在下，末端转移酶催化 dNTP 加于 DNA 分子的 3' 羟基端。若 dNTP 为 T 或 C ，此二价 阳离子首选钴离子；若 dNTP 为 A 或 G，此二价阳离子首选镁离子。 12. T4 polynucleotide kinase T4 多核苷酸激酶。催化 ATP 的 γ-磷酸基转移至 DNA或 RNA 的 5' 末端。 13. Alkaline phosphatase 碱性磷酸酶。主要来源于牛小肠（Calf intestinal alkaline phosphatase），简称 CIP 或 CIAP，也有来自细菌（BAP）。 催化除去 DNA或 RNA 5' 磷酸。 14. S1 nuclease Sl 核酸酶。来源于米曲霉（Aspergillus oryzae），可降解单链 DNA 或 RNA ，产生带 5' 磷酸的单核苷酸或寡核 苷酸双链；对 dsDNA，dsRNA， DNA:RNA杂交体不敏感。 15. ExonuleaseЩ 外切核酸酶 Щ。来源于大肠杆菌，催化从 dsDNA 3'-OH 逐一去除单核苷酸的反应，底物为 dsDNA 或线状和 带切口或缺口的环状 DNA，反应结果是在 dsDNA上产生长的单链区。 二、填空题 1. Ecok 的一般分子组成为 R2M2S ，在这些亚基中， R 亚基具有（）的作 用， M 亚基具有（）的作用， S 亚基具有（）的作用，当该该酶发生作用时， 需用到的辅因子有：（）、（）、（）。 限制酶；甲基化；识别 DNA 序列；ATP；SAM； Mg2+ 2. 限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的命名是按属名和种名相结合的原则的， 通常第一个大写字母取自（），第二、三个字母取自（），第四个字母则用（）表示。 属名的第一个字母；种名的前两个字母；菌株名 3. Ⅱ型限制酶识别回文对称序列，在回文序列（）或（）切割 DNA ，产生带 3'－OH 和 5'－P 基团的 DNA 的产物，需（）的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只 需 SAM 。 内部；附近；Mg2＋ 4. 从因特网上可以找到限制酶的数据库（），该网站由 New England Biolabs 公司维 护（http://www.neb.com）。 REBASE
5。识别相同序列的限制酶称()同裂南 6.有些限制酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链缺口，即()切口酶 7,个体间DNA限制性片段长度的差异叫()限制性片段长度多态性(RFLP) 8.DNA载体经Hind切割后产生粘性末端，能发生载体自连，影响载体与外 源DNA的连接效率，常用的防止载体自连的方法有()、()。去磷酸化：部分补平 9.完全的回文序列应具备的特点即()和()。能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称 互补配对：两条互补链的3的序列组成相同，即将一条链旋转180°，则两条链重叠 10.Dcm Methylase(Dcm甲基化酶)的识别序列为()和()，该酶的作用位点为()。 CCTGG:CCAGG:第二个胞嘧啶C的C5位置 Il.分别写出以下限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease)的识别序列EcoR I()、 Sau3AI()、Hind()。GAATIC:GATC:AAGCTT 12.限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease)通常保存在()浓度的甘油溶液中。s0% 13.载体和外源DNA经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶 (Restriction endonuclease)的影响。常用的方法有()、()、()、()。EDTA法： 加热法：苯酚抽提法：试剂盒除酶法 14.对DNA进行双爾切时，醇切缓冲液的选择原则有(1)()、(2)()、(3)() 可选用都合适的缓冲液或通用缓冲液：若缓冲液不可替代则先用低浓度的，再加适量NCI和第二种酶： 先用低盐缓冲液再用高盐缓冲液 15.Dnase I为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切效果，当Mg2+存 在时()当M2+存在时()。独立作用于每条DNA链，且切割位点随机：可在两条链 的大致同一位置切制dsDNA,产生平端或I到2个核甘酸突出的DNA片断 16.Klenow DNA聚合酵是E.coli DNA polymerase经蛋白酶裂解而从全中除去 ()活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。53的外切活性 17.E.coli DNA连接酶与T4DNA连接酶相似，但需()的参与，且其平端连接效 率低常用于置换合成法。烟酰胺一腺攀吟二核苷酸(NAD十) 18.用于构建嵌套缺失体常用到的核酸酶有()、()、()。DnaseI:外切核酸酶Ⅲ：BAL31 19.琼脂糖酶作用于低熔点琼脂糖，它的活性是可切割琼脂糖酶亚单位。由于此酶可分解球 脂糖，因此应用于()。分离大片段DNA 三、选择题：从备选答案中选出正确的结果，正确答案是唯一的。 1.限制性内切酶一般保存在()浓度的甘油溶液中。C50% A.10%B.20%C.50%D.60%
5. 识别相同序列的限制酶称（） 同裂酶 6. 有些限制酶只切割双链 DNA 中的一条链，产生单链缺口，即（） 切口酶 7. 个体间 DNA 限制性片段长度的差异叫（） 限制性片段长度多态性（RFLP） 8. DNA 载体经 HindⅢ 切割后产生粘性末端，能发生载体自连，影响载体与外 源 DNA 的连接效率，常用的防止载体自连的方法有（）、（）。去磷酸化；部分补平 9. 完全的回文序列应具备的特点即（）和（）。能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称 互补配对；两条互补链的 5'-3' 的序列组成相同，即将一条链旋转 180°，则两条链重叠 10. Dcm Methylase（Dcm 甲基化酶）的识别序列为（）和（），该酶的作用位点为（）。 CCTGG；CCAGG；第二个胞嘧啶 C 的 C5 位置 11. 分别写出以下限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的识别序列 EcoRⅠ（）、 Sau3AⅠ（）、HindⅢ（）。GAATTC；GATC；AAGCTT 12. 限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）通常保存在（）浓度的甘油溶液中。50% 13. 载体和外源 DNA 经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶 （Restriction endonuclease）的影响。常用的方法有（）、（）、（）、（）。EDTA 法； 加热法；苯酚抽提法；试剂盒除酶法 14. 对 DNA 进行双酶切时，酶切缓冲液的选择原则有(1) （）、(2) （）、(3) （） 可选用都合适的缓冲液或通用缓冲液；若缓冲液不可替代则先用低浓度的，再加适量 NaCl 和第二种酶； 先用低盐缓冲液再用高盐缓冲液 15. DnaseⅠ为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切效果，当 Mg2+ 存 在时（）；当 Mn2+ 存在时（）。独立作用于每条 DNA 链，且切割位点随机；可在两条链 的大致同一位置切割 dsDNA，产生平端或 1 到 2 个核甘酸突出的 DNA 片断 16. Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶裂解而从全酶中除去 （）活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。5'-3' 的外切活性 17. E.coli DNA 连接酶与 T4 DNA 连接酶相似，但需（）的参与，且其平端连接效 率低常用于置换合成法。烟酰胺－腺嘌呤二核苷酸（NAD＋） 18. 用于构建嵌套缺失体常用到的核酸酶有（）、（）、（）。DnaseⅠ；外切核酸酶Ⅲ；BAL31 19. 琼脂糖酶作用于低熔点琼脂糖，它的活性是可切割琼脂糖酶亚单位。由于此酶可分解琼 脂糖，因此应用于（）。分离大片段 DNA 三、选择题：从备选答案中选出正确的结果，正确答案是唯一的。 1. 限制性内切酶一般保存在（）浓度的甘油溶液中。C 50% A. 10% B.20% C.50% D.60%